이 연구에서 우리는 전임상 연구에서 그 가치를 입증할 수 있는 모자이크 아데노 관련 바이러스 벡터의 생산, 정제 및 특성화를 위한 개선된 프로토콜을 개발하고자 합니다. 안정적인 생산자 세포주를 확립하기 위한 노력에도 불구하고 포유류 세포에서 일시적인 transfection은 여전히 AAV 생산의 주요 워크플로우입니다. 그런 다음 AAV는 초고속 밀도 구배 원심분리 또는 바이러스 입자의 생화학적 특성에 의존하는 크로마토그래피 기술로 정제됩니다.
AAV를 정제하는 데 일반적으로 사용되는 방법은 염화 세슘 또는 요오드릭산올 밀도 구배 초원심분리를 사용합니다. 장점에도 불구하고 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 시간이 많이 걸리고 확장성이 제한되며 순도가 낮은 일부 벡터에 결과를 제공하는 경우가 많습니다.
이제 이러한 제약을 극복하기 위해 여러 연구자들이 크로마토그래피 기술에 관심을 기울이고 있습니다. AAV2의 헤파린 결합 능력을 기반으로 모자이크 rAAV를 생성하기 위한 단계별 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 순도가 높고 생물학적으로 활성이 높은 rAAV를 6일 만에 바로 사용할 수 있게 하며, 전임상 연구를 위한 rAAV를 생성하기 위한 반자동, 확장 가능하고 비용 효율적인 전략으로 나타납니다.
모자이크 rAAV의 생성에 이 방법의 적용 가능성을 입증한 후, 이제 생산 시스템을 미세 조정하여 생산자 세포주를 구축함으로써 더 나은 확장성과 비용 효율성을 달성할 수 있습니다. 또한 두 번째 연마 정제 단계를 포함하여 빈 입자를 제거하는 것을 목표로 합니다.