Name: neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

החוקרים מעריכים את העצה ותמיכה טכנית מסופק על ידי ד&quot;ר ריצ&#39;רד Konz והצוות במתקן cytometry זרימה Core באוניברסיטת הספר לרפואה של מסצ&#39;וסטס. משאבים Core נתמך על ידי לאנדוקרינולוגיה וסוכרת במרכז המחקר גרנט DK032520 שימשו גם. עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מהמכון הלאומי לבריאות הנפש (NIMH), המכון הלאומי לשימוש בסמים (NIDA) לבין המכון הלאומי לבריאות הילד והתפתחות האדם.

הפקת גרעינים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימי 250 מ&quot;ג שלאחר המוות של רקמת המוח הקפוא הצפת 5 מ&quot;ל תמוגה 1 ב douncer ולמקם אותו על הקרח. כדי לקבל כ -5 מיליון גרעינים לאחר FACS מיון, אנחנו בדרך כלל להשתמש 1000 מ&quot;ג של רקמת לדגימה. </li><li style=";text-align:right;directi...

<ol>
	<li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons.">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10,000+human+cells.">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li></ol>

הפרוטוקול המובא כאן צריך להיות שימושי במיוחד עבור מחקרים התמקדו בשינויים epigenetic של הכרומטין העצבית, ובאופן כללי יותר, על הפנוטיפ המולקולרי של גרעין עצבי, במהלך מחלה נוירולוגית או פסיכיאטרית נורמלי בפיתוח הזדקנות, או. השיטה היא יתרון מסוים כאשר ההטרוגניות הסלולר של רקמת המוח, כו?...

ריאגנטים: <table style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><th colspan="3" align="left"> 1. תמוגה הצפת </th></tr><tr><td> 0.32M </td><td> סוכרוז </td><td> 5.47 גר &#39; </td></tr><tr><td> 5 מ&quot;מ </td><td> CaCl 2 </td><td> 250 μl </td></tr><tr><td> 3 מ&quot;מ </td><td> Mg (Acetate) 2 </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> 0.1 מ&quot;מ </td><td> EDTA </td><td> 10 μl </td></tr><tr><td> 10mm </td><td> טריס-HCl, pH8 </td><td> 500 μl </td></tr><tr><td> 1 mM </td><td> DTT </td><td> 17 μl </td></tr><tr><td> 0.1% </td><td> טריטון X-100 </td><td> 50 μl </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> התאם את נפח 50 מ&quot;ל מים Autoclaved </td></tr></table><table style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><th colspan="3" align="left"> 2. סוכרוז פתרון </th></tr><tr><td> 1.8 מ &#39; </td><td> סוכרוז </td><td> 30.78 גרם </td></tr><tr><td> 3 מ&quot;מ </td><td> Mg (Acetate) 2 </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> 1 mM </td><td> DTT </td><td> 17 μl </td></tr><tr><td> 10 mM </td><td> טריס-HCl, pH8 </td><td> 500 μl </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> התאם את נפח 50 מ&quot;ל מים Autoclaved </td></tr></table><table style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><th colspan="3" align="left"> 3. Dounce חיץ </th></tr><tr><td> 10 mM </td><td> טריס </td><td> 0.242 גרם </td></tr><tr><td> 4 מ&quot;מ </td><td> MgCl 2 </td><td> 0.163 גרם </td></tr><tr><td> 1 mM </td><td> CaCl 2 </td><td> 0.03 גר &#39; </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> התאם ל-pH 7.5 ו נפח 200 מ&quot;ל מים Autoclaved </td></tr></table>

neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue

נוירונים במוח האנושי להיות postmitotic בעיקר במהלך התפתחות טרום לידתי, ובכך לשמור על גרעינים תוחלת החיים שלהם לאורך מלא. עם זאת, מעט מאוד ידוע על שינויים עצביים הכרומטין והארגון גרעיני במהלך התפתחות והזדקנות, או מחלה כרונית נוירופסיכיאטריות. עם זאת, עד כה מבחני מבוסס הכרומטין ביותר ו-DNA (למעט דגים) ברזולוציה יחיד חוסר התא. לשם כך, את ההטרוגניות הסלולר ניכר של רקמת המוח מהווה מגבלה משמעותית, שכן בדרך כלל subpopulations שונים של נוירונים הם התערבבו עם סוגים שונים של גליה ולמוסדות אחרים ללא כוונת תאים עצביים. אחד הפתרונות האפשריים יהיה לגדל תאים מסוג בתרבויות מסוימות, אבל רוב התאים במערכת העצבים המרכזית, כולל נוירונים, הם vivo לשעבר קיימא, במקרה הטוב, רק כמה שבועות ובכך יספק מודל שלם של מנגנוני epigenetic פוטנציאל ההפעלה ברחבי תוחלת החיים המלא . כאן, אנו מספקים פרוטוקול לחלץ ולטהר גרעינים מהמוח (לא קבוע) קפוא המוות האנושי. השיטה כוללת מיצוי של גרעיני במאגר תמוגה hypotonic, ואחריו ultracentrifugation ו immunotagging עם נוגדן אנטי NeuN. גרעינים העצבית תווית נאספים אז בנפרד באמצעות הקרינה המופעל מיון. שיטה זו צריכה לחול על כל האזור במוח במגוון רחב של מינים מתאימים ללימודי הכרומטין immunoprecipitation עם אתר ושינוי ספציפי אנטי היסטון נוגדנים, ועל מתילציה בדנ&quot;א מבחני אחרות.

Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

ההטרוגניות הסלולר של רקמת המוח מהווה מגבלה משמעותית לחקר סימונים epigenetic ב הכרומטין כי רוב מבחני חוסר ברזולוציה תא בודד. נוירונים הם בדרך כלל התערבבו עם גליה ולמוסדות אחרים ללא כוונת תאים עצביים. אנו מספקים פרוטוקול לחלץ ולאסוף גרעינים העצבית מהמוח האנושי.

גרעינים בידוד עצבי שלאחר המוות של רקמת מוח האדם

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

Assay הכרומטין של רקמת מוח האדם

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Obtaining High Quality RNA from Single Cell Populations in Human Postmortem Brain Tissue

קבלת RNA איכות גבוהה מאוכלוסיות תא בודד בתוך רקמות המוח האנושי שלאחר המוות

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

בידוד של ראשוני myofibroblasts מעכבר ורקמות מעי גס אנושיים

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

בידוד מבוסס זיקה של תייג גרעינים מ<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רקמות לניתוח ביטוי גנים

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

בידוד RNA מן העכבר לבלב: רקמות ribonuclease עשיר

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 מעשיר את התשואה של מלנוציטים אנושיים מרקמות עור למבוגרים

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

גרעיני בידוד מרקמות שלמות באמצעות ניקוי ושיטה נטולת אנזימים

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

זרימת עבודה של פרוטאומיה כמותית באמצעות זיהוי מבוסס ניטור תגובה מרובה של חלבונים מרקמת המוח האנושית

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...

Nuclei Isolation from Adult Mouse Kidney for Single-Nucleus RNA-Sequencing

בידוד גרעינים מכליה של עכבר בוגר לריצוף RNA של גרעין יחיד

The kidneys regulate diverse biological processes such as water, electrolyte, and acid-base homeostasis. Physiological functions of the kidney are ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

בידוד, אפיון ויישום טיפולי של שלפוחיות חוץ-תאיות מתאי גזע מזנכימליים אנושיים בתרבית

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...