Name: neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue
Uploaded: 2008-10-01T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

Yazarlar Sitometrisi Core tesiste Massachusetts Üniversitesi Tıp Fakültesi Dr. Richard Konz ve personel tarafından sağlanan danışmanlık ve teknik destek için teşekkür ederiz. Diyabet Endokrinoloji Araştırma Merkezi Hibe DK032520 tarafından desteklenen temel kaynakları da kullanılmıştır. Bu çalışma, Ulusal Ruh Sağlığı Enstitüsü (NIMH), Ulusal Uyuşturucu Enstitüsü&#39;nden (NIDA) ve Ulusal Çocuk Sağlığı ve İnsan Gelişimi Enstitüsü hibe tarafından desteklenmektedir.

Çekirdekler Ekstraksiyon <ol><li> Bir douncer 5 ml Lizis Tampon 1, 250 mg donmuş postmortem beyin dokusu koyun ve buz üzerine yerleştirin. Sıralama FACS sonra yaklaşık 5 milyon çekirdekleri almak için, genellikle örnek başına 1000 mg doku kullanın. </li><li> Doku çözülmüş sonra, buz üzerinde ise 1 dakika için doku Dounce. </li><li> Homojenize doku ve 15 ml açık ultrasantrifüjdeki tüp içine yerleştirin. Buz tüpü koyun. </li><li> 9 Sakkaroz Çözüm 2 mL pipet ile alın a...

<ol>
	<li>Siegmund, K. D., Connor, C. M., Campan, M., Long, T. I., Weisenberger, D. J., Biniszkiewicz, D., Jaenisch, R., Laird, P. W., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+methylation+in+the+human+cerebral+cortex+is+dynamically+regulated+throughout+the+life+span+and+involves+differentiated+neurons.">DNA methylation in the human cerebral cortex is dynamically regulated throughout the life span and involves differentiated neurons.</a> PLoS ONE. 2, 895-895 (2007).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Spalding, K. L., Bhardwaj, R. D., Buchholz, B. A., Druid, H., Frisen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrospective+birth+dating+of+cells+in+humans.">Retrospective birth dating of cells in humans.</a> Cell. 122, 133-143 (2005).</li><li>Acevedo, L. G., Iniguez, A. L., Holster, H. L., Zhang, X., Green, R., Farnham, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+ChIP-chip+analysis+using+10,000+human+cells.">Genome-scale ChIP-chip analysis using 10,000 human cells.</a> Biotechniques. 43, 791-797 (2007).</li></ol>

Burada sunulan protokol daha genel nöronal kromatin epigenetik değişiklikler ve odaklanmış çalışmaları için özellikle yararlı olacaktır, normal gelişmekte olan ve yaşlanma veya nörolojik veya psikiyatrik bir hastalık sırasında nöronal çekirdeği, moleküler fenotipi. Bu yöntem, potansiyel yaşlanma seyri sırasında nöron glia rasyon vardiya veya hastalık nedeniyle beyin dokusunda hücresel heterojenite bir endişe 1 belli bir avantajdır . Örneğin, bugünkü sıralama protokolü kromatin immunoprecipita...

Reaktifler: <table><tr><th colspan="3" align="left"> 1. Lizis Tampon </th></tr><tr><td> 0.32M </td><td> Sakaroz </td><td> 5,47 g </td></tr><tr><td> 5 mM </td><td> CaCl 2 </td><td> 250 ul </td></tr><tr><td> 3 mM </td><td> Mg (Asetat) 2 </td><td> 150 ul </td></tr><tr><td> 0.1 mM </td><td> EDTA </td><td> 10 ul </td></tr><tr><td> 10mM </td><td> Tris-HCl, pH8 </td><td> 500 ul </td></tr><tr><td> 1 mM </td><td> DTT </td><td> 17 ul </td></tr><tr><td> % 0.1 </td><td> Triton X-100 </td><td> 50 ul </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Otoklavlı su ile 50 ml hacim ayarlayın </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 2. Sakkaroz Çözüm </th></tr><tr><td> 1,8 M </td><td> Sakaroz </td><td> 30,78 g </td></tr><tr><td> 3 mM </td><td> Mg (Asetat) 2 </td><td> 150 ul </td></tr><tr><td> 1 mM </td><td> DTT </td><td> 17 ul </td></tr><tr><td> 10 mM </td><td> Tris-HCl, pH8 </td><td> 500 ul </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Otoklavlı su ile 50 ml hacim ayarlayın </td></tr></table><table><tr><th colspan="3" align="left"> 3. Tampon Dounce </th></tr><tr><td> 10 mM </td><td> Tris </td><td> 0,242 g </td></tr><tr><td> 4 mM </td><td> MgCl 2 </td><td> 0.163 g </td></tr><tr><td> 1 mM </td><td> CaCl 2 </td><td> 0,03 g </td></tr><tr><td colspan="3" align="center" style="padding:8px 0 16px 0"> Otoklavlı su ile 200 ml pH 7.5 ve hacmi ayarlayın. </td></tr></table>

neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue

Insan beyninin nöron prenatal gelişimi sırasında büyük ölçüde postmitotic hale gelir, ve böylece tam ömrü boyunca çekirdekleri korumak. Ancak gelişme ve yaşlanma ders sırasında nöronal kromatin ve nükleer organizasyon değişiklikleri veya kronik nöropsikiyatrik hastalık hakkında bilinen çok az. Ancak bugüne kadar, en Kromatin ve DNA tabanlı testlerin (FISH dışında) eksikliği, tek hücreli çözünürlük. Nöronların genellikle çeşitli alt popülasyonlar glia ve diğer non-nöronal hücrelerin farklı türleri ile iç içe, çünkü bu amaçla, beyin dokusu önemli hücresel heterojenite, önemli bir sınırlama teşkil etmektedir. Hücre türüne özgü kültürleri büyümeye olası bir çözüm olurdu, ama nöronlar da dahil olmak üzere en çok merkezi sinir sistemi hücreleri, sadece birkaç hafta için, en azından, sürdürülebilir ex vivo ve böylece potansiyel olarak tam ömrü boyunca faaliyet epigenetik mekanizmalar için eksik bir model sağlayacak . Burada, (sabit asla) dondurulmuş insan postmortem beyin çekirdeklerinin özü ve arındırmak için bir protokol sağlar. Bu yöntem, anti-neun antikor ile Ultrasantrifügasyon ve immunotagging takip Hipotonik lizis tamponu çekirdeklerinin çıkarılması içerir. Etiketli nöronal çekirdeklerinin daha sonra floresan aktive sıralama kullanılarak ayrı toplanır. Bu yöntem, türlerin geniş bir yelpazede herhangi bir beyin bölgesi için geçerli olup, site ve modifikasyon özgü anti-histon antikorlar ve DNA metilasyon ve diğer testleri ile kromatin immunoprecipitation çalışmalar için uygun olmalıdır.

Watch this Scientific Journal Video about Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue at JoVE.com

Neuronal Nuclei Isolation from Human Postmortem Brain Tissue

Beyin dokusunda hücresel heterojenite testlerin çoğu tek hücreli çözünürlük eksikliği nedeniyle kromatin epigenetik işaretlerin çalışma için önemli bir sınırlama teşkil etmektedir. Nöronlar genellikle glia ve diğer non-nöronal hücreler ile iç içe. Biz özü ve insan beyninin nöron çekirdekleri toplamak için bir protokol sağlar.

İnsan Postmortem Beyin Dokusu Nöronal Çekirdekler İzolasyon

Neurons in the human brain become postmitotic largely during prenatal development, and thus maintain their nuclei throughout the full lifespan. However, ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Chromatin Assay for Human Brain Tissue

İnsan Beyninin Doku Kromatin Testi

Chronic neuropsychiatric illnesses such as schizophrenia, bipolar disease and autism are thought to result from a combination of genetic and environmental ...

Obtaining High Quality RNA from Single Cell Populations in Human Postmortem Brain Tissue

İnsan Postmortem Beyin Dokusu Tek Hücre Popülasyonlar Yüksek Kalite RNA Alınması

We proposed to investigate the gray matter reduction in the superior temporal gyrus seen in schizophrenia patients, by interrogating gene expression ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Fare ve İnsan Kolon Doku Primer miyofibroblastlar İzolasyonu

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

Dan Tagged Çekirdeğin Affinity-tabanlı yalıtım<em&gt; Drosophila</emGen ekspresyon analizi için&gt; Dokular

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

Fare pankreasından alınan RNA İzolasyonu: A Ribonuclease zengin Doku

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 Yetişkin Cilt Dokularından İnsan Melanositlerin Verimini Zenginleştirir

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Nuclei Isolation from Whole Tissue using a Detergent and Enzyme-Free Method

Deterjan ve Enzimsiz YöntemLe Tüm Dokudan Çekirdek İzolasyon

High-throughput transcriptome and epigenome profiling requires preparation of a single cell or single nuclei suspension. Preparation of the suspension ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

İnsan Beyin Dokusundan Proteinlerin Çoklu Reaksiyon İzleme Tabanlı Tespiti Kullanılarak Nicel Proteomik İş Akışı

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...

Nuclei Isolation from Adult Mouse Kidney for Single-Nucleus RNA-Sequencing

Tek Çekirdekli RNA Dizilimi için Yetişkin Fare Böbreğinden Çekirdek İzolasyonu

The kidneys regulate diverse biological processes such as water, electrolyte, and acid-base homeostasis. Physiological functions of the kidney are ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

Kültürlenmiş İnsan Mezenkimal Kök Hücrelerinden Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Terapötik Uygulaması

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...