Регулярный уход и обслуживание данио рерио (<em&gt; Данио рерио</em&gt;) Лаборатория: введение

Резюме

Этот протокол описывает регулярного технического обслуживания и ухода для поддержания оптимальных условий для рыбок данио хозяйства. На видео показан протокол для обслуживания системы, регулярное жилья, питания, размножения и повышения рыбок данио личинки.

Аннотация

Этот протокол описывает регулярного ухода и обслуживания лаборатории рыбок данио. Данио рерио в настоящее время приобретает все большую популярность в области генетики, фармакологических и поведенческих исследований. В позвоночных, у рыбок данио долю значительное генетическое сходство последовательностей с людьми и используются в качестве животной модели для различных человеческих условиях болезни. Преимущества рыбок данио по сравнению с другими распространенными моделями позвоночных включает высокую плодовитость, низкие затраты на техническое обслуживание, прозрачные эмбрионы, и быстрого развития. В связи с влиянием интереса у рыбок данио исследования, необходимость установления и поддержания продуктивного объекта жилья рыбок данио также растет. Хотя литература доступна для содержания лабораторных рыбок данио, кратким протоколом видео отсутствует. Это видео иллюстрирует протокол для регулярного содержания, кормления, разведения и выращивания личинок рыбок данио. Этот процесс поможет исследователям понять естественное поведение и оптимальные условия zebrafisч хозяйства и, следовательно, устранения экспериментальных вопросов, которые исходят из условий рыбного хозяйства. Этот протокол будет огромной помощью для исследователей планирует создать лабораторию данио рерио, а также для аспирантов, которые намерены использовать рыбок данио качестве животной модели.

протокол

1. Сопровождение системы

1. Данио рерио хранятся в системе циркуляции, который постоянно фильтры и аэрацию воды в системе для поддержания качества воды, необходимый для здоровой водной среде. Циркуляционная система также помогает фильтровать избыток пищи и экскрементов рыб. Различные компании предлагают рыбок данио системы, но мы используем системы из водной среды обитания, США, в нашей лаборатории. Комнатной температуры или температуры в баке, как правило, поддерживают между 26-28.5 ° C и условия освещения 14:10 часов (свет: темнота). Данио системы от водной среды обитания (например, настольной системы) расходы ~ 9,000 USD. Эта настольная система с двумя полками можно провести шесть 10-литровых, двенадцать 3-литровые или двадцать 1,5-литровый танков на каждой полке. Несколько строк из рыбы (например, трансгенные, мутанта, дикий тип) также могут быть размещены на той же системе.
2. Множество различных фильтров, используемых в системе. В нашей системе, вода из всех танков в годМП через 120-микронный фильтр площадке, 50-микронной канистру фильтра, биологический фильтр, активированный уголь поглощения фильтра и УФ-обеззараживания фильтр перед распространяется обратно в резервуар. De-chlorinated/aged вода используется в системе рыбок данио. Вода может быть де-хлорированной от старения, по крайней мере, 48 часов. В идеальных условиях, вода должна храниться в резервуар с насосом циркуляции воды, чтобы держать его теплым, и ускорить де-хлорирование.
3. РН воды должны проверяться ежедневно и поддерживается между 6,8 и 7,5. При необходимости, бикарбонат натрия следует использовать для увеличения рН.
4. Рыба танки должны регулярно очищаться. Для чистки аквариума, закрыть поток воды в этот резервуар, слейте лишнюю воду, наклонив бак обратно и снимите бак тщательно из системы. Грязь и рост водорослей будут очевидны на дне и по бокам танка.
5. Установите перегородку в чистую емкость, и залейте де-хлорированной водой (иначе система ватер). Осторожно передавать рыб в этот резервуар с рыбой сети. Закройте крышку и передать табличку резервуара. Аккуратно положите чистый бак в системе и включить подачу воды.
6. Для обеззараживания рыбы чистая, спрей с 70% этанола, промыть в воде, и дайте ему высохнуть перед повторным использованием. Убрать перегородку из грязного бака и распылить обе части с 70% этанола. Тщательно промойте проточной водой и дайте танк и сбивать с толку, чтобы полностью высохнуть перед повторным использованием.
7. Циркулирующих фильтры системы должны быть проверены и регулярно менять, чтобы обеспечить их надлежащее функционирование. Эти фильтры следует менять регулярно, чтобы обеспечить правильное и чистое водоснабжение всех танков рыбы.
8. 120-микронного фильтра площадки, как правило, изменить или заменить ежедневно; переместить в направлении потока воды, чтобы использовать его полностью перед заменой на новый.
9. Канистра фильтра следует менять раз в неделю. Чтобы изменить канистру фильтра, снимите фильтр, поворачивая муравьевiclockwise с помощью гаечного ключа или руки. Поместите пластиковую простыню или полотенце ниже, чтобы предотвратить или поглощать воду пролива. Замените канистру фильтра на новую и установить фильтр на устройство в системе, обязательно затяните с рук и ключом в случае необходимости.
10. Угольный фильтр следует менять раз в две недели (каждые две недели). Чтобы изменить угольный фильтр, снять блок угольного фильтра тщательно с помощью гаечного ключа. Утилизируйте использованный активированный уголь и заменить его новым активированного угля. Установите на место держатель углерода и поместить его обратно в фильтр. Установить фильтр на устройство в системе. Включите систему и проверить, что вода течет в фильтр. Если необходимо, промойте небольшим количеством воды по трубам для очистки грязи в трубах перед установкой фильтра в системе.
11. Биологический фильтр следует чистить каждые шесть месяцев. Биологический фильтр, как правило, расположены между канистру и угольный фильтр в системе циркуляции. Чтобы изменить биологический фильтр, бэрОве фильтр из системы. Сбросьте давление из фильтра, нажав на кнопку сброса давления. Отвинтите фильтр с помощью гаечного ключа. Вообще два человека, необходимых для этого шага. Снимите крышку фильтра. Вылейте содержимое фильтра в просеянную контейнеров для разделения siporax из воды. Примечание: Siporax является прекрасным пор био-фильтра, который имеет возможность выполнять как нитрификации и денитрификации.
12. Если siporax очень грязный заменить его на новый. Заполните фильтр с системой воды (де-хлорированной воды), закрыть крышкой, верните фильтр в системе и включить подачу воды. Примечание: В приспособиться аквариум, siporax будет домом для нескольких нитрифицирующих бактерий. Эти микроорганизмы имеют решающее значение для поддержания круговорота азота в аквариуме, и удаление первичного жилья для биологического фильтра (грязный siporax) может привести к серьезным шипованные аммиака, а затем нитритов всплеск в то время как пEW биологического фильтра (с siporax новые) является восстановление. Оба эти промежуточные состояния азотного цикла могут быть токсичными для водных организмов, и может убить рыбок данио, если не ответил на соответствующим образом. Таким образом, важно иметь вторичный биологический фильтр в другом месте в системе рыбок данио жилья (например, в коллекции танк в водные системы среды обитания), что позволяет быстрое заселение этих важных микроорганизмов на новые siporax.
13. УФ-фильтры используются для управления системой биологических загрязнителей (например, бактерии) и должны быть заменены каждые девять-десять месяцев. Следует отметить, что УФ-фильтром дозы лечение ~ 110 мДж / см ² в начале срока службы лампы и мощность дозы уменьшается в течение времени, следовательно, необходимо заменить мире, даже когда кажется, что все еще ​​будет функциональным.

2. Кормление

1. Данио рерио можно кормить сухим кормом (продукты питания размером от 100 микрон для личинок тO 300/400 мкм для взрослых рыб) или живой корм (рассол креветки). Артемии (Artemia зр.) Яйца можно приобрести у местных зоомагазинах и могут быть выведены в лаборатории, следуя простым шагам, описанным ниже.
   1. Растворите красной морской соли в воде возраста, поставив стакан с солью на магнитной мешалки для лучшей растворимости. Кроме того, соль может быть растворена в воде аэрации его с аэрацией трубку. Мгновенный соль океана также может быть использован в качестве инкубационных решение, если красная морская соль не доступен. Артемия может терпеть широкий диапазон солености, однако, мы люк наши креветки (10-15 г) в 30-35 г / л красная соленая морская вода. Примечание: В случае яиц артемии не доступны в местных зоомагазинах затем инкапсулируются креветки рассола также может быть использован после "decapping" их в партии, прежде чем добавить их к креветки инкубатора. Это могло бы также избежать частых поездок в зоомагазине.
   2. Заполните выводных креветки с сал воды и добавьте креветки яйца в концентрации 1,2 столовые ложки / литр. Проветривайте выводных энергично с воздушным насосом и оставить яиц артемии, чтобы люк в течение ~ 48 часов.
      Примечание: Следует отметить, что ООН обогащенного креветки теряют питательную ценность каждого часа после вылупления. Таким образом, может быть целесообразно либо люк в течение 24 ч или обогащения за 48 часа для того, чтобы получить максимальную пищевую ценность из креветок.
   3. Сточные воды из инкубационных системе добавляется в карантин отходов, подлежащих дезинфекции с отбеливателем и утилизировать в дальнейшем.
2. Для сбора рассол креветки, удалить воздух трубы и позволяют культуры согласиться на 4-5 мин, но не более чем на 10 мин. Вылупившихся креветок рассола собираются в нижней части Хэтчер.
   1. Сбор рассол креветки помощью крана в нижней части инкубатора. Откажитесь от начальной поток, который состоит из не-вылупившихся яиц артемии.
   2. После удаления не-вылупившихся креветок рассола, собирать вылупившиеся рассол креветки, которые будут использоваться в качестве пищи рыбок данио.
   3. Отделить рассол креветки с соленой водой, используя коллекцию артемии сети (~ 350 микрон нейлоновой сетки). Промойте рассол креветок из сети в контейнере с помощью системы водой.
3. Собранные креветки рассола обычно присутствуют в высокой концентрации в нижней части контейнера придав ему, а оранжевый цвет.
4. Подача рассола креветок с данио рерио с помощью пипетки или капельницы / Squeezy бутылку. Количество пищи обойтись зависит от размеров популяций отдельных танков. Общепринятого соотношения для рыбок данио, чтобы получить 4% от массы тела в пищу в день. Данио рерио никогда не должно быть перекорм, так как это может увеличить уровень нитратов в воде, возможно, влияющих на их размножения, или жизнеспособность, так как некоторые рыбы могут умереть из-за переедания.
   1. По инъекционных пищи вводы, голодные рыбы плавают, чтобы поймать рассол креветки.
5. Сухое кормление может быть выполнена с использованием водных Eco-System / водную среду обитания простых Весной на основе рыб дозатором. Кроме того, сухое кормление также может быть выполнена с помощью простой ложкой или путем разрезания пластиковых пипетки по диагонали с ножницами, чтобы придать ему вид небольшой ложкой.

3. Разведение

1. Данио начать разведение в начале света. Оплодотворенные яйца могут быть получены либо путем в резервуаре размножения или разведения попарно. В то время как в резервуаре разведения более эффективного труда и реализуется для регулярного сбора эмбрионов в нашей лаборатории, попарно размножения является предпочтительным, когда гены или мутации должны быть экранированы от отдельных рыб.
2. Для в резервуаре разведения, собрать в резервуар заводчика и медленно снижаться в аквариуме после появления света. Кроме того, в резервуаре разведения настройки можно оставить на ночь в аквариуме.
3. Lкарниза в резервуар заводчика около 15 минут, чтобы рыба к спариванию перед снятием заводчик из бака и сбор яиц.
4. Парные размножения обычно устанавливается в конце дня после кормления.
5. Соберите разведения бак и заполнить его возраста водной системы.
6. Передача одна женщина и один мужчина на противоположных сторонах разведения танк. Женщины могут быть отделены от мужчин из-за их больших подбрюшье. Мужчины также можно отличить от самок, поскольку они более тонкие и более темного цвета, чем женщины. Кроме того, мужчины имеют более желтое окрашивание в анальный плавник, чем женщины (см. Рисунок 1). В случае сомнений ищет яйцеклада у самок рыбок данио (см. Рисунок 4).
7. Снимите делителя на следующее утро вскоре после появления света. Разрешить спаривание происходит в покое на 20 минут или пока достаточное количество эмбрионов заложен в нижней части бака.
8. После разведения,вернуть рыбу в свои танки. Сбор яиц помощью фильтра.
9. Промойте эмбрионы тщательно воды в системе.
10. Перенесите эмбрионы в чашку Петри путем промывки фильтра с эмбрионом среды; ака EM3 (NaCl, 13,7 мм; KCl, 0,54 мм; MgSO _4, 1,0 мМ; CaCl _2, 1,3 мМ, Na ₂ HPO _4, 0,025 мм; KH ₂ PO _4, 0,044 мм; NaHCO _3, 4,2 мм).
11. Эмбрионы можно наблюдать под микроскопом. Оплодотворенные яйца отделяют от неоплодотворенных яиц с помощью иглы и пипеткой (см. Рисунок 3).

4. Повышение Личинки

1. Оплодотворенные яйца хранятся в инкубаторе (~ 28,5 ° C) в течение 72 часов, пока личинки вылупились.
2. Теперь личинки из хориона и бассейн свободно они готовы передать в основной аквариум. Личинки должны питаться от 5 дней после оплодотворения (DPF) и находятся в зачаточном состоянии среды (композиции, описанной вЧасть 3, 10) или воды в системе. Личинки могут быть сохранены в круглых блюд с ~ 50% или больше воды в нем изменилось на ежедневной основе. Вода изменения должны включать в себя удаление мертвых или больных личинок и любой другой мусор.
3. Передача личинок аккуратно в резервуар, содержащий небольшого размера перегородки (около 300-400 мкм). Мертвые и больные личинки должны быть удалены и несколько миллилитров воды следует медленно добавляют на ежедневной основе.
4. Через 14 дней, личинки танки могут быть отложены в систему, и поставляется с небольшим потоком воды езда на велосипеде (1-2 капли в секунду). Как личинки растут, поток воды может быть увеличен. Различные размеры экранов могут быть использованы в зависимости от размера личинок (например, перегородки размером 300-400, 500, 700-750 и 1000 микрон) и обычный пластиковый дефлектор должен быть использован для взрослых рыб.
5. Это обычно занимает от 3 месяцев для эмбрионов развиваются в половозрелых взрослых.

Результаты

Данио рерио жилье и обслуживание проще и дешевле, чем в традиционных моделях грызунов. Несколько тысяч данио рерио могут быть размещены в небольшой лаборатории. В результате этого протокола, исследователи смогут управлять рыбок данио объект, который будет обеспечивать здоровые условия для рыбок данио. Кроме того, на следующих рисунках поможет определить оплодотворенные яйца, взрослые данио рерио, и их пища. Иллюстрация мужчина рыбок данио (рис. 1А) и женский рыбок данио (рис. 1B и 1C) показано, чтобы помочь исследователям различать между мужчиной и женщиной для разведения рыбок данио целью рисунке 2 представлены микроскопические зрения;. Рассоле креветки на 12X (рис. 2А), одного артемии на 90X (рис. 2В), и неоплодотворенные яйца артемии на 90X (рис. 2С). Это поможет в понимании разницы между неоплодотворенных и оплодотворенных креветки рассола для опорыэ целей кормления. Оплодотворенных и неоплодотворенных яиц показано на рисунке 3. 3А показан микроскопический вид оплодотворенные и неоплодотворенные эмбрионы. Неоплодотворенные эмбрионы, как правило, непрозрачна и / или с разрывом клеток (ы) внутри хориона (черная стрелка), в то время как оплодотворенных эмбрионов представляется нетронутым и растущие в следующее состояние клеточного деления (для подробного чтения различных стадиях эмбрионы рыбок данио см. ^1). Высшее увеличении зрения оплодотворенных и неоплодотворенных яйца показано на рисунке 3В и 3С соответственно. Рисунке 4 показана яйцеклада самка данио рерио, чтобы помочь исследователям различать между мужчиной и женщиной рыбок данио.

Несколько важных проблем, которые могут возникнуть в лаборатории рыбок данио включать блокировку подачи воды в отдельные / все танки в корпусе системы, плохое качество воды и утечки в трубах или резервуар циркуляционной системы. Кроме того,проблемы с получением эмбрионов от разведения может быть еще одна проблема. Устранение этих проблем обсуждаются ниже.

Рисунок 1. Иллюстрация мужчина рыбок данио (A) и женский рыбок данио (B, C).

Рисунок 2. Микроскопического зрения рассол креветки на 12X (A), одного артемии на 90X (B), и неоплодотворенные яйца артемии на 90X (C).

Рисунок 3. Вид под микроскопом (16X) из оплодотворенных и неоплодотворенных яиц, где только два яйца неоплодотворенные, неоплодотворенные яйца указаны с черными стрелками (A). Высшее увеличенияВид (90X) из оплодотворенной (B) и неоплодотворенные яйца (C).

Рисунок 4. Самка данио рерио в яйцеклад (указано черной стрелкой) иллюстрации.

Параметр	Оптимальный диапазон
Щелочность	50-150 мг / л CaCO 3
рН	6,8-7,5 (6,0-8,5 допускается)
Температура	26-28.5 ° C
Твердость	50-100 мг / л CaCO 3
Un-ионизированный аммиак	<0,02 мг / л
Нитраты (NO 3 -)	<50 мг / л
Нитриты (NO 2 -)	<0,1 мг / л
Растворенный кислород	> 6,0 мг / л
Соленость	0,5-1 г / л
Проводимость	300 -1 500 мкс

Таблица 2. Параметров качества воды. Параметров качества воды. Оптимальный диапазон параметров окружающей среды в аквариуме рыбок данио ^11.

Обсуждение

Данио рерио происходит из реки Ганг на севере Индии и становятся популярными в исследование как в их взрослой и личиночной стадии ^2, рассмотрены Спенс и др.. ^3. Данио рерио обладают рядом преимуществ по сравнению с другими моделями животных, таких как высокая плодовитость, легкость обслуживания, оптический оформления эмбрионов, быстрое эмбриональное развитие, и низкая стоимость обслуживания. Они поддаются генетическим манипуляциям ⁶ и подходит для высокой пропускной способностью ^4,5 скрининга лекарственных средств. Их оплодотворение наружное что является преимуществом для их использования онтогенетики. В связи с этими благоприятными характеристиками, рыбок данио набирают популярность в генетике ^7, фармакологические ^8, и поведенческие исследования ^9,10. Есть ряд проблем, для поддержания объекта рыбок данио и рыбок данио животноводства для получения эмбрионов. Здесь мы описываем наш опыт и рекомендации в решении этих проблем и оutline протокол для обслуживания системы, кормления, разведения и выращивания личинок.

Система технического обслуживания

Для поддержания данио рерио в здоровом состоянии, важно обеспечить их чистой среде, в нормально функционирующей системе аквариума. Важной частью этого меняется система фильтров регулярно, так что все танки получают надлежащего потока воды и чистой воды. Очень важно, чтобы избежать провала водоснабжения езды на велосипеде на каждом танке в связи с их трубами системы. Трубы можно очистить с помощью выше нормального давления и расхода воды, если блокирование имеет место. В идеале, около 10% воды в системе должно быть заменено в день, чтобы поддерживать хорошее качество воды. Кроме того, вода может быть заменена при изменении канистра или угольный фильтр. Это гарантирует, что грязь на хранение в трубах, соединяющих эти фильтры удаляют. Качество воды должна быть проверена на регулярной основе. Такие параметры, как щелочность, рН, температЮр, жесткость, аммиак, растворенный кислород, соленость и проводимости должны рассматриваться как важные факторы в представлении качества воды в системе (см. таблицу 2 подробнее). По крайней мере, нитратов, рН и температуры должны быть проверены на регулярной основе в целях обеспечения хорошего качества воды на жилье рыбок данио. Идеально нитратов (NO ^{3 -)} уровней <50 мг / л ^11; если высокий этих уровней может быть уменьшена заменой воды в циркуляционной системе с пресной водой системы. Иногда, фильтры не подходят хорошо, и утечка, поэтому рекомендуется проверить на герметичность после замены фильтра. Если поток воды из основного водохранилища заблокирован либо после замены водяного насоса или изменения фильтра, поток воды может быть восстановлен либо ослабления или удаления фильтра в течение нескольких секунд, чтобы освободить любой вакуум генерируется в трубах. Время, необходимое для изменения фильтра может меняться в зависимости от различных факторов, таких как общая биологическая нагрузка Oп система, чистота другие фильтры, и грязь на хранение в трубах. Таким образом, фильтры должны быть немедленно изменены, если они появляются грязные или если все танки не получают правильного водоснабжения. Рекомендуется также, что рыба чистая быть очищены с 70% этанола и промывается в воде для обеззараживания, и дают высохнуть, прежде чем использовать повторно. Сушка обеспечивает испарение этанола, который в противном случае является токсичным для рыб.

Большинство систем рыбок данио использовать де-хлорированной водопроводной воды, однако некоторые системы используют деионизированной воды. Это важно, чтобы проводимость воды в системе от 300 до ~ 1500 мкс, так как это уменьшает энергию рыб необходимо поддерживать тело солями. Таким образом, у рыбок данио не могут быть сохранены в деионизированной воде, если соли добавляют для поддержания оптимального уровня проводимости. Существует риск возможной высокой концентрации меди в системе воды, если водопроводная вода используется потому, что угольный фильтр не удаляет медь. Таким образом, иГКР должны проверить концентрации меди и медных трубопроводов избежать где это возможно.

Кормление

Данио рерио никогда не должно быть перекорм, так как это может увеличить уровень нитратов в воде, возможно, влияющих на их разведении ^11, или жизнеспособность, так как некоторые рыбы могут умереть из-за переедания. Мы рекомендуем обеспечить не более еды в течение одного кормления, чем бак рыб можно закончить в течение 10 мин. Это очень важно для удаления соли из рассола креветки перед подачей их на рыбках данио, как избыточная концентрация солей приводит к смерти. Если больше яиц рыбок данио требуются, рыбу можно кормить три раза в день. Очистка танков заводчик рыбы ежедневно также повышает уровни производства яиц.

При подаче на водной системы среды обитания мы обычно выключить водяной насос и воздушный насос, чтобы рыбку съесть пищу в течение 10 мин. Это уменьшает количество пищи, которая смывается в фильтрах. Тем не менее, пользователи должны быть осторожны, чтобы бэрEmber, чтобы включить эти насосы потом снова.

Разведение

Данио рерио, как правило, при оптимальных условий размножения между ~ 3 и 18 месяцев. Парные разведения не должна быть выполнена в течение двух последовательных дней ^11, однако в резервуаре разведения можно проводить ежедневно, как танк может содержать много рыбы, которая снижает вероятность той же пары рыб разводят в течение двух дней подряд. Разведение следует проводить на регулярной основе, даже если яйца не требуется. Этот процесс обеспечит цикл размножения рыб сохраняется. Рекомендуется есть больше женщин, чем мужчин в разведении настройки. Мужской рыбок данио менять своих партнерш на ежедневное ^{12 базисных} что еще поддерживает эту рекомендацию. Кроме того, в нашей лаборатории мы изначально испытывал проблемы с размножением, однако, используя больше женщин, чем мужчин в разведении настройки помогли решить проблему. Кроме того, кормление с высоким содержанием белка КонтеNT диеты и креветки в два-три раза в день, смешивая рыб из разных танки (от разных родителей), поддерживая температуру разведения настройка между 27 и 28 ° C, и сжимая живот самок с их использованием труб яичников Нежный массаж дальнейшее совершенствование производства яиц. Мы рекомендуем вести учет рыбы линий / Истоки, чтобы избежать в животноводстве между братьями и сестрами. Это еще больше повышает эмбриона производства. Вести учет количества эмбрионов заложены рыб из каждого танка также рекомендуется. Это помогает при сохранении трека из лучших танков разведения рыбы и принятия мер по улучшению племенного дела в рыбе не откладывают яйца.

Повышение личинок

Кормление личинок должно начаться с 5 DPF (дней после оплодотворения). Молодые личинки могут питаться сухим кормом ~ 100 мкм (например, ZM100) или живого корма, такие как Paramecium и коловратки (который стимулирует рост). Еда размер может быть увеличен медленнодо 200 микрон (например ZM200) или 300/400 мкм (например, Zm300). Население взрослая рыба должна быть около 6-7 рыб на литр воды. Эта практика рекомендуется для лучшего обслуживания БПК (биологическое потребление кислорода) к танкам.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Название реагента / оборудования	Компания	Номер в каталоге
Данио рерио циркуляционной системы	Водной среды обитания, США	Ахав автономно, настольные системы
Бикарбонат натрия	Sigma Aldrich	S6297
Рыба дозатор питания / Сухие подачи пищи	Водной среды обитания, США	AH19
Микроскоп	Олимп	SZX12
Сухой корм	ZM Корм ​​для рыб, UK	ZM100, ZM200, Zm300
Яиц артемии	Salt Creek, Inc, США	Premium Grade
В баке заводчиков	Водной среды обитания, США	ITSTS-
Активированный уголь	Penn-Plax Pro-краб, США	PBC3MF
Разведение танки	Водной среды обитания, США	SBTANK (1L) Заводчик Танк-2 (2L)
Красный морской солью	Красный морской соли, США	Местный зоомагазин / www.redseafish.com
Фильтры (канистры, фильтры колодки, и UV)	Водной среды обитания, США	aquatichabitats.com
Siporax СМИ	Водной среды обитания, США	BF 820
Чистая Артемии	Водной среды обитания, США	BSN1
Хэтчер Артемии	Водной среды обитания, США	BS252
Перегородки	Водной среды обитания, США	aquatichabitats.com
			Таблица 1. Таблица специфических реагентов и оборудования, используемых в этом протоколе.