Name: production of modified autologous conditioned serum and ex vivo assessment of its healing potential in murine corneal epithelium
Uploaded: 2023-03-24T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium at JoVE.com

저자는 훌륭한 기술 지원을 해준 Ya-Lan Chien과 Chia-Ying Lee, 그리고 언어판에 대해 OnLine English 회사에 감사드립니다. 이 연구는 Chang Gung Medical Research Project(보조금 번호 CMRPG3L1491)에서 부분적으로 자금을 지원했습니다.

연구는 프로토콜 섹션의 시작 부분에 있는 기관 지침에 따라 수행되었습니다. 모든 프로토콜과 절차는 헬싱키 선언에 따라 수행되었으며 Chang Gung Medical Foundation Institutional Review Board의 검토 및 승인을 받았습니다. 모든 지원자는 이 연구의 성격에 대해 통보받았고 포함되기 전에 정보에 입각한 동의서에 서명했습니다. 전체 실험 절차에 필요한 소모품은 그림 1 과 <strong class="...

<ol>
	<li>Fox, R. I., Chan, R., Michelson, J. B., Belmont, J. B., Michelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effect+of+artificial+tears+made+with+autologous+serum+in+patients+with+keratoconjunctivitis+sicca.">Beneficial effect of artificial tears made with autologous serum in patients with keratoconjunctivitis sicca.</a> Arthritis and Rheumatology. 27 (4), 459-461 (1984).</li><li>Noble, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+autologous+serum+eye+drops+with+conventional+therapy+in+a+randomised+controlled+crossover+trial+for+ocular+surface+disease.">Comparison of autologous serum eye drops with conventional therapy in a randomised controlled crossover trial for ocular surface disease.</a> The British Journal of Ophthalmology. 88 (5), 647-652 (2004).</li><li>Bradley, J. C., Bradley, R. H., McCartney, D. L., Mannis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+growth+factor+analysis+in+dry+eye+syndrome.">Serum growth factor analysis in dry eye syndrome.</a> Clinical &amp; Experimental Ophthalmology. 36 (8), 717-720 (2008).</li><li>Alshammari, T. M., Al-Hassan, A. A., Hadda, T. B., Aljofan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+different+serum+sample+extraction+methods+and+their+suitability+for+mass+spectrometry+analysis.">Comparison of different serum sample extraction methods and their suitability for mass spectrometry analysis.</a> Saudi Pharmaceutical Journal. 23 (6), 689-697 (2015).</li><li>Tsubota, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+dry+eye+by+autologous+serum+application+in+Sj&#246;gren's+syndrome.">Treatment of dry eye by autologous serum application in Sj&#246;gren's syndrome.</a> The British Journal of Ophthalmology. 83 (4), 390-395 (1999).</li><li>Urzua, C. A., Vasquez, D. H., Huidobro, A., Hernandez, H., Alfaro, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+double-blind+clinical+trial+of+autologous+serum+versus+artificial+tears+in+dry+eye+syndrome.">Randomized double-blind clinical trial of autologous serum versus artificial tears in dry eye syndrome.</a> Current Eye Research. 37 (8), 684-688 (2012).</li><li>Cui, D., Li, G., Akpek, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+serum+eye+drops+for+ocular+surface+disorders.">Autologous serum eye drops for ocular surface disorders.</a> Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 21 (5), 493-499 (2021).</li><li>Jirsova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+application+of+autologous+serum+eye+drops+in+severe+dry+eye+patients;+subjective+and+objective+parameters+before+and+after+treatment.">The application of autologous serum eye drops in severe dry eye patients; subjective and objective parameters before and after treatment.</a> Current Eye Research. 39 (1), 21-30 (2014).</li><li>Pan, Q., Angelina, A., Marrone, M., Stark, W. J., Akpek, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+serum+eye+drops+for+dry+eye.">Autologous serum eye drops for dry eye.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. 2 (2), (2017).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+serum+eye+drops+versus+artificial+tear+drops+for+dry+eye+disease:+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+randomized+controlled+trials.">Autologous serum eye drops versus artificial tear drops for dry eye disease: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials.</a> Ophthalmic Research. 63 (5), 443-451 (2020).</li><li>Soni, N. G., Jeng, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood-derived+topical+therapy+for+ocular+surface+diseases.">Blood-derived topical therapy for ocular surface diseases.</a> The British Journal of Ophthalmology. 100 (1), 22-27 (2016).</li><li>Solomon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=anti-inflammatory+forms+of+interleukin-1+in+the+tear+fluid+and+conjunctiva+of+patients+with+dry-eye+disease.">anti-inflammatory forms of interleukin-1 in the tear fluid and conjunctiva of patients with dry-eye disease.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 42 (10), 2283-2292 (2001).</li><li>Meijer, H., Reinecke, J., Becker, C., Tholen, G., Wehling, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+production+of+anti-inflammatory+cytokines+in+whole+blood+by+physico-chemical+induction.">The production of anti-inflammatory cytokines in whole blood by physico-chemical induction.</a> Inflammation Research. 52 (10), 404-407 (2003).</li><li>Bielory, B. P., Shah, S. P., O'Brien, T. P., Perez, V. L., Bielory, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapeutics+for+ocular+surface+disease.">Emerging therapeutics for ocular surface disease.</a> Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. 16 (5), 477-486 (2016).</li><li>Stevenson, W., Chauhan, S. K., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dry+eye+disease:+an+immune-mediated+ocular+surface+disorder.">Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder.</a> Archives of Ophthalmology. 130 (1), 90-100 (2012).</li><li>Yang, J., Guo, A., Li, Q., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-rich+plasma+attenuates+interleukin-1&#946;-induced+apoptosis+and+inflammation+in+chondrocytes+through+targeting+hypoxia-inducible+factor-2&#945;.">Platelet-rich plasma attenuates interleukin-1&#946;-induced apoptosis and inflammation in chondrocytes through targeting hypoxia-inducible factor-2&#945;.</a> Tissue and Cell. 73, 101646 (2021).</li><li>Shakouri, S. K., Dolati, S., Santhakumar, J., Thakor, A. S., Yarani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+conditioned+serum+for+degenerative+diseases+and+prospects.">Autologous conditioned serum for degenerative diseases and prospects.</a> Growth Factors. 39 (1-6), 59-70 (2021).</li><li>Gull, M., Pasek, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+glycerol+and+its+derivatives+in+the+biochemistry+of+living+organisms,+and+their+prebiotic+origin+and+significance+in+the+evolution+of+life.">The role of glycerol and its derivatives in the biochemistry of living organisms, and their prebiotic origin and significance in the evolution of life.</a> Catalysts. 11 (1), 86 (2021).</li><li>Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflections+on+dry+eye+syndrome+treatment:+therapeutic+role+of+blood+products.">Reflections on dry eye syndrome treatment: therapeutic role of blood products.</a> Frontiers in Medicine. 5, 33 (2018).</li><li>Hung, K. H., Yeh, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+and+in+vivo+animal+models+for+mechanical+and+chemical+injuries+of+corneal+epithelium.">Ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium.</a> Journal of Visualized Experiments. (182), e63217 (2022).</li><li>Geerling, G., Maclennan, S., Hartwig, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+serum+eye+drops+for+ocular+surface+disorders.">Autologous serum eye drops for ocular surface disorders.</a> The British Journal of Ophthalmology. 88 (11), 1467-1474 (2004).</li><li>Rutgers, M., Saris, D. B., Dhert, W. J., Creemers, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+profile+of+autologous+conditioned+serum+for+treatment+of+osteoarthritis,+in+vitro+effects+on+cartilage+metabolism+and+intra-articular+levels+after+injection.">Cytokine profile of autologous conditioned serum for treatment of osteoarthritis, in vitro effects on cartilage metabolism and intra-articular levels after injection.</a> Arthritis Research &amp; Therapy. 12 (3), R114 (2010).</li><li>Antebi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+physiological+hypoxia+potentiates+the+therapeutic+function+of+mesenchymal+stem+cells.">Short-term physiological hypoxia potentiates the therapeutic function of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 9 (1), 265 (2018).</li><li>Chen, Y. M., Wang, W. Y., Lin, Y. C., Tsai, S. H., Lou, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+autologous+serum+eye+drops+with+contact+lenses+in+the+treatment+of+chemical+burn-induced+bilateral+corneal+persistent+epithelial+defects.">Use of autologous serum eye drops with contact lenses in the treatment of chemical burn-induced bilateral corneal persistent epithelial defects.</a> BioMed Research International. 2022, 6600788 (2022).</li><li>Diaz-Valle, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+efficacy+of+topical+insulin+with+autologous+serum+eye+drops+in+persistent+epithelial+defects+of+the+cornea.">Comparison of the efficacy of topical insulin with autologous serum eye drops in persistent epithelial defects of the cornea.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (4), e912-e919 (2022).</li><li>Metheetrairut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+epitheliotrophic+factors+in+platelet-rich+plasma+versus+autologous+serum+and+their+treatment+efficacy+in+dry+eye+disease.">Comparison of epitheliotrophic factors in platelet-rich plasma versus autologous serum and their treatment efficacy in dry eye disease.</a> Scientific Reports. 12 (1), 8906 (2022).</li><li>NaPier, E., Camacho, M., McDevitt, T. F., Sweeney, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophic+keratopathy:+current+challenges+and+future+prospects.">Neurotrophic keratopathy: current challenges and future prospects.</a> Annals of Medicine. 54 (1), 666-673 (2022).</li><li>Garcia-Conca, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+treatment+of+hyposecretory+dry+eye+with+platelet-rich+plasma.">Efficacy and safety of treatment of hyposecretory dry eye with platelet-rich plasma.</a> Acta Ophthalmologica. 97 (2), e170-e178 (2019).</li><li>Gholian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+autologous+conditioned+serum+dressings+in+hard-to-heal+wounds:+a+randomised+prospective+clinical+trial.">Use of autologous conditioned serum dressings in hard-to-heal wounds: a randomised prospective clinical trial.</a> Journal of Wound Care. 31 (1), 68-77 (2022).</li><li>Raeissadat, S. A., Rayegani, S. M., Jafarian, N., Heidari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+conditioned+serum+applications+in+the+treatment+of+musculoskeletal+diseases:+a+narrative+review.">Autologous conditioned serum applications in the treatment of musculoskeletal diseases: a narrative review.</a> Future Science OA. 8 (2), 776 (2022).</li><li>Tokawa, P. K. A., Brossi, P. M., Baccarin, R. Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+conditioned+serum+in+equine+and+human+orthopedic+therapy:+A+systematic+review.">Autologous conditioned serum in equine and human orthopedic therapy: A systematic review.</a> Research in Veterinary Science. 146, 34-52 (2022).</li><li>Evans, C. H., Chevalier, X., Wehling, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+conditioned+serum.+Physical+Medicine+and+Rehabilitation.">Autologous conditioned serum. Physical Medicine and Rehabilitation.</a> Clinics of North America. 27 (4), 893-908 (2016).</li><li>Coskun, H. S., Yurtbay, A., Say, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+rich+plasma+versus+autologous+conditioned+serum+in+osteoarthritis+of+the+knee:+clinical+results+of+a+five-year+retrospective+study.">Platelet rich plasma versus autologous conditioned serum in osteoarthritis of the knee: clinical results of a five-year retrospective study.</a> Cureus. 14 (4), e24500 (2022).</li></ol>

이 연구에서는 mACS를 준비하기 위한 프로토콜을 설명하고 동물 모델의 상처 치유에서 mACS 점안액의 이점을 추가로 보여줍니다. 이 mACS 프로토콜의 중요한 수정은 각 시험관에 약 0.5mL의 10% 글리세롤 용액을 첨가하여 37°C에서 4시간 배양하는 동안 적절한 저산소 조건을 생성하는 것입니다. 이 설정은 AS에 적절한 스트레스를 제공하고 세포가 상처 치유에 도움이 되는 필요한 성장 인자를 분비하도?...

안구건조증에서 자가 혈청(AS)의 치료 효과는 1980년대 Fox et al.1에 의해 처음 보고되었습니다. 자연 눈물을 모방한 AS의 윤활 특성과 필수 상피친화성 생화학적 성분 모두 각막 상피 세포의 증식에 도움이 되는 것으로 믿어집니다. 지난 수십 년 동안 여러 연구가 이를 기반으로 수행되었습니다. 영양 성분은 표피 성장 인자 (EGF), 비타민 A, 형질전환 성장 인자 β (TGF-β) 및 다른 사이토카인을 포함한다. 흥미롭게도, 혈청은 TGF-β 및 비타민 A가 풍부하며, 이들은 표피 증식에 중추적인 역할을 하는 것으로 여겨진다 2,3,4,5. 또한, 안구 표면 질환 환자를 치료할 때, 여러 연구에서 환자가 보고한 결과, 기타 객관적인 안구건조증수치 6,7 및 세포 밀도와 같은 현미경적 소견에서 AS 점안액의 몇 가지 이점을 보여주었다8. 메타 분석 연구에 따르면 AS 점안액 치료로 환자의 증후군을 개선하는 데 몇 가지 이점이 있을 수 있지만 장기적인 결과와 관찰은 여전히부족합니다 9,10.
AS와 달리 혈소판 풍부 혈장(PRP)은 준비 중에 항응고제를 첨가하여 파생되며, 혈소판의 추가 차등 원심분리 및 화학적 활성화가 있습니다. AS와 비교하여 TGF-β, 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 및 EGF와 같은 수많은 화학 물질 및 성장 인자가 PRP에 존재합니다. 또한 안구 표면 질환에도 적용되어 증상 완화에 임상적 이점이 있다11.
상피 결함과 염증 사이의 교차 결합은 복잡합니다. 특히, 면역병태생리학은 안구 표면 질환의 또 다른 중요한 문제입니다. IL-1β 및 IFN-γ과 같은 전염증성 사이토카인은 염증성 캐스케이드에서 중추적인 매개체인 것으로 여겨진다12. 따라서 면역 메커니즘에 대한 이해를 바탕으로 새로운 치료 방법이 열립니다. 인터루킨-1 수용체 길항제(IL-1Ra) 및 기타 항염증성 사이토카인의 생산을 포함하여 이러한 염증 과정을 멈추게 하는 전략은 또한 안구 표면 질환에서 중요한 역할을 할 수 있다13,14,15.
1998년부터 상용화된 자가 컨디셔닝 혈청(ACS)인 오르토카인은 골관절염(OA), 류마티스 관절염(RA) 및 척추 질환을 앓고 있는 정형외과 환자에게 임상적으로 사용되어 왔다13. AS 및 PRP와 비교하여 화학적으로 코팅된 유리 비드로 처리하고 단핵구를 활성화하기 위한 저산소 배양은 ACS16의 특정 특징입니다. 이론적으로 세포에 생존 스트레스를 가함으로써 더 많은 항염증 인자를 분비할 수 있으며, 그 결과 IL-1Ra를 포함한 필수 면역 조절 성분의 농도가 높아집니다. AS와 비교하여 OA에서 ACS의 개선된 치료 효과 또한 보고되었다17. 안구 표면 질환은 어떤 면에서 정형외과적 염증성 질환과 유사한 면역 배경을 공유합니다. 따라서 정형외과 분야에서 인간 혈액 유래 치료의 성공적인 결과를 바탕으로 ACS는 상피친화성 및 면역 조절 특성에 의해 임상 실습에서 기존 치료법에 비해 이점을 가질 수 있습니다. ACS는 정형외과 염증성 질환에 널리 사용되어 왔지만 안과에서의 임상 적용은 여전히 탐색이 필요하며, 이는 높은 비용, 문헌 지원 부족, 준비 과정의 표준화 부족으로 인해 방해를 받을 수 있어 다양한 성능을 제공합니다.
이 비디오 기사에서는 변형된 ACS(mACS) 또는 성장 인자(PRGF)가 풍부한 혈장을 생성하여 상용화된 ACS에 필적하는 실용적인 가치를 지닌 점안액 용액을 생성하는 새롭고 비용 효율적이며 편리한 방법을 시연했습니다. 항응고제를 첨가하고 스트레스 배양을 통해 혈액 세포가 항염증성 사이토카인을 분비하도록 하는 핵심 아이디어는 유지되었지만 CrSO4 코팅 유리 구슬 및 상업용 키트를 기반으로 하는 방법과 같은 화학적 유도 방법과 달리 이 방법에서는 저산소 배양에 의해 임계 스트레스 상태가 물리적으로 유도됩니다. 또한, 글리세롤은 혈액 세포막의 안정성 증가, 적절한 삼투성 세포외액 압력의 유지(18), 세포에 과도한 스트레스를 주지 않는 저산소 상태에서 적절한 영양소 공급원을 포함하여 추가적인 이점을 제공하기 위해 첨가되었다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#160;96-well culture plate</td>
			<td>Merck KGaA, Germany</td>
			<td>CLS3997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer lid speculum</td>
			<td>katena</td>
			<td>K1-5355</td>
			<td>15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer needle holder</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K6-3310</td>
			<td>without lock&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barron Vacuum Punch 8.0 mm</td>
			<td>katena</td>
			<td>K20-2108</td>
			<td>for cutting filter paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 10.0 mL vacutainer tubes containing heparin 158 USP units</td>
			<td>Becton,Dickinson and Company, US</td>
			<td>367880</td>
			<td>At least 6 tubes, necessary to collect blood for subsequent experiments and to avoid blood agglutination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 21 G butterfly-winged infusion set</td>
			<td>Becton,Dickinson and Company, US</td>
			<td>367281</td>
			<td>For even distribution of glycerol solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice&#160;</td>
			<td>National Laboratory Animal Center</td>
			<td>RMRC11005</td>
			<td>for mouse model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo forceps 0.12 mm</td>
			<td>katena&#160;</td>
			<td>K5-2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf, Germany</td>
			<td>5811000428</td>
			<td>3,500 x g for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cheng Yi 10.0 mL sterilized eye dropper bottle</td>
			<td>Cheng Yi Chemical, Taiwan</td>
			<td>CP405141</td>
			<td>Must be sterile and as the storage container for the final product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal rust ring remover with 0.5 mm burr</td>
			<td>Algerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX</td>
			<td>CHI-675</td>
			<td>for debridement of the corneal epithelium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified minimal essential medium</td>
			<td>Merck KGaA, Germany</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper&#160;</td>
			<td>Toyo Roshi Kaisha,Ltd.</td>
			<td>1.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodium ophthalmic strips U.S.P</td>
			<td>OPTITECH</td>
			<td>OPTFL100</td>
			<td>staining for corneal epithelial defect&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Firstek, Taiwan</td>
			<td>S300S</td>
			<td>37 &#176;C for 4 h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanam sterile gloves</td>
			<td>Kanam Latex Industries, India</td>
			<td>EN455</td>
			<td>For aseptic operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Merck 0.22 &#181;m filter</td>
			<td>Merck KGaA, Germany</td>
			<td>PR05359</td>
			<td>At least 2 filters for mACS filtration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nang Kuang 250 mL 10% glycerol solution</td>
			<td>Nang Kuang Pharmaceutical, Taiwan</td>
			<td>19496</td>
			<td>To offer suitable membrane stabilization effect and extracellular osmotic pressure for blood cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline</td>
			<td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td>
			<td>100-120-1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punch 2mm</td>
			<td>STIEFEL</td>
			<td>22650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA</td>
			<td>SV11</td>
			<td>microscope for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo 18 G needle</td>
			<td>Terumo, Taiwan</td>
			<td>SMACF0120-18BX</td>
			<td>3.0 mL syringe with 18 G needle to extract the supernatant after centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo 20.0 mL syringe</td>
			<td>Terumo, Taiwan</td>
			<td>MDSS20ES</td>
			<td>Could be used to collect serum after initial centrifugation and use it for secondary centrifugation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terumo 3.0 mL syringe with the 23 G needle</td>
			<td>Terumo, Taiwan</td>
			<td>MDSS03S2325</td>
			<td>3.0 mL syringe is used to extract the supernatant after centrifugation. Then connect the filter and the 23 G needle for injection into the eye drop bottles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott Tenotomy Scissors Medium</td>
			<td>katena</td>
			<td>K4-3004</td>
			<td></td>
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production of modified autologous conditioned serum and ex vivo assessment of its healing potential in murine corneal epithelium

인간 혈액 유래 국소 요법은 최근 수십 년 동안 임상의에게 큰 도움이 되었습니다. 자가 혈청(AS)과 혈소판이 풍부한 혈장(PRP)은 각막 상처 치유에 필수적인 상피친화성 성장 인자를 풍부하게 함유하고 있습니다. AS와 달리 PRP는 차등 원심분리 시스템을 기반으로 하여 더 많은 혈소판 유래 성장 인자를 생성합니다. 자가 컨디셔닝 세럼(ACS)은 AS 및 PRP의 준비를 보존할 뿐만 아니라 염증성 질환에서 중요한 면역 조절 특성에 중점을 둡니다.
표준화된 프로토콜의 부족과 높은 준비 비용은 ACS의 임상 적용에 대한 한계입니다. 이 비디오 실험은 변형된 자가 컨디셔닝 혈청(mACS) 점안액을 준비하기 위한 표준 작동 절차를 보여줍니다. 먼저, 글리세롤은 저산소 배양 동안 혈액 세포 안정제로서 헤파린 주사기에 첨가되었습니다. 혈액 세포를 활성화시키기 위해, 37°C에서 4시간 인큐베이션을 개시하였다. 이어서, 혈액 샘플을 실온에서 10분 동안 3,500 × g 에서 원심분리하였다. 상층액을 0.22 μm 필터를 통해 여과한 후, mACS 점안액을 완전히 제조하였다.
mACS의 치료 효과에 대한 잠정적인 시험은 생체 외 마우스 눈에서 각막 상처 치유에서 기존 AS에 비해 경쟁 우위를 가질 수 있음을 보여주었습니다. 본 연구에 사용된 AS는 발표된 연구와 본원의 임상 실습에 따라 작성되었습니다. 따라서 안구 표면 질환에 대한 mACS의 효능은 in vivo 동물 연구 및 임상 시험을 통해 향후 연구에서 평가될 수 있습니다.

그림 1과 그림 2는 실험에 필요한 재료를 보여주고, 그림 3은 mACS 준비 중 순차적인 단계와 성공적인 중간 생성물을 보여줍니다. 먼저, 0.5 mL의 10% 글리세롤 용액을 각 10 mL 멸균 시험관에 넣었다(도 3A). 그런 다음 환자로부터 60-70mL의 정맥혈을 채취하고 10mL의 혈액을 각 튜브에 주입했습니다(그?...

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Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

이 기사에서는 공정을 단순화하고 자가 컨디셔닝 세럼(ACS) 준비 비용을 낮추는 프로토콜에 대해 설명합니다. 특별한 주사기 또는 표면 코팅 유리 구슬이 필요하지 않습니다. 더욱이, 변형된 ACS(mACS)는 생체 외에서 쥐 눈의 각막 상처 치유에 있어서 종래의 자가 혈청에 비해 경쟁 우위를 갖는다.

변형된 자가 조절 혈청의 생산 및 쥐 각막 상피에서의 치유 가능성에 대한 생체 외 평가

Human blood-derived topical therapies have been a boon to clinicians in recent decades. Autologous serum (AS) and platelet-rich plasma (PRP) are enriched ...

이 공정은 복잡한 기술 처리가 필요하지 않은 mACS라는 혁신적인 혈액 유래 제품을 제공합니다. 또한 기존의 자가 혈청보다 상처 치유를 더 가속화합니다. 표준화된 준비 프로세스를 제공하는 것 외에도 이 기술은 혈청 안약 비용을 줄여 보다 저렴한 치료 옵션에 대한 환자의 접근성을 향상시킬 수 있습니다.이 기술은 상처 또는 조직 재생, 복구 및 항염 촉진이 필요한 분야에 적용될 수 있습니다. 이 기술은 상처를 치유하기 어렵고 중증 안구 표면 질환과 같은 만성 염증성 질환에 큰 이점이 될 것입니다. 시작하려면 이전에 채취한 인간 정맥혈 10밀리리터를 6개의 진공 튜브 각각에 주입합니다.튜브를 섭씨 37도의 인큐베이터에 4시간 동안 넣은 다음 실온에서 10분 동안 3, 500G에서 튜브를 원심분리합니다. 튜브를 랙에 놓은 후 캡을 풉니다. 멸균 장갑을 착용한 후 18게이지 바늘이 장착된 3밀리리터 주사기를 사용하여 각 튜브에서 mACS를 빼냅니다.바늘을 빼내고 0.22 마이크로 미터 필터를 부착하십시오. 23 게이지, 1.5 인치 채혈 바늘을 원래의 3 밀리리터 주사기로 필터 배출구에 연결합니다. 즉시 사용할 수 있도록 준비된 멸균 안약 병에 필터를 통해 바늘을 부드럽게 밀어 넣고 안약을 섭씨 4도에서 보관하십시오.생체 외 표면 치유 모델에서 mACS 안약으로 치료한 피험자는 자가 혈청 점안액으로 치료한 피험자에 비해 우수한 각막 치유를 나타냈습니다. 16시간에, 모든 그룹의 각막 상처는 0.5%mACS로 치료한 것보다 느리게 치유되었다. DMEM 그룹의 쥐 각막과 24시간에서의 자가 혈청은 정상 식염수 그룹을 제외하고 32시간에서 mACSS와 유사한 치유를 보여주었습니다.다른 모든 그룹은 거의 완전한 회복을 보였다. 가장 중요한 단계는 공정 중에 무균 절차를 따르는 것입니다. 혈청 제품은 영양소가 풍부하므로 각막에 오염 된 제품을 사용하면 심각한 각막 궤양이 발생할 수 있습니다.이 제품은 상처의 치유와 안구 표면 질환 증상의 개선을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 사이토카인 성분을 분석하고 mACS에 대한 대규모 무작위 대조 시험을 수행하는 것은 추가 연구에 필수적입니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

Murine Model of Wound Healing

상처 치유의 생쥐 모델

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

연구

의학

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Subnormothermic의 기술<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 간 스토리지, 평가를위한 관류 및 한계 간 이식의 수리

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage

뇌출혈의 쥐과 모델로자가 혈액이나 클로스 트리 디움 콜라게나 제의 줄무늬 체 주입

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

에 대한 쥐의 내시경<em&gt; 생체</em&gt; 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

각 막에 대 한 모델로 눈 버와 각 막 상피 마모 상처 치유

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

Lentiviral Vector-mediated Gene Therapy of Hepatocytes Ex Vivo for Autologous Transplantation in Swine

돼지에서 자가 이식 Hepatocytes 전 비보 의 lentiviral 벡터 중재 된 유전자 치료

Gene therapy is an ideal choice to cure many inborn errors of metabolism of the liver. Ex-vivo, lentiviral vectors have been used successfully in the ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

작업 모드에 Situ 심장 관류 Ex normothermic: 심장 기능 및 대사 평가

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...