Name: neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

Авторы ценят консультации и техническую поддержку со стороны д-р Ричард Конц и сотрудников на основной объект проточной цитометрии в Университете штата Массачусетс медицинской школы. Основные ресурсы, поддерживаемые Диабет Эндокринологический научный центр Грант DK032520 также были использованы. Работа выполнена при поддержке грантов от Национального института психического здоровья (NIMH), Национального института наркомании (NIDA) и Национального института детского здоровья и человеческого развития.

Добыча ядер <ol><li> Положите 250 мг замороженных тканей мозга посмертных в 5 мл лизирующего буфера 1 в douncer и поместите его на лед. Чтобы получить около 5 миллионов ядер после FACS сортировки, мы обычно используем 1000 мг ткани на пробу. </li><li> Как только ткань оттаяли, Dounce ткани в течение 1 мин...

<ol>
	<li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons.">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10,000+human+cells.">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li></ol>

Протокол, представленные здесь должно быть особенно полезно для исследования сосредоточены на эпигенетические изменения нейронов хроматина и, более общо, на молекулярном фенотип нейронов ядра, при нормальном развитии и старении, или неврологическими или психиатрическими заболеваниями. Метод и...

Реагенты: <table><tr><th colspan="3" align="left"> 1. Лизис буфера </th></tr><tr><td> 0.32M </td><td> Сахароза </td><td> 5,47 г </td></tr><tr><td> 5 мМ </td><td> CaCl 2 </td><td> 250 мкл </td></tr><tr><td> 3 мМ </td><td> Mg (ацетат) 2 </td><td> 150 мкл </td></tr><tr><td> 0,1 ммоль </td><td> ЭДТА </td><td> 10 мкл </td></tr><tr><td> 10 мМ </td><td> Трис-HCl, PH8 </td><td> 500 мкл </td></tr><tr><td> 1 мМ </td><td> DTT </td><td> 17 мкл </td></tr><tr><td> 0,1% </td><td> Тритон Х-100 </td><td> 50 мкл </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Регулировка громкости до 50 мл воды автоклавного </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 2. Раствора сахарозы </th></tr><tr><td> 1,8 М </td><td> Сахароза </td><td> 30,78 г </td></tr><tr><td> 3 мМ </td><td> Mg (ацетат) 2 </td><td> 150 мкл </td></tr><tr><td> 1 мМ </td><td> DTT </td><td> 17 мкл </td></tr><tr><td> 10 мМ </td><td> Трис-HCl, PH8 </td><td> 500 мкл </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Регулировка громкости до 50 мл воды автоклавного </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 3. Dounce буфер </th></tr><tr><td> 10 мМ </td><td> Трис </td><td> 0,242 г </td></tr><tr><td> 4 мМ </td><td> MgCl 2 </td><td> 0,163 г </td></tr><tr><td> 1 мМ </td><td> CaCl 2 </td><td> 0,03 г </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Отрегулируйте рН до 7,5 и объемом до 200 мл с автоклавного воды </td></tr></table>

neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue

Нейроны человеческого мозга стали постмитотических основном в период внутриутробного развития, и таким образом поддерживать их ядер на протяжении всего срока службы. Тем не менее, мало известно об изменениях в нейронных хроматина и ядерной организации в ходе развития и старения, или при хронических психоневрологических заболеваний. Однако на сегодняшний день наиболее хроматина и ДНК на основе анализов (кроме рыбы) отсутствие одной резолюции клетки. Для этого, значительное сотовой неоднородность ткани мозга представляет существенное ограничение, так как обычно различные субпопуляции нейронов перемешаны с различными типами глии и других не-нервных клеток. Одно из возможных решений будет расти камерного типа конкретной культуры, но большинство ЦНС клеток, включая нейроны, являются бывшими естественных условиях устойчивого, в лучшем случае, лишь несколько недель, и таким образом обеспечит неполной моделью для эпигенетических механизмов потенциально операционных по всему продолжительность жизни . Здесь мы предоставляем протокол для извлечения и очистки ядер из замороженных (никогда не фиксированной) человеческого мозга посмертных. Метод включает в себя добычу ядер в гипотонический лизис буфера, а затем ультрацентрифугирования и immunotagging с анти-Neun антител. Маркированный нейронов ядра затем собирают отдельно с помощью флуоресцентной активированной сортировки. Этот метод должен быть применимы к любой области мозга, в широком диапазоне видов и пригодны для хроматин иммунопреципитации исследований с сайта и изменения конкретных анти-гистонов антител, а также для метилирования ДНК и другие анализы.

Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

Сотовые неоднородность ткани головного мозга создает значительные ограничения для изучения эпигенетической маркировки в хроматина, потому что большинство анализов отсутствие одной резолюции клетки. Нейроны обычно идут прямо глии и других не-нервных клеток. Мы предоставляем протокол для извлечения и собирать нейронов ядер от человеческого мозга.

Изоляция нейронов ядра из человеческих тканей мозга Посмертные

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

Хроматин Пробирной по правам ткани мозга

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Obtaining High Quality RNA from Single Cell Populations in Human Postmortem Brain Tissue

Получение высокого качества РНК от единичных клеточных популяций в тканях человека Мозг Посмертные

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Выделение первичных Миофибробласты из мышиных и человеческих ткань толстой кишки

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity основе Выделение Tagged ядер от<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Ткани для анализа экспрессии генов

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

Выделение РНК от мыши поджелудочной железы: Рибонуклеаза богатых тканей

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 обогащает урожайность меланоцитов человека из тканей кожи взрослого человека

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

Изоляция ядер от цельного ткани с помощью метода для детей, свободных от ферментов,

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

Рабочий процесс количественной протеомики с использованием множественного мониторинга реакций на основе обнаружения белков из ткани мозга человека

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...

Nuclei Isolation from Adult Mouse Kidney for Single-Nucleus RNA-Sequencing

Выделение ядер из почек взрослой мыши для секвенирования одноядерной РНК

The kidneys regulate diverse biological processes such as water, electrolyte, and acid-base homeostasis. Physiological functions of the kidney are ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

Выделение, характеристика и терапевтическое применение внеклеточных везикул из культивируемых мезенхимальных стволовых клеток человека

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...