11.19 : Cromatografia Líquida de Alto Desempenho: Instrumentação

A cromatografia líquida de alto desempenho, ou HPLC, é uma técnica analítica que separa amostras líquidas sob altas pressões. Um instrumento de HPLC consiste em garrafas de vidro para armazenar solventes, chamados reservatórios de fase móvel. Solventes de grau HPLC são usados ​​para manter uma alta pureza, e os gases dissolvidos são removidos usando um desgaseificador, como um sistema de bombeamento a vácuo ou aspersão com hélio. Os solventes são então bombeados para a coluna analítica usando uma seringa acionada por parafuso, ou bombas reciprocantes. A maioria dos instrumentos modernos de HPLC usa bombas de pistão reciprocantes que criam um fluxo de fase móvel pulsado, o que é suavizado conectando-os a um amortecedor de pulso. Em algumas análises, a eluição de gradiente é empregada. Essa técnica envolve a mudança gradual da composição da fase móvel, o que pode melhorar a separação de misturas complexas com base em sua polaridade. Controladores de gradiente são usados ​​para manter a taxa de fluxo de solventes durante esse processo.

Antes que a fase móvel alcance a coluna, a amostra é introduzida no injetor de loop, ou autoinjetor. A fase móvel, junto com a amostra, entra na coluna, que é preenchida com uma fase estacionária. A coluna analítica é colocada em um forno de coluna para manter uma temperatura constante. Às vezes, pré-colunas, como colunas de proteção e de limpeza são usadas para proteger a longevidade da coluna. Uma vez que os componentes do analito são separados, eles viajam para o detector, que os identifica e converte os resultados em um cromatograma que o computador exibe. Finalmente, o eluente - o solvente que carrega os componentes separados - vai para o lixo ou é coletado no coletor fracionário.