11.19 : Hochleistungsflüssigkeitschromatographie: Instrumentierung

Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie oder HPLC ist eine analytische Methode, die flüssige Proben unter hohem Druck trennt. Ein HPLC-Gerät besteht aus Glasflaschen zur Aufbewahrung von Lösungsmitteln, die als Reservoirs für die mobile Phase bezeichnet werden. Zur Aufrechterhaltung einer hohen Reinheit werden Lösungsmittel in HPLC-Qualität verwendet, und die gelösten Gase werden mithilfe eines Entgasers, beispielsweise eines Vakuumpumpensystems oder durch eine Spülung mit Helium, entfernt. Anschließend werden die Lösungsmittel mit einer schraubgetriebenen Spritze oder Kolbenpumpen in die analytische Säule gepumpt. Die meisten modernen HPLC-Geräte verwenden Kolbenpumpen, die einen gepulsten Fluss der mobilen Phase erzeugen, der durch den Anschluss an einen Pulsdämpfer geglättet wird. Bei einigen Analysen wird die Gradientenelution eingesetzt. Bei dieser Technik wird die Zusammensetzung der mobilen Phase schrittweise geändert, wodurch die Trennung komplexer Gemische aufgrund ihrer Polarität verbessert werden kann. Gradientenregler werden verwendet, um die Flussrate der Lösungsmittel während dieses Prozesses aufrechtzuerhalten.

Bevor die mobile Phase die Säule erreicht, wird die Probe mit einem Schleifeninjektor oder einem Autoinjektor eingeführt. Die mobile Phase gelangt zusammen mit der Probe in die Säule, die mit einer stationären Phase gefüllt ist. Die analytische Säule wird in einen Säulenofen gestellt, um eine konstante Temperatur aufrechtzuerhalten. Manchmal werden Vorsäulen wie Scavenger- und Schutzsäulen verwendet, um die Lebensdauer der Säule zu verlängern. Nachdem die Analyte getrennt wurden, wandern sie zum Detektor, der sie identifiziert und die Ergebnisse in ein Chromatogramm umwandelt, das auf dem Computer angezeigt wird. Schließlich wird das Eluat  – ​​das Lösungsmittel, das die getrennten Komponenten trägt – entweder in den Abfall geleitet oder im Fraktionssammler gesammelt.