Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

NCI Yumurtalık Kanseri SPORE Programı P50CA228991, doktora sonrası eğitim programı 5T32OD011089 ve Richard W. TeLinde Vakfı, Johns Hopkins Üniversitesi'nden fon sağladıkları için minnettarız. Proje ayrıca kısmen Japonya Özel Okulları için Teşvik ve Karşılıklı Yardım Kurumu'ndan Özel Yüksek Öğretim Kurumlarına yapılan cari harcamalar için sübvansiyonlarla finanse edildi.

Fareleri içeren tüm prosedürler ve deneyler, Johns Hopkins Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanan protokollere göre gerçekleştirildi. Tüm prosedürler için, eldivenler ve tek kullanımlık izolasyon önlükleri de dahil olmak üzere uygun KKD giyildi. Kullanımdan hemen sonra kırmızı kutu keskin kaplara uygun şekilde atılan keskinleri kullanırken önlemler alındı. Bu protokolde kullanılan tüm malzemeler ve ekipmanlar hakkında ayrıntılar için Malzeme Tablosuna ...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Bu protokol, farelerde uterusta adenokarsinomun ilerlemesindeki uterus morfolojik değişikliklerini değerlendirmek için ultrasonun yararlılığını incelemektedir. Bu çalışmada, farelerde endometriyal kanser indüksiyonunu uzunlamasına takip ederek, ultrasonografi ile saptanan anatomik detayların kaba ve histolojik patolojinin göstergeleri olduğu bulunmuştur. Bu, farelerde rahim kanserlerinin ilerlemesini takip etmek için birden fazla zaman noktasında ultrason tarafından izlenen daha az sayıda fare ile u...

Fareler üreme bozuklukları için en önemli hayvan modellerinden biri olmaya devam etmektedir 1,2,3. Yumurtalık ve rahim kanserlerinin genetiği değiştirilmiş veya indüklenmiş birkaç kemirgen modeli vardır. Bu çalışmalar tipik olarak, morfolojik ve patolojik değişikliklerdeki uzunlamasına eğilimleri yakalamak için farklı zaman noktalarında ötenazi yapılan çoklu kohortlara dayanmaktadır. Bu, tek bir farede kanser gelişimi hakkında sürekli veri elde etme yeteneğini önler. Ek olarak, bireysel fare hastalığı ilerleme durumunu bilmeden, müdahale çalışmaları, belirli bir hayvanda ilerlemenin tespiti için bireysel eşiklerden ziyade, önceden belirlenmiş zaman noktalarına ve önceki kohortların ortalama bulgularına dayanmaktadır 4,5. Bu nedenle, canlı hayvanlarda uzunlamasına değerlendirmeye izin veren görüntüleme yaklaşımları, yeni ilaçların veya bileşiklerin test edilmesi için preklinik modelleri kolaylaştırmak ve patobiyolojinin anlaşılmasını hızlandırmak ve aynı zamanda titizliği ve tekrarlanabilirliği arttırmak için gereklidir6.
Ultrason görüntüleme (US), fare rahim kanseri progresyonunun uzunlamasına izlenmesi için çekici bir yöntemdir, çünkü diğer görüntüleme yöntemlerine kıyasla nispeten kolay ve ucuzdur, gerçekleştirilmesi kolaydır ve dikkate değer bir çözünürlüğe sahip olabilir 6,7. Bu non-invaziv modalite, uyanık farelerde veya 5-10 dakikalık bir muayene kullanarak kısa sedasyon altındaki farelerde mikron ölçeğindeki özellikleri yakalayabilir. Ultrason mikroskopisi, fare yumurtalık folikülü gelişimini ölçmek için bir yöntem olarak doğrulanmıştır 8 ve implante edilmiş veya indüklenmiş neoplazinin büyümesi 9,10,11. Yüksek frekanslı US ayrıca perkütan intrauterin enjeksiyonlar12 ve östrus döngüsü13 boyunca sıçan uterus değişimini gözlemlemek için de kullanılmıştır. Yüksek frekanslı US, standartlaştırılmış konum ve basınçla yüksek çözünürlüklü görüntüler yakalamak için dönüştürücüyü/probu tutmak için bir ray sistemi kullanan özel sabit platformlarda tutulan farelerle kullanılabilir; ancak, bu ekipman tüm kurumlarda mevcut değildir. El tipi transdüser tarama yöntemleri, daha az özel ekipmanla benimsenebilir ve farelerde hem klinik teşhis hem de araştırma uygulamaları için kullanılabilir.
Soru, elde tutulan, yüksek frekanslı problarla ABD görüntülemenin birkaç hafta boyunca uterus kanseri gelişimini izlemek için kullanılıp kullanılamayacağı sorusudur. Bağırsaklara benzer şekilde, kemirgen uterusu, karın içinde çok hareketli olan ve çoklu doku derinlikleri boyunca bitişik olan ince duvarlı, ince bir yapıdır ve görüntülemeyi böbrekler gibi nispeten hareketsiz organlardan daha zor hale getirir. Bu çalışma, ultrason ve histopatoloji ile gözlenen dokular arasındaki korelasyonu belirlemeyi, fare rahminin yerini belirlemek için işaretleri tanımlamayı ve endometriyal kanserin uzunlamasına değerlendirmesinin fizibilitesini belirlemeyi amaçlamıştır. Bu çalışma, US tarafından görüntülenen uterusun görünümü ile histopatoloji arasında kalitatif bir yazışma olduğunu gösteren verilerin yanı sıra farelerin birkaç hafta boyunca seri görüntülemesini sunmaktadır. Bu sonuçlar, elde tutulan US'nin farelerde endometriyal kanser gelişimini izlemek için kullanılabileceğini ve böylece özel ekipmana ihtiyaç duymadan rahim kanserini incelemek için bireysel fare uzunlamasına verilerini toplamak için bir fırsat yarattığını göstermektedir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Rahim kanserleri, bu modellerde kullanım kolaylığı ve genetik manipülasyon nedeniyle farelerde incelenebilir. Bununla birlikte, bu çalışmalar genellikle farklı kohortlarda birden fazla zaman noktasında ötenazi yapılan hayvanlarda ölüm sonrası patolojiyi değerlendirmekle sınırlıdır, bu da bir çalışma için gereken fare sayısını arttırır. Uzunlamasına çalışmalarda fareleri görüntülemek, bireysel hayvanlarda hastalığın ilerlemesini izleyebilir ve ihtiyaç duyulan fare sayısını azaltabilir. Ultrason teknolojisindeki ilerlemeler, dokulardaki mikrometre seviyesindeki değişikliklerin tespit edilmesini sağlamıştır. Ultrason, yumurtalıklarda folikül olgunlaşmasını ve ksenogreft büyümesini incelemek için kullanılmıştır, ancak fare uterusundaki morfolojik değişikliklere uygulanmamıştır. Bu protokol, indüklenmiş endometriyal kanser fare modelinde patolojinin in vivo görüntüleme karşılaştırmaları ile yan yana gelmesini inceler. Ultrason ile gözlenen özellikler, brüt patoloji ve histoloji tarafından görülen değişim derecesi ile tutarlıydı. Ultrasonografinin, gözlenen patolojinin oldukça prediktif olduğu ve ultrasonografinin farelerde kanser gibi uterus hastalıklarının uzunlamasına çalışmalarına dahil edilmesini desteklediği bulunmuştur.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten çift delesyonlu (iPAD) transgenik fareler, daha önce tarif edildiği gibi karışık bir genetik arka plan (129S, BALB / C, C57BL / 6) üzerinde tutuldu14. Farelerin hepsi, Cre rekombinazını indüklemek için 2 hafta boyunca bir doksisiklin yemi ile beslendi. Grubumuz tarafından yapılan önceki çalışmalarda, doksisiklin gavage14 ile dozlandı; Bununla birlikte, bu güncel çalışmada, doksisiklin yem indüksiyon yöntemi veri...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Bu protokol, endometriyal kanserin indüklenebilir bir fare modelinde, brüt ve histolojik değişikliklerle korelasyonlu ultrason görüntüleme kullanarak uterusta morfolojik değişikliklerin zaman içindeki ilerlemesini izlemek için bir yöntem açıklamaktadır.

Farelerde Tümör Baskılayıcıları Arid1a ve Pten'in Pax8'e Yönelik Delesyonunda Endometriyal Kanser Progresyonunun Non-İnvaziv Ultrason Değerlendirmesi

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Bu çalışma, manuel kılavuzlu ultrasonun, endometriyal kanserin indüklenmiş bir fare modelinde uterus patolojisinin gelişimini izlemek için çok uygun olduğunu göstermektedir. Ultrason görüntüleme noninvazivdir ve bu nedenle günler ve haftalar boyunca bireysel farelerin uzunlamasına çalışmalarına izin verir. Bu, bireysel varyasyonun yakalanmasına ve sonuçta çalışma için daha az hayvanın kullanılmasına izin verir.Bu yöntem, patolojik değişiklikleri ve neoplazi ve idrar ve sindirim sisteminin kronik hastalıkları da dahil olmak üzere diğer yansıtma modellerini izlemek için kolayca uygulanabilir. 32 ila 56 megahertz aralığında bir dönüştürücü veya prob seçerek uterus veya yumurtalık görüntülemek için ultrason makinesini kurmaya başlayın. Ana ekrandan Uygulamalar sekmesine gidin ve Fare Küçük Karın Modu'nu seçin.Ardından ana ekrana dönmek için Tara'ya tıklayın ve canlı bir görüntünün görüntülenmesini bekleyin. Ardından, görüntü kazancı ve derinliği gibi görüntü iyileştirmeye yönelik ek araçları görüntülemek veya saniyedeki kare sayısı gibi klip alma ayarlarını yapmak için Diğer Kontroller seçeneğine tıklamadan önce sol araç çubuğundaki seçeneklerden B Modu'nu seçin. Görüntü ayarları seçildikten sonra, B Modu'na tıklayarak ana ekrana dönün.35 ila 40 santigrat dereceye kadar önceden ısıtmak için birkaç dakika boyunca bir ısıtma yastığı ile emici bir ped arasına steril bir izotonik sıvı çözeltisi ile doldurulmuş üç ila 10 mililitrelik bir şırınga yerleştirin. Makinede ısıtıcı yoksa, ısıtma yastığına bir şişe ultrason jeli yerleştirin. Bir farenin periton boşluğuna bir ila iki mililitre çözelti enjekte etmek için, fareyi bir elinizle tırnağıyla sabitleyerek ventrumu açığa çıkarın.Ardından, fareyi burun yere bakacak şekilde yaklaşık 20 derecelik bir açıyla tutun. Karnın kaudal sağ kadranının derisinden ve karın duvarından 25 gauge tüberkülin şırınga iğnesi yerleştirin. Vaskülatür veya GI kanalına enjeksiyondan kaçınmak için, kan aramak için şırınga pistonunu minimum basınçla geri çekin.Bir kemirgen burun konisini farenin burnuna ve namlusuna güvenli bir şekilde yerleştirmeden önce fareyi emici pedin üzerine bir ısıtma yastığının üzerine ventral yatışta konumlandırın. Anestezi uygulanan farenin her iki tarafındaki omurgaya az miktarda önceden ısıtılmış ultrason jeli abaksiyelini son kaburga ve pelvis arasına yerleştirin. Ultrason probu üzerine az miktarda jel koyun.Daha sonra, probu omurlara paralel olarak, probun önü kraniyal tarafta olacak şekilde yerleştirin. Ventral yatışta bir fare ile, böbrek dönüm noktası için bölgeyi yavaşça tarayın. Böbrek göz önünde bulundurulduğunda, çok hiperekoik bir yumurtalık yağ yastığı içinde hafif hiperekoik oval ila yuvarlak bir yapı olan yumurtalığı bulmak için prob kaudalını çekin, böbrek tarafından kraniyal-ventralal olarak sınırlanmış ve dorsal-lateral olarak dorsal karın duvarı tarafından.Kontrol ekranının altındaki kaydırıcıyı kullanarak sinyal kazancını ayarlayarak görüntü kontrastını iyileştirin. Böbreğin görüntülenmesini iyileştirmek için, bir parmağınızı kullanarak kontra-lateral karın bölgesine basınç uygulayın. Basıncı ve açıyı omurgaya paralelden yaklaşık 20 derece ventral'e kadar değiştirin.İlgilendiğiniz organ görüntülendikten sonra, Klibi Kaydet veya Kaydı Başlat'a tıklayarak bir video çekin. İşiniz bittiğinde, görüntüleri önceden ayarlanmış sayıda karede tutmak için Kaydı Durdur'u tıklayın. Probu, yumurtalık görüş alanının en kafatası yönünde olana kadar kaudal olarak tutun.Uterusu görüntülemek ve görüntülemek için prob basıncını ve açısını değiştirin. İlgilendiğiniz her organ için video ve kare koleksiyonunu tekrarlayın. Dorsal karın duvarı boyunca uzunlamasına uzanan uterusu, lateral bacak kas yapısı görünürken bulun.Bağırsak halkalarını uterus sabit boynuzlarından ayırt etmek için dokuyu peristaltik bir hareket için izleyin. Görüntüleri ventral bir yaklaşımdan toplamak için fareyi dorsal yatışa yerleştirin. Göz yağlamasının yeterli olduğundan ve namlunun burun konisine sabitlendiğinden emin olun.Mesaneyi hipoekoik bir dönüm noktası olarak bulmak için probu pubisin orta hattına ve kraniyaline uygulamadan önce ventral karnına az miktarda önceden ısıtılmış ultrason jeli uygulayın. Rahim boynuzlarını bulmak için, probu mesaneye lateral olarak çekin. Farenin iki tarafından veya her iki tarafından hafif dijital basınç uygulayın.Rahim boynuzları görüş alanına girdikten sonra, probu fareye dik tutun ve her iki boynuzun enine görünümlerini yakalamak için karnın her iki tarafını da tarayın. Sagital görünümleri yakalamak için probu döndürün. Ultrasondan sonra, iyileşmek için kafesine geri döndürmeden önce fareyi bir kağıt havluyla silin.Fare iki ila beş dakika sonra tamamen uyandığında, fareyi hayvan odasına geri getirin. Salin enjeksiyonundan önce ve sonra fare karın boşluğunun ultrason görüntüsü karşılaştırması, salin enjeksiyonundan sonra uterus ve yumurtalıklar da dahil olmak üzere karın organlarının daha iyi görselleştirilmesini gösterdi. Hipoekoik mesaneye bitişik uterus boynuzlarının kesitlerini incelemek için ventral bir yaklaşım kullanıldı.Arid1a ve Pten'e karşı antikorlara yönelik immünohistokimya, komşu stromal dokuya kıyasla uterus epitel hücrelerinde gerçekleştirilen yeterli tümör baskılayıcı protein kaybını incelemek için kullanıldı. Erken patoloji değişiklikleri olan bir fare uterusunun ultrason görüntüleri, uterusun hipoekoik ve dilate lümenini gösteren üç haftalık doksisiklin tedavisinden sonra tespit edildi. Aynı uterusun brüt patolojisi ve histopatolojisi çalışmasında, sırasıyla daha küçük fakat genişlemiş ince duvarlı uterus ve belirgin lümenin korunması ile erken endometrial hiperplazi gözlendi.Daha sonraki zaman noktalarında ötenazi yapılan fareler, daha küçük bir lümen ve kalınlaşmış bir duvar ile daha büyük uterus gösterdi. Probların manuel olarak yerleştirilmesini kullanmayı öğrenirken, aşırı basınç veya hızlı hareket organ tanımlamayı zorlaştırabilir. Nazik, kasıtlı hareketler kullanın ve önce yer işaretleri olan organları tanımlamaya odaklanın.Çalışma sonunda, fareler kurban edilir ve gen yıkımını doğrulamak ve doku değişikliklerini karakterize etmek için doku toplanır. Bu teknik, araştırmacıların zaman içinde intraabdominal lezyonları izlemelerini sağlar. Ve bizim durumumuzda, iPad modelinde rahim kanseri ilerlemesini izlemek için kullandık, daha sonra histopatoloji ile doğruladık.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

<em&gt; Drosophila</em&gt; Hayali Disk Tümör Modeli: Genetik Mozaikler kullanma Gen İfade ve Tümör invazivliğinin Görselleştirme ve

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

Vivo EPR pH, pO2, Redox durumu ve fosfat konsantrasyonları ve glutatyon tümör Microenvironment olarak değerlendirilmesi

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Kemirgen tümör modelleri ilerlemesinde tümör izlemek için Imaging radyonüklid Floresans muhabir gen

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Zenginleştirme ve kurulan subkutan fare tümör tümör bağışıklık ve Non-immün Microenvironments karakterizasyonu

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Dijital polimeraz zincir reaksiyonu tahlil için tüp içinde çip biçimini kullanarak bir sporadik ailesel Adenomatous poliposis hastada genetik varyasyon

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Skuamöz Hücre Karsinomu Hücre Tümörü bağışıklık profil oluşturma için fareler ve tedaviye yanıt değerlendirme intramucosal aşı

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

Farelerde Tümör Büyümesini Azaltmak için MikroRNA'nın Vivo İnhibisyonu

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Ultrason Görüntüleme ile Farelerde Akciğer Tümörü İlerlemesinin Saptanması

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...