Name: neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

الكتاب نقدر المشورة والدعم الفني المقدم من قبل الدكتور ريتشارد Konz والموظفين في صميم مرفق التدفق الخلوي في كلية طب جامعة ماساتشوستس. كما استخدمت الموارد الأساسية التي تدعمها أبحاث الغدد الصماء السكري DK032520 منح المركز. ويدعم هذا العمل عن طريق المنح المقدمة من المعهد الوطني للصحة العقلية (NIMH) ، والمعهد الوطني لتعاطي المخدرات (النداء) والمعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية.

استخراج النوى <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طرح 250 ملغ من أنسجة المخ بعد الوفاة المجمدة في 5 مخزن تحلل مل 1 في douncer ووضعه على الجليد. لاستقبال نحو 5 ملايين النوى بعد FACS الفرز ، ونحن عادة استخدام أنسجة من 1000 ملغ في كل عينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rt...

<ol>
	<li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons.">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10,000+human+cells.">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li></ol>

بروتوكول المقدمة هنا ينبغي أن تكون مفيدة بشكل خاص للدراسات التي تركز على التغيرات اللا جينية للونين العصبية ، وبشكل أعم ، على النمط الظاهري الجزيئي لنواة الخلايا العصبية ، أثناء المرض والشيخوخة النامية ، أو في الحالات العادية عصبية أو نفسية. الأسلوب هو من ميزة خاصة عند عدم تجان...

الكواشف : <table style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><th colspan="3" align="left"> 1. تحلل العازلة </th></tr><tr><td> 0.32M </td><td> السكروز </td><td> 5.47 ز </td></tr><tr><td> 5 ملم </td><td> CaCl 2 </td><td> 250 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 3 ملم </td><td> ملغ (خلات) 2 </td><td> 150 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 0.1 ملم </td><td> EDTA </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 10MM </td><td> تريس ، حمض الهيدروكلوريك ، pH8 </td><td> 500 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 1 ملم </td><td> DTT </td><td> 17 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 0.1 ٪ </td><td> تريتون X - 100 </td><td> 50 ميكرولتر </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> ضبط مستوى الصوت إلى 50 مل بالماء المعقمة </td></tr></table><table style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><th colspan="3" align="left"> 2. السكروز الحل </th></tr><tr><td> 1.8 M </td><td> السكروز </td><td> ز 30.78 </td></tr><tr><td> 3 ملم </td><td> ملغ (خلات) 2 </td><td> 150 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 1 ملم </td><td> DTT </td><td> 17 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 10 ملي </td><td> تريس ، حمض الهيدروكلوريك ، pH8 </td><td> 500 ميكرولتر </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> ضبط مستوى الصوت إلى 50 مل بالماء المعقمة </td></tr></table><table style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><th colspan="3" align="left"> 3. Dounce العازلة </th></tr><tr><td> 10 ملي </td><td> تريس </td><td> 0،242 ز </td></tr><tr><td> 4 ملم </td><td> MgCl 2 </td><td> 0،163 ز </td></tr><tr><td> 1 ملم </td><td> CaCl 2 </td><td> 0.03 ز </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> ضبط درجة الحموضة إلى 7.5 وحدة التخزين إلى 200 مل من الماء المعقمة </td></tr></table>

neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue

الخلايا العصبية في الدماغ البشري تصبح تالية للتفتل بشكل كبير خلال التنمية قبل الولادة ، وبالتالي الحفاظ على النواة طوال العمر الكامل. ومع ذلك ، لا يعرف إلا القليل عن تغييرات في الخلايا العصبية وتنظيم الكروماتين النووي خلال مسيرة التنمية والشيخوخة ، أو في أمراض العصبية المزمنة. ومع ذلك ، حتى الآن فحوصات على الحمض النووي ، ومعظم لونين (عدا الأسماك) قرار عدم خلية واحدة. تحقيقا لهذه الغاية ، وعدم تجانس كبير الخلوي للأنسجة المخ يشكل قيدا كبيرا ، لأن تختلط الشرائح السكانية المختلفة عادة من الخلايا العصبية مع أنواع مختلفة من الخلايا الدبقية وغيرها من المنظمات غير العصبية. وأحد الحلول الممكنة لنمو الخلية من نوع ثقافات محددة ، ولكن معظم خلايا الجهاز العصبي المركزي ، بما في ذلك الخلايا العصبية ، هي فيفو السابقين المستدامة ، في أحسن الأحوال ، لمدة أسابيع قليلة فقط ، وبالتالي سيوفر نموذجا غير مكتمل للآليات العاملة جينية محتملة عبر عمر كامل . هنا ، ونحن نقدم على بروتوكول لاستخراج وتنقية النوى من المجمدة (أبدا الثابتة) في الدماغ بعد الوفاة الإنسان. الأسلوب ينطوي على استخراج النواة في المخزن تحلل ناقص التوتر ، تليها تنبيذ فائق وimmunotagging المضادة للNeuN الأضداد. ثم يتم جمع نوى الخلايا العصبية المسماة بشكل منفصل باستخدام مضان تنشيط الفرز. وينبغي أن تكون هذه الطريقة تنطبق على أي منطقة في الدماغ في مجموعة واسعة من الأنواع ومناسب للدراسات مناعي لونين مع الموقع وتعديلها محددة أضداد هيستون ، وفحوصات الحامض النووي وغيرها.

Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

عدم تجانس الخلوي للأنسجة المخ يشكل قيدا هاما لدراسة علامات جينية في لونين لأن معظم فحوصات نقص واحد قرار الخلية. الخلايا العصبية عادة ما تختلط مع الخلايا الدبقية وغيرها من المنظمات غير العصبية. ونحن نقدم على بروتوكول لاستخراج وجمع النوى من الخلايا العصبية في الدماغ البشري.

عزل النواة من الخلايا العصبية البشرية تشريح أنسجة المخ

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

والفحص الكروماتين لأنسجة المخ الإنسان

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Obtaining High Quality RNA from Single Cell Populations in Human Postmortem Brain Tissue

الحصول على جودة عالية من الحمض النووي الريبي بالسكان خلية واحدة في الإنسان تشريح أنسجة المخ

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

عزل Myofibroblasts الابتدائية من ماوس والأنسجة البشرية القولون

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

عزل القائم على تقارب من معلم النواة من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأنسجة لتحليل التعبير الجيني

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

عزل الحمض النووي الريبي من بنكرياس الفأر: A-ريبونوكلياز الأنسجة الغنية

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 يثري العائد من الخلايا الصباغية البشرية من أنسجة الجلد الكبار

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

عزل النوى عن الأنسجة الكاملة باستخدام المنظفات وطريقة خالية من الانزيم

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

سير العمل البروتيومي الكمي باستخدام رصد التفاعل المتعدد القائم على الكشف عن البروتينات من أنسجة الدماغ البشري

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...

Nuclei Isolation from Adult Mouse Kidney for Single-Nucleus RNA-Sequencing

عزل النوى من كلية الفأر البالغة لتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النواة

The kidneys regulate diverse biological processes such as water, electrolyte, and acid-base homeostasis. Physiological functions of the kidney are ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

عزل وتوصيف وتطبيق علاجي للحويصلات خارج الخلية من الخلايا الجذعية الوسيطة البشرية المستزرعة

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...