Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Vi är tacksamma för finansiering från NCI Ovarian Cancer SPORE Program P50CA228991, postdoktoralt utbildningsprogram 5T32OD011089 och Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Projektet finansierades också delvis av subventioner för löpande utgifter till privata institutioner för högre utbildning från Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.

Alla procedurer och experiment med möss utfördes enligt protokoll som godkänts av Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. För alla procedurer användes lämplig personlig skyddsutrustning, inklusive handskar och engångsisoleringsrockar. Försiktighetsåtgärder vidtogs vid hantering av vassa föremål, som kastades korrekt i behållare för vassa föremål i röda lådor omedelbart efter användning. Se materialtabellen för detaljer om allt material och utrustning som används i detta protokol...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Detta protokoll undersöker användbarheten av ultraljud för att bedöma livmodermorfologiska förändringar i progressionen av adenokarcinom i livmodern hos möss. I denna studie, genom att följa induktionen av endometriecancer hos möss i längdriktningen, visade sig de anatomiska detaljerna detekterade med ultraljud vara indikatorer på grov och histologisk patologi. Detta öppnar dörren för användning av longitudinella studier med mindre antal möss som övervakas med ultraljud vid flera tidpunkter för att föl...

Möss är fortfarande en av de viktigaste djurmodellerna för reproduktionsstörningar 1,2,3. Det finns flera genetiskt modifierade eller inducerade gnagarmodeller av äggstocks- och livmodercancer. Dessa studier förlitar sig vanligtvis på flera kohorter som avlivas vid olika tidpunkter för att fånga longitudinella trender i morfologiska och patologiska förändringar. Detta förhindrar möjligheten att förvärva kontinuerliga data om cancerutveckling i en enskild mus. Dessutom, utan att känna till det individuella mussjukdomsprogressionstillståndet, baseras interventionsstudier på förutbestämda tidpunkter och genomsnittliga fynd från tidigare kohorter snarare än individuella tröskelvärden för detektion av progression i ett specifikt djur 4,5. Därför behövs avbildningsmetoder som möjliggör longitudinell bedömning i levande djur för att underlätta prekliniska modeller för testning av nya läkemedel eller föreningar och påskynda förståelsen av patobiologi samtidigt som noggrannheten och reproducerbarheten ökar6.
Ultraljud (US) är en tilltalande metod för longitudinell övervakning av mus livmodercancer progression eftersom det är relativt enkelt och billigt jämfört med andra avbildningsmetoder, är lätt att utföra och kan ha anmärkningsvärd upplösning 6,7. Denna icke-invasiva modalitet kan fånga funktioner till mikronskalan hos vakna möss eller med möss under kort sedering med hjälp av en 5-10 minuters undersökning. Ultraljudsmikroskopi har validerats som en metod för att mäta musäggstocksfollikelutveckling 8 och tillväxten av implanterad eller inducerad neoplasi 9,10,11. Högfrekvent US har också använts för perkutana intrauterina injektioner12 och observera råtta livmoderförändring under estrus cykeln13. Högfrekvent US kan användas med möss som hålls på specialiserade stationära plattformar med hjälp av ett skensystem för att hålla givaren / sonden för att fånga högupplösta bilder med standardiserad position och tryck; Denna utrustning är dock inte tillgänglig på alla institutioner. Handhållna givarskanningsmetoder kan användas med mindre dedikerad utrustning och användas för både klinisk diagnostik och forskningsapplikationer på möss.
Frågan kvarstår om amerikansk avbildning med handhållna, högfrekventa sonder kan användas för att övervaka utvecklingen av livmodercancer under flera veckor. I likhet med tarmarna är gnagarens livmoder en tunnväggig, smal struktur som är mycket mobil i buken och gränsar till flera vävnadsdjup, vilket gör avbildning mer utmanande än med relativt orörliga organ som njurarna. Denna studie syftade till att fastställa korrelationen mellan vävnader observerade med ultraljud och histopatologi, definiera landmärken för att lokalisera livmodern hos mössen och bestämma genomförbarheten av den longitudinella bedömningen av endometriecancer. Denna studie presenterar data som visar en kvalitativ överensstämmelse mellan utseendet på livmoder avbildad av USA och histopatologi, samt seriell avbildning av möss under flera veckor. Dessa resultat indikerar att handhållen USA kan användas för att övervaka utvecklingen av endometriecancer hos möss, vilket skapar en möjlighet att samla in individuella longitudinella musdata för att studera livmodercancer utan behov av dedikerad utrustning.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Livmodercancer kan studeras hos möss på grund av enkel hantering och genetisk manipulation i dessa modeller. Dessa studier är emellertid ofta begränsade till att bedöma patologi efter slakt hos djur som avlivas vid flera tidpunkter i olika kohorter, vilket ökar antalet möss som behövs för en studie. Bildande möss i longitudinella studier kan spåra sjukdomsprogressionen hos enskilda djur, vilket minskar antalet möss som behövs. Framsteg inom ultraljudsteknik har möjliggjort detektering av förändringar på mikrometernivå i vävnader. Ultraljud har använts för att studera follikelmognad i äggstockar och xenografttillväxt men har inte tillämpats på morfologiska förändringar i livmodern hos möss. Detta protokoll undersöker sammanställningen av patologi med in vivo-avbildningsjämförelser i en inducerad endometriecancermusmodell. De egenskaper som observerades av ultraljud överensstämde med graden av förändring som ses av grov patologi och histologi. Ultraljud visade sig vara mycket prediktivt för den observerade patologin, vilket stöder införlivandet av ultraljud i longitudinella studier av livmodersjukdomar som cancer hos möss.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten dubbel deletion (iPAD) transgena möss bibehölls på en blandad genetisk bakgrund (129S, BALB/C, C57BL/6), som tidigare beskrivits14. Mössen matades alla med ett doxycyklinfoder i 2 veckor för att inducera Cre-rekombinas. I tidigare arbete av vår grupp doserades doxycyklin genom sondmatning14; Men i den här aktuella studien fungerade doxycyklinmatningsinduktionsmetoden effektivt och minskade sondmatningsstressen för mössen. Det ...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Detta protokoll beskriver en metod för att övervaka utvecklingen av morfologiska förändringar över tid i livmodern i en inducerbar musmodell av endometriecancer med hjälp av ultraljudsavbildning med korrelation till grova och histologiska förändringar.

Icke-invasiv ultraljudsbedömning av endometriecancerprogression i Pax8-riktad deletion av tumörsuppressorerna Arid1a och Pten hos möss

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Denna studie visar att manuellt styrt ultraljud är väl lämpat för att övervaka utvecklingen av livmoderpatologi i en inducerad musmodell av endometriecancer. Ultraljudsavbildning är icke-invasiv och möjliggör därmed longitudinella studier av enskilda möss över dagar och veckor. Detta gör det möjligt att fånga individuell variation och i slutändan att färre djur används för studier.Denna metod kan lätt tillämpas för att övervaka patologiska förändringar och andra speglingsmodeller, inklusive de för neoplasi och kronisk sjukdom i urin- och matsmältningskanalen. Börja ställa in ultraljudsmaskinen för avbildning av livmodern eller äggstocken genom att välja en givare eller sond med ett intervall på 32 till 56 megahertz. Gå till fliken Program från startskärmen och välj Mus, litet bukläge.Klicka sedan på Scan för att återgå till startskärmen och vänta tills en levande bild visas. Välj sedan B-läge från alternativen i det vänstra verktygsfältet innan du klickar på Fler kontroller för att visa ytterligare verktyg för bildförfining, till exempel bildförstärkning och djup eller för att justera inställningarna för klippförvärv, till exempel antalet bilder per sekund. När bildinställningarna har valts återgår du till startskärmen genom att klicka på B-läge.Placera en tre till 10 ml spruta fylld med en steril isotonisk vätskelösning mellan en värmedyna och en absorberande dyna i flera minuter för att förvärma den till 35 till 40 grader Celsius. Om maskinen inte har en varmare, placera en flaska ultraljudsgel på värmedynan. För att injicera en till två milliliter lösning i bukhålan hos en mus, säkra musen med skrubben i ena handen och exponera ventrummet.Håll sedan musen i ungefär 20 graders vinkel med näsan riktad mot golvet. Sätt in en 25-gauge tuberkulinsprutnål genom huden och bukväggen i bukens kaudala högra kvadrant. För att undvika injektion i kärlen eller mag-tarmkanalen, dra tillbaka sprutkolven med minimalt tryck för att leta efter blod.Placera musen i ventral liggande liggande på den absorberande dynan över en värmedyna innan du placerar en gnagarkon över musens nos och nosparti. Placera en liten mängd förvärmd ultraljudsgel abaxial mot ryggraden på vardera sidan av den bedövade musen mellan det sista revbenet och bäckenet. Sätt en liten mängd gel på ultraljudssonden.Placera sedan sonden parallellt med ryggkotorna med sondens framsida på kranialsidan. Med en mus i ventral liggande, skanna långsamt området för njurens landmärke. Med njuren i sikte, dra sonden caudal för att hitta äggstocken, som är en något hyperechoic oval till rund struktur inom en mycket hyperechoic ovarian fettkudde, gränsad kranial-ventralt av njuren och dorsal-lateralt av dorsala bukväggen.Förbättra bildkontrasten genom att justera signalförstärkningen med skjutreglaget längst ner på kontrollskärmen. För att förbättra avbildningen av njurarna, tryck på den kontralaterala buken med ett finger. Variera trycket och vinkeln från parallellt med ryggraden till cirka 20 grader ventralt.När organet av intresse är i sikte, spela in en video genom att klicka på Spara klipp or Starta inspelning. När du är klar klickar du på Stoppa inspelning för att behålla bilder med ett förinställt antal bilder. Håll sonden kaudalt tills äggstocken är i den mest kraniala aspekten av synfältet.Variera sondtrycket och vinkeln för att se och avbilda livmodern. Upprepa video- och ramsamling för varje organ av intresse. Hitta livmodern som löper i längdriktningen längs den dorsala bukväggen med den laterala benmuskulaturen i sikte.Övervaka vävnaden för en peristaltisk rörelse för att skilja tarmslingorna från livmoderns stationära horn. Placera musen i ryggläge för att samla in bilderna från en ventral strategi. Se till att ögonsmörjningen är tillräcklig och nospartiet är säkrat i noskonen.Applicera en liten mängd förvärmd ultraljudsgel på den ventrala buken innan du applicerar sonden vid mittlinjen och kranialen i pubis för att lokalisera blåsan som ett hypoekoiskt landmärke. För att hitta livmoderhornen, dra sonden lateralt mot blåsan. Applicera lätt digitalt tryck från en eller båda sidor av musen.När livmoderhornen är i synfältet, håll sonden vinkelrätt mot musen och skanna båda sidor av buken för att fånga tvärgående vyer av båda hornen. Rotera sonden för att fånga sagittala vyer. Efter ultraljudet, torka musen med en pappershandduk innan du sätter tillbaka den i buret för att återhämta sig.När musen är helt vaken efter två till fem minuter, sätt tillbaka musen i djurrummet. Ultraljudsbildjämförelsen av musens bukhåla före och efter saltlösningsinjektionen visade förbättrad visualisering av bukorganen, inklusive livmodern och äggstockarna efter saltlösningsinjektionen. Ett ventralt tillvägagångssätt användes för att studera tvärsnitten av livmoderhornen intill hypoekoblåsan.Immunhistokemi med antikroppar riktade mot Arid1a och Pten användes för att studera den adekvata tumörsuppressorproteinförlusten som uppnåddes i livmoderepitelcellerna jämfört med den närliggande stromavävnaden. Ultraljudsbilder av en mus livmoder med tidiga patologiska förändringar upptäcktes efter tre veckors doxycyklinbehandling, vilket visar livmoderns hypoechoiska och dilaterade lumen. I den grova patologi- och histopatologiska studien av samma livmoder observerades en mindre men dilaterad tunnväggig livmoder respektive tidig endometriehyperplasi med bevarande av det distinkta lumenet.Mössen som avlivades vid senare tidpunkter visade större livmoder med en mindre lumen och en förtjockad vägg. När man lär sig att använda manuell placering av sonder kan överdrivet tryck eller snabb rörelse göra organidentifiering svårt. Använd mjuka, avsiktliga rörelser och fokusera på att identifiera de organ som är landmärken först.Vid studiens slutpunkt offras möss och vävnad samlas in för att bekräfta genknockdown och karakterisera vävnadsförändringar. Denna teknik gör det möjligt för utredare att övervaka intraabdominala lesioner över tiden. Och i vårt fall använde vi det för att övervaka livmodercancerprogressionen i iPad-modellen, som vi sedan bekräftade genom histopatologi.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal skiva Tumör Modell: Visualisering och kvantifiering av genuttryck och tumör invasiv använda genetiska mosaiker

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR bedömning av pH, pO2, Redox Status, och koncentrationer av fosfat och glutation i den tumör mikromiljö

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Radionuklid-fluorescens Reporter gen Imaging för att spåra tumör Progression i gnagare tumör modeller

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Användningen av ultraljud guidade vävnad-regisserad cellulära Implantation för etableringen av biologiskt relevanta metastaserande tumör xenograft

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Anrikning och karakterisering av de tumör immun och icke-immun mikromiljö i etablerade subkutan murina tumörer

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digitala polymeras Chain Reaction Assay för den genetiska variationen i en sporadisk familjär adenomatös polypos Patient med formatet Chip-i-ett-rör

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal inokulering av skivepitelcancer celler i möss för tumör immun profilering och svar bedömning

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo-hämning av mikroRNA för att minska tumörtillväxten hos möss

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Upptäckt av lungtumörprogression hos möss av ultraljudsavbildning

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...