Name: neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00
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लेखकों को सलाह और तकनीकी सहायता फ्लो Cytometry कोर सुविधा में मैसाचुसेट्स मेडिकल स्कूल के विश्वविद्यालय में डॉ. रिचर्ड Konz और कर्मचारियों द्वारा प्रदान की सराहना करते हैं. कोर मधुमेह इन्डोकिरनोलाजी अनुसंधान केंद्र अनुदान DK032520 द्वारा समर्थित संसाधनों का भी इस्तेमाल किया गया. इस काम के मानसिक स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (NIMH), नशीली दवाओं के सेवन के राष्ट्रीय संस्थान (NIDA) और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ बाल स्वास्थ्य और मानव विकास से अनुदान द्वारा समर्थित है.

नाभिक निकालना <ol><li> 5 एमएल lysis एक बफर में एक douncer में जमी शवपरीक्षा मस्तिष्क के ऊतकों के 250 मिलीग्राम और रखो बर्फ पर यह जगह . FACS छँटाई के बाद 5 लाख नाभिक को प्राप्त करने के लिए, हम आम तौर पर नमूना प्रति ऊतक के 1000 ?...

<ol>
	<li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons.">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10,000+human+cells.">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li></ol>

यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल neuronal chromatin के epigenetic परिवर्तन और, और अधिक सामान्यतः पर ध्यान केंद्रित अध्ययन के लिए विशेष रूप से उपयोगी होना चाहिए, सामान्य विकास और उम्र बढ़ने, या स्नायविक या मानसिक बीमारी के दौरान neuronal नाभि...

अभिकर्मकों: <table><tr><th colspan="3" align="left"> 1. Lysis बफर </th></tr><tr><td> 0.32M </td><td> Sucrose </td><td> 5.47 छ </td></tr><tr><td> 5 मिमी </td><td> 2 CaCl </td><td> 250 μl </td></tr><tr><td> 3 मिमी </td><td> (एसीटेट) मिलीग्राम 2 </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> 0.1 मिमी </td><td> EDTA </td><td> 10 μl </td></tr><tr><td> 10mm </td><td> Tris - एचसीएल, PH8 </td><td> 500 μl </td></tr><tr><td> 1 मिमी </td><td> डीटीटी </td><td> 17 μl </td></tr><tr><td> 0.1% </td><td> Triton एक्स - 100 </td><td> 50 μl </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> 50 मिलीलीटर के लिए Autoclaved पानी के साथ मात्रा समायोजित </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 2. Sucrose समाधान </th></tr><tr><td> 1.8 मी. </td><td> Sucrose </td><td> 30.78 छ </td></tr><tr><td> 3 मिमी </td><td> (एसीटेट) मिलीग्राम 2 </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> 1 मिमी </td><td> डीटीटी </td><td> 17 μl </td></tr><tr><td> 10 मिमी </td><td> Tris - एचसीएल, PH8 </td><td> 500 μl </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> 50 मिलीलीटर के लिए Autoclaved पानी के साथ मात्रा समायोजित </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 3. बफर Dounce </th></tr><tr><td> 10 मिमी </td><td> Tris </td><td> .242 छ </td></tr><tr><td> 4 मिमी </td><td> 2 MgCl </td><td> .163 छ </td></tr><tr><td> 1 मिमी </td><td> 2 CaCl </td><td> 0.03 छ </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> 200 मिलीलीटर के लिए Autoclaved पानी के साथ पीएच 7.5 और मात्रा समायोजित करें </td></tr></table>

neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue

मानव मस्तिष्क में न्यूरॉन्स postmitotic मोटे तौर पर जन्म के पूर्व का विकास के दौरान, बन गया है और इस प्रकार पूर्ण जीवन भर उनके नाभिक बनाए रखने के. हालांकि, neuronal chromatin और परमाणु संगठन में विकास और उम्र बढ़ने के दौरान परिवर्तन, या पुरानी neuropsychiatric बीमारी में थोड़ा के बारे में जाना जाता है. हालांकि, सबसे chromatin और डीएनए आधारित कमी (मछली की तुलना में) एक सेल संकल्प assays तिथि करने के लिए. यह अंत करने के लिए, मस्तिष्क के ऊतकों की काफी सेलुलर विविधता एक महत्वपूर्ण सीमा बन गया है, क्योंकि न्यूरॉन्स की आम तौर पर विभिन्न subpopulations glia और अन्य गैर neuronal कोशिकाओं के विभिन्न प्रकार के के साथ intermingled कर रहे हैं. एक संभव समाधान के लिए सेल प्रकार विशिष्ट संस्कृतियों बढ़ने के लिए हो सकता है, लेकिन सबसे न्यूरॉन्स सहित सीएनएस की कोशिकाओं, पूर्व स्थायी vivo हैं, केवल कुछ ही हफ्तों के लिए, सबसे अच्छा में है और इस प्रकार epigenetic तंत्र के लिए एक अधूरा मॉडल संभावित पूर्ण जीवन भर ऑपरेटिंग प्रदान करेगा . यहाँ, हम एक प्रोटोकॉल को निकालने और जमे हुए (कभी नहीं तय) मानव शवपरीक्षा मस्तिष्क से नाभिक शुद्ध प्रदान करते हैं. विधि hypotonic lysis बफर में नाभिक के निष्कर्षण, और विरोधी NeuN एंटीबॉडी के साथ ultracentrifugation immunotagging द्वारा पीछा शामिल है. लेबल neuronal नाभिक तो अलग से एकत्र कर रहे हैं प्रतिदीप्ति सक्रिय छँटाई का उपयोग. इस विधि प्रजातियों में से एक विस्तृत श्रृंखला में किसी भी मस्तिष्क क्षेत्र के लिए लागू है और के साथ साइट और संशोधन विशेष विरोधी histone एंटीबॉडी, और डीएनए मेथिलिकरण और अन्य assays के लिए chromatin immunoprecipitation अध्ययन के लिए उपयुक्त होना चाहिए.

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Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

मस्तिष्क के ऊतकों की सेलुलर विविधता chromatin है क्योंकि ज्यादातर assays एकल कक्ष संकल्प की कमी में epigenetic चिह्नों के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण सीमा बन गया है. न्यूरॉन्स आमतौर पर glia और अन्य गैर neuronal कोशिकाओं के साथ intermingled हैं. हम एक प्रोटोकॉल को निकालने और मानव मस्तिष्क से neuronal नाभिक इकट्ठा प्रदान करते हैं.

मानव शवपरीक्षा मस्तिष्क के ऊतकों से neuronal नाभिक अलगाव

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

मानव मस्तिष्क के ऊतकों के लिए एक chromatin परख

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Obtaining High Quality RNA from Single Cell Populations in Human Postmortem Brain Tissue

मानव शवपरीक्षा मस्तिष्क के ऊतकों में एकल सेल आबादी से उच्च गुणवत्ता शाही सेना प्राप्त

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

माउस और मानव आंतों के ऊतकों से प्राथमिक myofibroblasts का अलगाव

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

से टैग्ड नाभिक की आत्मीयता के आधार पर अलगाव<em&gt; ड्रोसोफिला</emजीन एक्सप्रेशन विश्लेषण के लिए&gt; टिश्यूज

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

माउस अग्न्याशय से शाही सेना अलगाव: एक ribonuclease युक्त ऊतक

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

वाई-27632 वयस्क त्वचा ऊतकों से मानव मेलानोसाइट्स की उपज को समृद्ध करता है

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

डिटर्जेंट और एंजाइम मुक्त विधि का उपयोग कर पूरे ऊतक से नाभिक अलगाव

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

मानव मस्तिष्क ऊतक से प्रोटीन का एकाधिक प्रतिक्रिया निगरानी आधारित पता लगाने का उपयोग कर मात्रात्मक प्रोटेओमिक्स वर्कफ्लो

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...

Nuclei Isolation from Adult Mouse Kidney for Single-Nucleus RNA-Sequencing

एकल-नाभिक आरएनए-अनुक्रमण के लिए वयस्क माउस किडनी से नाभिक अलगाव

The kidneys regulate diverse biological processes such as water, electrolyte, and acid-base homeostasis. Physiological functions of the kidney are ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

सुसंस्कृत मानव मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं से बाह्य पुटिकाओं का अलगाव, लक्षण वर्णन और चिकित्सीय अनुप्रयोग

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...