Name: neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00
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著者らは、マサチューセッツ大学医学部でのフローサイトメトリーコアファシリティで博士リチャードKonzとスタッフによるアドバイスや技術的なご支援を賜りますようお願い申し上げます。糖尿病内分泌学研究センター助成DK032520でサポートされているコアのリソースも使用した。この作品は、国立精神衛生研究所（NIMH）、薬物乱用の国立研究所（NIDA）と母子保健と人間開発の国立研究所からの補助金によってサポートされています。

核抽出<ol><li> douncerに5 mlの溶解バッファー1で冷凍死後の脳組織の250mgを入れ、氷の上に置きます。ソートFACS後の約500万人の核を受信するには、我々は通常、サンプルあたり組織の1000mgのを使用してください。 </li><li>組織が融解した後、しばらく氷上で1分間組織をダウンス。 </li><li>ホモジナイズした組織を取り、15 mLの明確な遠心チューブに入れてください。チューブを氷上に置く?...

<ol>
	<li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons.">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10,000+human+cells.">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li></ol>

ここで紹介するプロトコルは、より一般的にはエピジェネティックな神経細胞クロマチンの変化と、上に、神経核の分子表現型上に、通常の開発と老化の間に、または神経学的または精神疾患に焦点を当てた研究のために特に有用であろう。潜在的な老化の過程でニューロンからグリアの配給量の変化や病気に起因するを含む脳組織の細胞の不均質性は、懸念さ1のときの方法が特に有利で ​​ある...

試薬： <table><tr><th colspan="3" align="left"> 1。溶解バッファー</th></tr><tr><td> 0.32M </td><td>スクロース</td><td> 5.47グラム</td></tr><tr><td> 5mMの</td><td> CaCl 2の </td><td> 250μlの</td></tr><tr><td> 3mMの</td><td> MG（アセテート）2 </td><td> 150μlの</td></tr><tr><td> 0.1 mMの</td><td> EDTA </td><td> 10μlの</td></tr><tr><td> 10mMの</td><td>トリス- HCl、PH8 </td><td> 500μlの</td></tr><tr><td> 1mMの</td><td> DTT </td><td> 17μlの</td></tr><tr><td> 0.1パーセント</td><td>トリトンX - 100 </td><td> 50μlの</td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0">オートクレーブした水で50mlにボリュームを調整</td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 2。蔗糖液</th></tr><tr><td> 1.8 M </td><td>スクロース</td><td> 30.78グラム</td></tr><tr><td> 3mMの</td><td> MG（アセテート）2 </td><td> 150μlの</td></tr><tr><td> 1mMの</td><td> DTT </td><td> 17μlの</td></tr><tr><td> 10 mMの</td><td>トリス- HCl、PH8 </td><td> 500μlの</td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0">オートクレーブした水で50mlにボリュームを調整</td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 3。バッファをダウンス</th></tr><tr><td> 10 mMの</td><td>トリス</td><td> 0.242グラム</td></tr><tr><td> 4mMの</td><td> MgCl 2の </td><td> 0.163グラム</td></tr><tr><td> 1mMの</td><td> CaCl 2の </td><td> 0.03グラム</td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> pHを7.5に調整し、オートクレーブした水を加えて200mlにボリューム</td></tr></table>

neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue

人間の脳のニューロンは、主に出生前の開発中に分裂となるため、完全な生涯を通じて、その核を維持する。しかし、少しは開発し、老化の過程で、または慢性の精神神経疾患における神経細胞のクロマチンと核組織の変化についてはほとんど知られていない。しかし、ほとんどのクロマチンおよびDNAベースのアッセイ（FISH以外の）不足、単一セルの分解能日付を記入すること。神経細胞の典型的に様々な亜集団がグリア細胞と他の非神経細胞の種類と混ざりされているため、この目的のために、脳組織のかなりの細胞の不均質性は、重要な制限をもたらす。一つの可能​​な解決策は、細胞型特異的な文化を育てることですが、神経細胞を含むほとんどの中枢神経系の細胞は、、数週間で、最高の状態で、持続可能なex vivoのであり、したがって潜在的に完全な寿命にわたって動作エピジェネティックな機構のための不完全なモデルを提供するであろう。ここで、我々は凍結（固定しない）人間の死後の脳から核を抽出し、精製するプロトコルを提供しています。方法は、抗NeuN抗体による超遠心やimmunotagging続いて、低張溶解緩衝液中で核の抽出を行います。標識された神経核は、蛍光活性化ソーティングを使用して別々に収集されます。このメソッドは、種の広い範囲内の任意の脳の領域に適用し、サイトと修正特異的抗ヒストン抗体とクロマチン免疫沈降の研究のための、およびDNAメチル化および他のアッセイに適しているはずです。

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Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

ほとんどのアッセイは、単一セルの分解能が不足しているため脳組織の細胞の不均質性は、クロマチンにおけるエピジェネティックなマーキングの研究のための重大な制約をもたらす。ニューロンは通常、グリア細胞および他の非神経細胞が混在しています。私たちは、人間の脳から神経細胞核を抽出して収集するプロトコルを提供しています。

人間の死後の脳組織から神経細胞核の単離

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

人間の脳組織のためのクロマチンアッセイ

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Obtaining High Quality RNA from Single Cell Populations in Human Postmortem Brain Tissue

人間の死後の脳組織における単一細胞から、高品質のRNAを取得

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

マウスおよびヒト結腸組織からの一次筋線維芽細胞の分離

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

からのタグ付き核の親和性に基づく分離<em&gt;ショウジョウバエ</em遺伝子発現解析のための&gt;組織

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

マウス膵臓からのRNAの単離：リボヌクレアーゼが豊富な組織

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 成人皮膚組織からのヒトメラノサイトの収穫量を豊かにする

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

洗浄剤と酵素を含まない方法を用いた組織全体からの核分離

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

ヒト脳組織からのタンパク質の多発反応モニタリングを用いた定量的プロテオミクスワークフロー

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...

Nuclei Isolation from Adult Mouse Kidney for Single-Nucleus RNA-Sequencing

単核RNAシーケンシングのための成体マウス腎臓からの核分離

The kidneys regulate diverse biological processes such as water, electrolyte, and acid-base homeostasis. Physiological functions of the kidney are ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

培養ヒト間葉系幹細胞からの細胞外小胞の単離、特性評価、および治療応用

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...