11.19 : الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء: الأجهزة

الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء، أو HPLC، هي تقنية تحليلية تُستخدم لفصل عينات السوائل تحت ضغوط عالية. تتكون جهاز HPLC من زجاجات زجاجية لتخزين المذيبات تسمى خزانات الطور المتحرك. تُستخدم المذيبات من درجة نقاء عالية تسمى درجة الـ HPLC لضمان نقاء عالٍ، ويتم إزالة الغازات المذابة باستخدام مزيل الغازات، مثل نظام ضخ الفراغ أو الرش بالهيليوم. ثم تُضخ المذيبات إلى العمود التحليلي باستخدام حقنة تعمل بالبراغي أو مضخات ترددية. تستخدم معظم أجهزة HPLC الحديثة مضخات مكبس ترددية تنتج تدفق طور متحرك نبضي، ويتم تنعيم هذا التدفق عن طريق توصيل المضخة بمثبط نبضي. في بعض التحليلات، يتم استخدام الإيلوشن التدرجي. تتضمن هذه التقنية تغيير تكوين الطور المتحرك تدريجيًا، لتحسين فصل المخاليط المعقدة بناءً على قطبيتها. تُستخدم وحدات التحكم في التدرج للحفاظ على معدل تدفق المذيبات أثناء هذه العملية.

قبل أن يصل الطور المتحرك إلى العمود، يتم إدخال العينة باستخدام حاقن حلقي أو حاقن تلقائي. يدخل الطور المتحرك مع العينة إلى العمود، الذي يتم تعبئته بطور ثابت. يوضع العمود التحليلي في فرن عمودي للحفاظ على درجة حرارة ثابتة. في بعض الأحيان، يتم استخدام الأعمدة الأولية مثل أعمدة التنظيف والحراسة لحماية العمود وزيادة عمره الافتراضي. بمجرد فصل مكونات المحلل، تنتقل إلى الكاشف، الذي يحددها ويحول النتائج إلى مخطط كروماتوغرام يُعرض على الكمبيوتر. وأخيرًا، يُرسل المذيب الحامل للمكونات المنفصلة (الإيلوينت) إما إلى النفايات أو يتم جمعه في جهاز تجميع الكسور.