Method Article
* These authors contributed equally
هذا البروتوكول يحدد الصيانة الدورية والرعاية للحفاظ على الظروف المثلى لتربية اسماك الزرد. شريط الفيديو يوضح البروتوكول لصيانة النظام والإسكان العادية، والتغذية، والتربية، وتربية اليرقات الزرد.
يصف هذا البروتوكول الرعاية العادية وصيانة مختبر الزرد. الزرد تكتسب شعبية الآن في مجال علم الوراثة والبحوث الدوائية والسلوكية. كما من الفقاريات، تستخدم الزرد حصة كبيرة التشابه الجيني مع البشر تسلسل وكنموذج للحيوانات لمختلف الحالات المرضية البشرية. مزايا الزرد بالمقارنة مع غيرها من نماذج الفقارية شيوعا تشمل الخصوبة العالية، وانخفاض تكاليف الصيانة والأجنة شفافة، والتطور السريع. نظرا لحفز الاهتمام في البحوث الزرد، والحاجة إلى إنشاء والحفاظ على الإنتاجية مرفق الإسكان الزرد في تزايد أيضا. على الرغم من أن الأدب هو متاح لصيانة مختبر الزرد، وبروتوكول الفيديو موجزة غير متوفرة. هذا الفيديو يوضح البروتوكول العادية للسكن، تغذية، تربية اليرقات وتربية الزرد. هذه العملية سوف تساعد الباحثين على فهم السلوك الطبيعية والظروف المثلى لzebrafisح تربية، وبالتالي استكشاف الأخطاء وإصلاحها التجريبية التي تنشأ من ظروف تربية الأسماك. وهذا البروتوكول تكون عونا للباحثين تخطط لإنشاء مختبر الزرد، وكذلك لطلبة الدراسات العليا الذين يعتزمون استخدام الزرد ونموذج حيواني.
1. نظام الصيانة
2. تغذية
3. تربية
4. تربية اليرقات
الزرد الإسكان وصيانة أسهل وأرخص من النماذج التقليدية القوارض. يمكن أن يضم عدة آلاف من الزرد في مختبر صغير. نتيجة لهذا البروتوكول، فإن الباحثين تكون قادرة على إدارة منشأة الزرد التي ستوفر ظروف صحية إلى الزرد. وبالإضافة إلى ذلك، سوف الرسوم التوضيحية التالية تساعد في تحديد البويضات المخصبة، الزرد الكبار، وطعامهم. ويرد مثال لالزرد الذكور (الشكل 1A) والزرد الإناث (1B الشكل و1C) للمساعدة الباحثين التمييز بين الذكور والإناث لتربية اسماك الزرد الغرض صورة 2 توضح وجهة نظر المجهرية؛ ردي محلول ملحي في 12X (الشكل 2A)، والأرتيميا واحد في 90X (الشكل 2B)، والبيض الأرتيميا غير مخصبة في 90X (الشكل 2C). وهذا سوف يساعد في فهم الفرق بين الماء المالح الروبيان غير مخصبة والمخصبة للسندإيه أغراض التغذية. وتظهر البويضات المخصبة وغير المخصبة في الشكل 3. الشكل 3A يوضح وجهة نظر المجهرية للأجنة مخصبة وغير مخصبة. أجنة غير مخصبة غير شفافة بشكل عام و / أو مع خلية تمزق (ق) داخل المشيماء (السهم الأسود)، في حين الأجنة المخصبة يبدو سليما والمتزايد للدولة انقسام الخلية التالية (للقراءة مفصلة لمراحل مختلفة من الأجنة الزرد انظر 1). أعلى عرض التكبير من الشكل المخصبة ويظهر البويضة غير الملقحة في الشكل 3B 3C وعلى التوالي. 4 يبين حامل البيض والزرد الأنثى لمساعدة الباحثين التمييز بين الذكور والإناث في الزرد.
العديد من المشاكل الخطيرة التي قد تحدث في المختبر الزرد تشمل انسداد تدفق المياه إلى الفرد / جميع الدبابات في نظام الإسكان، وسوء نوعية المياه، وتسرب في أنابيب أو خزان للنظام تداول. وبالإضافة إلى ذلك،يمكن أن مشاكل في الحصول على أجنة من تربية يكون آخر قلق. وتناقش هذه القضايا من استكشاف الأخطاء وإصلاحها أدناه.
الشكل 1. مثال على الزرد وذكر (A) والإناث الزرد (B، C).
الشكل 2. رأي مجهرية من محلول ملحي في ردي 12X (A)، وهو الأرتيميا واحد في 90X (B)، والبيض الأرتيميا غير مخصبة في 90X (C).
الشكل 3. مشاهدة مجهرية (16X) من البيض المخصب وغير مخصبة، حيث يتم فقط اثنين من البيض غير ملقح، وأشار بويضة غير مخصبة مع السهام السوداء (A). التكبير العاليعرض (90X) ل. المخصبة (B) والبويضة غير الملقحة (C)
الشكل 4. A الزرد الأنثى حامل البيض (المشار إليها مع السهم الأسود) التوضيح.
المعلمة | مجموعة الأمثل |
القلوية | 50-150 ملغم / لتر كربونات الكالسيوم 3 |
درجة الحموضة | 6،8-7،5 (6،0-8،5 التسامح) |
درجة الحرارة | 26-28،5 ° C |
صلابة | 50-100 ملغ / L 3 كربونات الكالسيوم |
غير المؤينة الأمونيا | <0.02 ملغ / L |
النترات (NO 3 -) | <50 ملغ / L |
النتريت (NO 2 -) | <0.1 ملغ / L |
الأكسجين المذاب | > 6.0 ملغ / L |
التملح | 0،5-1 ز / L |
الموصلية | 300 ميكرو ثانية -1500 |
الجدول 2. معلمات نوعية المياه. المعلمات نوعية المياه. الأمثل مجموعة من البارامترات البيئية في الحوض الزرد 11.
الزرد تنبع من نهر الجانج في شمال الهند وأصبحت شعبية في البحث في البالغين على حد سواء ومراحل اليرقات 2، التي استعرضها سبنس وآخرون. 3. الزرد تمتلك العديد من المزايا نماذج حيوانية أخرى مثل الخصوبة العالية، سهولة الصيانة، وإزالة البصرية الأجنة، التطور الجنيني السريع، وانخفاض تكاليف الصيانة. فهي قابلة للتلاعب الجيني 6 و مناسبة لفحص المخدرات عالية الإنتاجية 4،5. الإخصاب الخارجي الذي هو من هو مفيد للاستخدام من قبل علماء البيولوجيا التطورية. بسبب هذه الخصائص مواتية، الزرد تكتسب شعبية في مجال علم الوراثة 7، الدوائية 8، والبحوث السلوكية 9،10. هناك عدد من التحديات في الحفاظ على منشأة الزرد وتربية الزرد للحصول على الأجنة. هنا، نحن تصف تجاربنا والتوصيات في التصدي لهذه التحديات وسutline بروتوكول لصيانة النظام، والتغذية، وتربية وتربية اليرقات.
نظام الصيانة
للحفاظ على الزرد في حالة صحية جيدة، من المهم أن توفر لهم بيئة نظيفة في نظام الحوض يعمل بشكل صحيح. جزء مهم من هذا هو تغيير النظام بحيث الفلاتر بانتظام أن جميع الدبابات تلقي السليم تدفق المياه والمياه النظيفة. فمن الأهمية بمكان لتجنب فشل الدراجات إمدادات المياه إلى خزان كل ذلك بسبب أنابيب نظام المحظورة. يمكن تنظيفها باستخدام أنابيب تدفق أعلى من ضغط المياه العادية، وإذا لم يحدث انسداد. من الناحية المثالية، ينبغي الاستعاضة حوالي 10٪ من المياه يوميا للنظام جيد للحفاظ على نوعية المياه. وبدلا من ذلك، يمكن استبدال الماء أثناء تغيير علبة أو فلتر الكربون. وهذا يضمن أن تتم إزالة الأوساخ المودعة في الأنابيب التي تربط هذه الفلاتر. يجب فحص نوعية المياه على أساس منتظم. المعلمات مثل درجة الحموضة، القلوية، temperatوينبغي النظر لدى عودتهم، والصلابة، والأمونيا، والأكسجين الذائب، الملوحة، والتوصيل من العوامل الهامة في تمثيل نوعية المياه النظام (انظر الجدول 2 لمزيد من التفاصيل). في أقل تقدير النترات، ينبغي رصد درجة الحموضة، ودرجة الحرارة على أساس منتظم لضمان نوعية جيدة للمياه الزرد الإسكان. نترات المثالي (NO 3 -) مستويات <50 ملغ / L 11، وإذا كان يمكن تقليل ارتفاع هذه المستويات من خلال استبدال الماء في نظام تداول مع المياه العذبة نظام. في بعض الأحيان، فلاتر لا يتناسب تماما وتسرب ذلك فمن المستحسن للتحقق من أي تسرب بعد تغيير الفلتر. إذا تم حظر تدفق المياه من الخزان الرئيسي إما بعد تغيير مضخة المياه أو تغيير عامل تصفية، يمكن استعادة تدفق المياه من قبل أي من تخفيف أو إزالة عامل التصفية لبضع ثوان لإطلاق سراح أي فراغ يتم إنشاء في الأنابيب. يمكن الوقت المطلوب لتغيير الفلاتر تختلف تبعا لعوامل مختلفة مثل مجموع س تحميل البيولوجيةن تودع النظام والنظافة من الفلاتر الأخرى، والأوساخ في الأنابيب. وبالتالي، ينبغي على الفور المرشحات يمكن تغييره إذا تظهر قذرة أو إذا كانت كافة الدبابات لا يحصلون على إمدادات المياه الصحيح. ويوصى أيضا أن يتم تنظيف السمك الصافي مع الايثانول 70٪، وتشطف في ماء لتطهير لها، ويترك ليجف قبل إعادة استخدامها. التجفيف يضمن تبخر الإيثانول الذي هو على خلاف ذلك سامة للأسماك.
معظم النظم استخدام الزرد دي المكلورة ماء الصنبور، ولكن بعض النظم استخدام الماء منزوع الأيونات. من المهم للحفاظ على التوصيل للمياه نظام ما بين 300 و 1500 ميكرو ثانية ~ وهذا يقلل من الطاقة للحفاظ على الأسماك يحتاج أملاح الجسم. لذلك، لا يمكن أن يوضع في الزرد المياه منزوع الأيونات ما لم تتم إضافة الأملاح للحفاظ على مستويات التوصيل الأمثل. هناك خطر من الممكن تركيزات عالية من النحاس في الماء إذا تم استخدام نظام مياه الحنفية لأن فلتر الكربون لا يزيل النحاس. ولذلك، شيجب التحقق من وجود تركيزات السرس النحاس والنحاس الأنابيب تجنب حيثما أمكن ذلك.
تغذية
لا ينبغي أبدا أن نفرط الزرد لأن هذا قد يزيد من مستوى النترات في المياه، مما يؤثر على تكاثرها وربما 11 أو جدوى، حيث أن بعض الأسماك قد يموتون بسبب الإفراط في تناول الطعام. لا نوصي توفير المزيد من الغذاء خلال أي من التغذية 1 دبابة من الأسماك يمكن أن تنتهي في غضون 10 دقيقة. من المهم جدا لإزالة الملح من الماء المالح الروبيان قبل إطعامهم إلى الزرد وزيادة تركيز الملح يسبب الموت. إذا كانت هناك حاجة البيض أكثر الزرد، يمكن تناول السمك ثلاث مرات في اليوم. تنظيف خزانات الأسماك المربي يوميا يحسن أيضا مستويات إنتاج البيض.
عندما يتغذى على أنظمة الموائل المائية ننتقل عادة قبالة مضخة مياه ومضخة الهواء للسماح للأسماك لتناول الطعام لمدة 10 دقيقة. هذا يقلل من كمية الطعام التي يتم غسلها في الفلاتر. ومع ذلك، يجب على المستخدمين توخي الحذر لعينييعيرها لتشغيل هذه المضخات بعد ذلك مرة أخرى.
تربية
وعادة ما تكون في الزرد حالة تربية الأمثل بين ~ 3 و 18 شهرا من العمر. لا ينبغي أن يؤديها تربية البشرى ليومين متتاليين 11؛ ومع ذلك، يمكن لا يمكن أن يؤديها في تربية اليومي للدبابات ودبابة عقد العديد من الأسماك مما يقلل من فرصة للزوج نفسه من الأسماك التي تربى لمدة يومين على التوالي. وينبغي الاضطلاع تربية على فترات منتظمة حتى لو لم يطلب البيض. وسوف تضمن هذه العملية هو الحفاظ على دورة تربية الأسماك. فمن المستحسن أن هناك أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء. ذكر الزرد تغيير شريكاتهم على أساس يومي لمدة 12 الذي يدعم المزيد من هذه التوصية. وعلاوة على ذلك، في غضون مختبرنا عانينا في البداية مشاكل مع تربية، ومع ذلك، باستخدام أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء ساعدت في حل المشكلة. وعلاوة على ذلك، والتغذية مع كونتي نسبة عالية من البروتينNT النظام الغذائي والأرتيميا 2-3 مرات في اليوم، والأسماك من الدبابات خلط مختلفة (من الآباء والأمهات مختلفة)، والحفاظ على درجة حرارة تربية انشاء ما بين 27 و 28 درجة مئوية، والضغط على البطون من الإناث مع أنابيب المبيض منعت استخدام تدليك لطيف زيادة تحسين إنتاج البيض. نوصي الاحتفاظ بسجل للخطوط الأسماك / أصول لتجنب في تربية بين الأشقاء. هذا يحسن من إنتاج الجنين. الاحتفاظ بسجل لعدد الأجنة التي وضعتها من كل خزان الأسماك ويوصى أيضا. هذا يساعد في الحفاظ على المسار من الدبابات تربية الأسماك أفضل واتخاذ تدابير لتحسين تربية الأسماك في وضع البيض لا.
تربية اليرقات
يجب تغذية اليرقات تبدأ في الفترة من 5 DPF (أيام الإخصاب آخر). ويمكن تغذية اليرقات الصغيرة مع الأغذية الجافة من ميكرون في الحجم 100 ~ (على سبيل المثال، ZM100) أو غذاء حي مثل المتناعلة والروتيفر (الذي يحفز النمو). يمكن ببطء حجم الطعام يمكن زيادةإلى 200 ميكرون (مثل ZM200) أو 300/400 ميكرون (مثل ZM300). وينبغي أن يكون من السكان البالغين الأسماك تكون حوالي 6-7 الأسماك لكل لتر من الماء. ويوصى هذه الممارسة لتحسين صيانة BOD (الطلب على الأكسجين البيولوجي) إلى الدبابات.
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
فإن الكتاب أود أن أشكر تامي اسماعيلي لمساعدتها في إدارة المواد الاستهلاكية المختبرات. AA هو حاصل على منحة دراسية الدكتوراه من مركز التميز لأبحاث مرض الزهايمر والعناية، كلية العلوم الطبية، جامعة إديث كوان. MC يتلقى دكتوراه التمويل بدعم من نادي روتاري، بيرث. AM، وتمول GV، KT، وRNM من مؤسسة أبحاث الزهايمر في كوسكر.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
اسم كاشف / معدات | شركة | كتالوج رقم | |
الزرد المتداولة النظام | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | القصيبي قائمة بذاتها، مقعد بين كبار أنظمة | |
بيكربونات الصوديوم | سيغما الدريتش | S6297 | |
السمك مصدر الغذاء / الغذاء الجاف التغذية | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | AH19 | |
مجهر | OLYMPUS | SZX12 | |
الأغذية الجافة | ZM الغذائية الأسماك، UK | ZM100، ZM200، ZM300 | |
البيض محلول ملحي الروبيان | الملح كريك، وشركة، الولايات المتحدة الأمريكية | قسط الصف | |
في مربي للدبابات | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | ITSTS-A | |
الكربون المنشط | بن Plax-الموالية للسرطان، الولايات المتحدة الأمريكية | PBC3MF | |
تربية الدبابات | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | SBTANK (1L) المربي صهريج-2 (2L) | |
البحر الاحمر الملح | البحر الاحمر الملح، الولايات المتحدة الأمريكية | متجر للحيوانات الاليفة المحلية / www.redseafish.com | |
المرشحات (علبة، ومنصات التصفية، والأشعة فوق البنفسجية) | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | aquatichabitats.com | |
Siporax وسائل الإعلام | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | BF 820 | |
محلول ملحي الروبيان صافي | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | BSN1 | |
محلول ملحي الروبيان هاتشر | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | BS252 | |
يحير | الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية | aquatichabitats.com | |
الجدول 1. جدول الكواشف محددة والمعدات المستخدمة في هذا البروتوكول. |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved