Name: neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00
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저자는 매사 추세츠 의과 대학의 대학에서 유동세포계측법 핵심 시설에서 박사 리차드 Konz 직원에서 제공하는 조언 및 기술 지원을 주셔서 감사합니다. 당뇨병 내분비학 연구 센터 부여 DK032520 지원의 핵심 자원도 사용되었습니다. 이 작품은 정신 건강의 국립 연구소 (NIMH), 약물 남용의 국립 연구소 (니다) 및 아동 보건 인간 발달의 국립 연구소에서 기금에 의해 지원됩니다.

핵 추출 <ol><li> douncer 5 ML의 용해 버퍼 1 냉동 사후 뇌 조직 250 MG를 넣어 얼음에 놓으십시오. 정렬 외과 이후 만 5 핵을 받게하기 위해, 우리는 일반적으로 샘플 당 조직 1000 MG를 사용합니다. </li><li> 조직은 해동되면, 동안 얼음에서 1 분 조직을 다운스. </li><li> 균질 조직을 가지고 15 ML 맑은 초원 심 분리기 튜브에 넣습니다. 얼음에 튜브를 넣어. </li><li> , 피펫과 자당 솔루션이 9 ML을 ...

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	<li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons.">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10,000+human+cells.">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li></ol>

여기에 제시 프로토콜이 더 일반적으로 epigenetic의 연결을 염색질의 변화와에 초점을 맞춘 연구에 특히 유용해야 정상적인 개발과 노화, 또는 신경 또는 정신 질환 중의 연결을 핵의 분자 표현형에. 잠재적인 노화의 과정에서 신경 세포 - 투 - glia의 배급에있는 교대 또는 질병에 의한 포함한 뇌 조직의 세포 이질이 우려 일아르 때 방법은 특히 장점입니다. 예를 들어, 염색질의 immunoprecipitation 기술과 함께 ...

시약 : <table><tr><th colspan="3" align="left"> 1. 용해 완충액 </th></tr><tr><td> 0.32M </td><td> 자당 </td><td> 5.47 g </td></tr><tr><td> 5 MM </td><td> CaCl 2 </td><td> 250 μl </td></tr><tr><td> 3 MM </td><td> MG (아세테이트) 2 </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> 0.1 MM </td><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> 10 μl </td></tr><tr><td> 10mM </td><td> 트리스 - HCL, pH8 </td><td> 500 μl </td></tr><tr><td> 1 ㎜ </td><td> DTT </td><td> 17 μl </td></tr><tr><td> 0.1 % </td><td> 트리톤 X - 100 </td><td> 50 μl </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Autoclaved 물로 50 ML에 볼륨을 조정 </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 2. 자당 솔루션 </th></tr><tr><td> 1.8 M </td><td> 자당 </td><td> 30.78 g </td></tr><tr><td> 3 MM </td><td> MG (아세테이트) 2 </td><td> 150 μl </td></tr><tr><td> 1 ㎜ </td><td> DTT </td><td> 17 μl </td></tr><tr><td> 10 MM </td><td> 트리스 - HCL, pH8 </td><td> 500 μl </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Autoclaved 물로 50 ML에 볼륨을 조정 </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 3. 버퍼 다운스 </th></tr><tr><td> 10 MM </td><td> 트리스 </td><td> 0.242 g </td></tr><tr><td> 4 MM </td><td> MgCl 2 </td><td> 0.163 g </td></tr><tr><td> 1 ㎜ </td><td> CaCl 2 </td><td> 0.03 g </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Autoclaved 물 200 ML로 산도 7.5과 볼륨을 조정 </td></tr></table>

neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue

인간 두뇌의 뉴런은 태아 발달 동안 주로 postmitotic되며, 따라서 전체 수명에 걸쳐 그들의 핵을 유지합니다. 그러나, 약간은 개발과 노화 과정 동안의 연결 염색질과 핵 조직의 변화 또는 만성 neuropsychiatric 질병에 대해 잘 알려져 있습니다. 그러나, 대부분의 염색질과 DNA 기반 assays (물고기 이외의) 부족 단세포 해상도를 날짜합니다. 뉴런의 일반적으로 다양한 subpopulations가 glia 및 기타 비의 연결을 세포의 다른 종류의 혼합된 있기 때문에이를 위해, 뇌 조직의 상당한 이질 세포는 상당한 한계를 포즈. 한 가지 가능한 솔루션은 셀 타입의 특정 문화를 성장하는 것이지만, 신경을 포함하여 대부분의 CNS의 세포는, 몇 주 동안, 최고의, 지속 전직 생체내이며, 따라서 잠재적으로 전체 수명에 걸쳐 운영 epigenetic 메커니즘에 대한 불완전한 모델을 제공하는 . 여기, 우리는 냉동 (고정 절대) 인간의 사후 두뇌에서 핵을 추출하고 정화하는 프로토콜을 제공합니다. 방법은 안티 NeuN 항체와 ultracentrifugation 및 immunotagging 다음 hypotonic 용해 버퍼에서 핵의 추출을 포함합니다. 라벨의 연결 핵은 다음 형광 활성화 정렬을 사용하여 별도로 수집하고 있습니다. 이 방법은 인류의 다양한에서 뇌 영역에 적용 및 사이트 및 수정 - 특정 안티 - 히스톤 항체 및 DNA의 methylation과 다른 assays를위한과 염색질의 immunoprecipitation 연구에 적합해야합니다.

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Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

뇌 조직의 세포 이질은 대부분의 assays 단일 셀 해상도 부족하기 때문에 염색질의 epigenetic 자국의 연구에 대한 중요한 제한 포즈. 뉴런은 일반적으로 glia 및 기타 비의 연결을 세포와 혼합된 있습니다. 우리는 인간의 두뇌에서 핵의 연결을 추출하고 수집하는 프로토콜을 제공합니다.

인간의 사후 뇌 조직에서 핵의 연결을 격리

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

인간 두뇌 조직에 대한 염색질 어세이

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

연구

생물학

Obtaining High Quality RNA from Single Cell Populations in Human Postmortem Brain Tissue

인간의 사후 뇌 조직에서 단세포 집단의 고품질 RNA 구하기

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

마우스와 인간의 대장 조직에서 주요 근육 섬유 모세포의 분리

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

에서 태그가 핵의 선호도 기반 격리<em&gt; 초파리</em유전자 발현 분석을위한&gt; 조직

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

마우스 췌장에서 RNA 격리 : 리보 뉴 클레아 풍부한 조직

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 성인 피부 조직에서 인간 멜라닌 세포의 수율을 강화

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

세제 및 효소 없는 방법을 사용하여 조직 전체에서 핵 분리

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

인간 뇌 조직에서 단백질의 다중 반응 모니터링 기반 검출을 이용한 정량적 프로테오믹스 워크플로우

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...

Nuclei Isolation from Adult Mouse Kidney for Single-Nucleus RNA-Sequencing

Single-Nucleus RNA 시퀀싱을 위한 성인 마우스 신장에서 핵 분리

The kidneys regulate diverse biological processes such as water, electrolyte, and acid-base homeostasis. Physiological functions of the kidney are ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

배양된 인간 중간엽 줄기세포에서 세포외 소포의 분리, 특성화 및 치료적 적용

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...