JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يوفر زراعة الكبد مساعد دعم مؤقت في فشل كبدي حاد، وحتى تجديد الكبد بالفشل. زرع منتبذ مساعدة الكبد (سكتة) مع arterialization الوريد البابي (PVA) يجعل وظيفة الكبد كافية. قمنا بتطوير تقنية مشابهة في الفئران، لدراسة تأثير arterialization الوريد البابي على التشكل وظيفة من الكسب غير المشروع.

Abstract

فشل كبدي حاد في زراعة الكبد مساعد هو نهج بديل للاهتمام. الهدف هو توفير الدعم المؤقت لحين إعادة إنشاء الكبد الأصلي فشلها. 1-3 APOLT-الأسلوب، وزرع مثلي من segments- مساعد يحول دون الإصابة معظم المشاكل التقنية. ولكن هذا الأسلوب يتطلب استئصال واسعة من كل من الكبد الأصلي والكسب غير المشروع. 4 في عام 1998، وضعت ايرهارد زرع منتبذ مساعدة الكبد (سكتة) باستخدام الوريد البابي arterialization (PVA) (الشكل 1). وأظهرت هذه التقنية واعدة النتائج السريرية الأولية. 5-6 طورنا توقف دام تقنية مع تنظيم تدفق PVA في الفئران لدراسة تأثير التنظيم تدفق PVA على التشكل الكسب غير المشروع وظيفة (الشكل 2).

والكسب غير المشروع الكبد خفضت إلى 30٪ من حجمها الأصلي، وزرع heterotopically في منطقة الكلى اليمنى للمستلم بعد explantation من الكلية اليمنى.60. تم anastomosed الوريد الأجوف الأشعة تحت الكبد من الكسب غير المشروع مع الوريد الأجوف infrahepatic للمتلقي. تم تنفيذ arterialization من الوريد البابي المتبرع بها عن طريق الشريان الكلوي الأيمن المستلم مع تقنية الدعامات. وقد تحقق تنظيم تدفق الدم من الوريد البابي arterialized مع استخدام الدعامة التي يبلغ قطرها الداخلي 0.3 مم. كان الجذع الاضطرابات الهضمية من الكسب غير المشروع وزرع نهاية إلى الجانب anastomosed مع الشريان الأورطي المستلم والقناة الصفراوية في الاثني عشر. أجري استئصال المجموع الفرعي للكبد الأم للحث على الفشل الكبدي الحاد. 7

بهذه الطريقة تم إجراء 112 عملية زرع. كان معدل البقاء على قيد الحياة المحيطة بالجراحة 90٪ وكان معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 6 أسابيع 80٪. بعد ستة أسابيع من العملية، والكبد الأصلي مجدد، والتي تبين زيادة في الوزن من 2.3 ± 0.8 غرام إلى 9.8 غرام ± 1. في هذا الوقت، انخفض الوزن الكسب غير المشروع من 3.3 ± 0.8 غرام إلى 2.3 ± 0.8 غرام. تمكنا من الحصول على نتائج واعدة على المدى الطويل من حيث التشكل الكسب غير المشروع والوظيفة. سكتة مع تنظيم تدفق PVA الجسور موثوق الفشل الكبدي الحاد حتى يجدد الكبد الأصلي.

Introduction

الفشل الكبدي الحاد يشكل مشكلة حادة في الطب السريري مما يؤدي إلى معدل وفيات من 60-80٪. 8 في الفشل الكبدي الحاد، وزرع الكبد هو العلاج المساعد بديل واعد لسد المرحلة الحادة. يتم ترك الكبد الأصلي لتجديد والتالية إلى تجديد الأدوية المناعة يمكن وقفها. ونتيجة لذلك الكسب غير المشروع سيصبح الضموري. لكن تقنية المنطوق لزرع الكبد المساعد لا يزال مناقشتها. 1-3 وفي هذا السياق، ذكرت تيربسترا عدم وجود مساحة للالكسب غير المشروع، والدم البابي سرقة ظاهرة ومشكلة الازدحام وريدي والصرف. 9-10 الوريد البابي المتبرع تم anastomosed نهاية إلى جنب لالبابي المستلم. وأدى ذلك إلى تدفق بوابة المنافسة بين الفساد والكبد الأصلي وبوابة خثار الأوردة. ويمكن تجنب معظم تلك المشاكل التقنية مع استخدام APOLT-طريقة (orthotopجيم زرع شرائح المساعدة). 4 ولكن هذا الأسلوب يتطلب استئصال واسعة من كل من الكبد الأصلي والكسب غير المشروع. 4 في عام 1998، ايرهارد وفريقه بتطوير زرع منتبذ مساعدة الكبد (سكتة) باستخدام الوريد البابي arterialization (PVA) (الشكل 1 ). تحترم نقير والوريد البابي للكبد الأم مع استخدام هذا الأسلوب. أن قطع الغيار المستلم من آثار جانبية غير مرغوبة مثل تخثر الوريد البابي والدم البابي سرقة الظاهرة، التي يمكن أن تعيق الانتعاش الكبد الأصلي. بالإضافة إلى ذلك، ليس هناك حاجة لاستئصال الكبد واسعة من الكبد الأصلي والكسب غير المشروع لهذا الأسلوب، وبالتالي أقل والمزيد من نزيف المتبقية مجموع كتلة متني الكبد لسد (الكسب غير المشروع) والتجديد (الكبد الأصلي). وأظهرت هذه التقنية واعدة النتائج السريرية الأولية. 5-6 وكان الهدف من هذا العمل التجريبي في تطوير تقنية سكتة مع arterialization في الوريد البابيالفئران لأغراض البحث (الشكل 2). في التجارب الأولية لم نأخذ بعين الاعتبار تنظيم تدفق الدم من البوابة arterialized الوريد، مما أدى إلى احتقان الكسب غير المشروع المزروع بعد ضخه ونزيف حاد من الكبسولة الكبد 11 ومنذ ذلك الحين تدفق الدم في الوريد البابي arterialized كان ينظمها الدعامة مع قطرها الداخلي 0.3 ملم وبطول 8 ملم. وقد أظهرت التجارب الرائدة التي يبلغ قطرها 0.3 ملم من الدعامات غلة متوسط ​​تدفق الدم في الوريد البابي arterialized التي هي ضمن نطاق الفسيولوجية العلوي (1.7 + 0.4 مل / دقيقة / غرام وزن الكبد) 12 نتائجنا دون تنظيم تدفق الدم ترتبط نتائج كونغ، الذين أدوا سكتة مع PVA عبر الشريان الحرقفي للمتلقي 13 في تجاربه دون تنظيم تدفق الدم البوابة الضخمة ووقع الاختناقات جيباني؛ شبه جيبي.

الهدف من الفيديو لدينا هو دemonstrate خطوة بخطوة هذه التقنية الجراحية التجريبية ne.w في الفئران. على المدى الطويل التقنية المقترحة يمكن أن تستخدم في الدراسات على تجديد الكبد والمنافسة بين الكبد والوريد البابي arterialization، بوابة الوريد البابي hyperperfusion وتنظيم تدفق الدم.

Protocol

1. حيوانات التجارب

  1. الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات المحلية لجميع التجارب التي سوف يتم تنفيذها، وفقا للمبادئ التوجيهية FELASA حماية الحيوان (K 40، 17/99).
  2. استخدام الفئران الذكور لويس متاحة للشراء من أي مربي التجاري (مثل نهر تشارلز Wiga محدودة، من Sulzfeld، ألمانيا). هنا، تم استخدام 224 الحيوانات (112 المانحين والمتلقين 112) لإجراء 112 عملية زرع. تمت التضحية المتلقين في 6 أسابيع بعد العمل الجراحي. في وقت العملية، ينبغي للحيوانات تزن 250-350 غرام.
  3. الحفاظ على الحيوانات في غرف التحكم في المناخ مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء.

2. التخدير والتحضير المنطوق

  1. وضع الفئران في صندوق زجاجي متصلا آلة التخدير مع معدل تدفق الأوكسجين من 1 لتر / دقيقة، والمرذاذ isofluorane مع 5٪ غاز مخدر للحث على التخدير. الحفاظ على التخدير عند 1.5٪ isofluorane.
  2. وضع الفئران فيموقف ضعيف على لوحة الاحترار.
  3. إزالة الفراء من البطن مع كريم إزالة الشعر.
  4. إعداد الجراحي الميداني معقمة على النحو التالي: استخدام مطهر لتنظيف الفوق. لتعقيم الجرح استخدام الموقع الكلورهيكسيدين الأولى والثانية الكحول، وأخيرا حل فرك (مثل الكلورهيكسيدين و 70٪ ايزوبروبيل). ارتداء ثوب الجراحية المتاح والقفازات الجراحية.
  5. استخدام أدوات معقمة المجهرية.
  6. استخدام مجهر العملية في 12-20 أضعاف التكبير.

3. الإجراء الجراحي

  1. عملية المانحة

    إعداد
    1. إجراء فتح البطن وبتر متوسط ​​الفص الجانبي الأيسر والفص الوسطي من الكسب غير المشروع كما وصفها هيغينز (14).
    2. ثم إعداد الرباط الكبدي الإثناعشري. ligate أولا القناة الصفراوية من أجل حمل احتقان وتمدد القناة الصفراوية الصغيرة. ثم ligate والمسح الشامل للgastroduodeالوريد والشريان نال. بعد ذلك، عزل الجذع البطني والشريان الكبدي المشترك والقطع الشريان المعدي الأيسر والشريان الطحالي. شق القناة الصفراوية ازدحام، وإدخال الدعامة 20-G في ذلك. المواقع من الدعامات يجب ضمان تصريف نقيري نظام القناة الصفراوية بأكمله. القطع القناة الصفراوية بشكل أقصى إلى الدعامات.
    3. عزل قطاع infrahepatic من الوريد الأجوف الحق فوق الوريد الكلوي الأيمن.

      نضح
    4. بعد ربط الشريان الأورطي فوق الجذع الاضطرابات الهضمية، المشبك الوريد البابي وشق عليه. إدخال القسطرة التروية (14 G) في الوريد البابي، وتنفيذ أعمال نضح مع 30 مل من الحامض الاميني التربتوفان-كيتوغلوتارات (HTK) -solution (12 سم H2O، 4 ° C).
    5. قطع الحجاب الحاجز والوريد الأجوف فوق الكبد للسماح للسائل الإرواء لتتدفق.
    6. استئصال الجذع الاضطرابات الهضمية جنبا إلى جنب مع التصحيح الأبهر وشطفه بمحلول الحامض الاميني التربتوفان-كيتوغلوتارات.

      Explantation
    7. القطع الوريد الأجوف infrahepatic الحق فوق الوريد الكلوي الأيمن.
    8. ثم، وضع الدعامة التي يبلغ قطرها 0.3 ملم في الوريد البابي واصلاحها مع ربطة. خلال العملية التالية، يتم arterialized الوريد البابي عبر الشريان الكلوي الصحيح. القطع الوريد البابي بشكل أقصى إلى الدعامات.
    9. بعد ربط الوريد الأجوف فوق الكبد، جنبا إلى جنب مع القطع صفعة من الحجاب الحاجز.
    10. ازدراع الكسب غير المشروع وتخزينها في الحامض الاميني التربتوفان-كيتوغلوتارات (HTK) -solution في 4 درجات مئوية في كيس من البلاستيك على الجليد. مكان الغرز الزاوية (8-0 Ethilon) في الوريد الأجوف infrahepatic.
  2. عملية المتلقي
    1. إجراء فتح البطن متوسط ​​وإعداد الوريد الأجوف infrahepatic. ثم عزل الشريان الكلوي الأيمن والحالب، ligate الحالب والقطع عليه. تضييق الشريان الكلوي المناسب في أصله، ثم ligate الوريد الكلوي الأيمن. ثم بعد كل إعادة transectionنال السفن، أداء استئصال الكلية. وفي وقت لاحق، وتقصير الشريان الكلوي الأيمن، شطفه بمحلول ملحي الهيبارين (40 UI الهيبارين / مل محلول ملحي).
    2. القطع الوريد الكلوي الأيمن قريب للربطة بعد لقط والداني القاصي من الوريد الأجوف infrahepatic لخلق التجويف البيضاوي في الوريد الأجوف infrahepatic. شطف الوريد الأجوف مع الحل الهيبارين المالحة. زرع الكسب غير المشروع في منطقة الكلى اليمنى من البطن المستلم.
    3. يفاغر الوريد الأجوف infrahepatic نهاية إلى جانب الجهات المانحة إلى الوريد الأجوف recipient`s مع تشغيل خياطة 8-0 Ethilon.
    4. بعد الشطف مع الحل الهيبارين / المالحة، وإدخال الدعامة في الوريد البابي في الشريان الكلوي الأيمن (الشكل 3). ربط الوريد البابي والشريان الكلوي مع 2 غرز (8-0 Ethilon). إصلاح الدعامات في ربط الشريان الكلوي مع ربطة (مضفر الحرير الاسود 7-0).
    5. السماح لضخه، أولا إزالة المشبك الشرياني، ثم كلاالمشابك الوريدية (الشكل 4).
    6. يعد الشريان الأورطي infrarenal، ثم وضع الداني والقاصي وmicroclamp شق الشريان الأورطي الحق بين كل من المشابك. إجراء مفاغرة نهاية إلى الجانب بين الشريان الأبهر البطني والجذع المتبرع، وذلك باستخدام التصحيح الأبهر، مع تشغيل خياطة 10-0 Ethilon.
    7. إدراج القناة الصفراوية في الاثني عشر: ضع خياطة pursestring في جدار الاثني عشر، وجعل شق صغير في جدار الاثني عشر الحق في منتصف pursestring. إدخال القناة الصفراوية stented في الاثني عشر، وتشديد خياطة pursestring. أخيرا، عقد الاثني عشر والقناة الصفراوية معا بإحكام مع اثنين من الغرز (Ethilon 8-0) (الشكل 5).
    8. ثم إجراء استئصال المجموع الفرعي الكبد الأصلي، وصف لأول مرة من قبل Emond وآخرون. لتقليد الفشل الكبدي الحاد. 7
    9. إصلاح الوريد الأجوف فوق الكبد من الكسب غير المشروع، مع صفعة من الحجاب الحاجز، لجدار البطن الجانبي للإعادةcipient مع 4-0 Vicryl خياطة. شطف البطن بمحلول ملحي (الشكل 6).
    10. للطبقة العضلات استخدام تشغيل خياطة 4-0 Vicryl وللالجلدي لتشغيل خياطة 3-0 Vicryl.

4. الإنعاش وإدارة ما بعد الجراحة

  1. السماح للحيوانات على التعافي من التخدير تحت مصباح الأشعة تحت الحمراء الاحترار.
  2. حقن البوبرينورفين بجرعة 0،03-0،05 ملغ / كغ BW الشوري كل 8-12 ساعة لمدة 2 ايام.
  3. فحص الحيوانات بشأن الحالة العامة وعلامات المرض أو العدوى.

5. حساب من الأولي الأصلية الكبد الوزن

حساب وزن الكبد الأصلي الأولي على النحو التالي: طرح وزن فصوص الكبد مقطوعة من وزن الكبد الكامل (عازم 2.66٪ من وزن الجسم (هذه القيمة مع انحراف معياري من +/- 0.49٪ في التجارب السابقة مع ن = 80 الحيوانات من نفس السلالة وجنرال الكتريك)) 15

النتائج

كان متوسط ​​مدة زرع حوالي 150 دقيقة. كانت المرة نقص التروية البارد 64 + 7 دقائق، كان الوقت نقص التروية الدافئ أقل من 25 دقيقة.

كان معدل البقاء على قيد الحياة المحيطة بالجراحة 90٪ وكان معدل البقاء على قيد الحياة لمدة 6 أسابيع 80٪. كانت الخ...

Discussion

ووصف مساعد أول زرع كبد الفئران منتبذ بواسطة لي وآخرون، 16 في عام 1966 تليها هيس. تم anastomosed 17 الوريد البابي من الكسب غير المشروع مع الوريد البابي للمتلقي. خلال هذا الإجراء، هو خطر وصول الدم الوريدي البابي للكبد الأم.

ف?...

Disclosures

أعلنت جميع المؤلفين لا المصالح المتنافسة.

Acknowledgements

وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل "الألمانية للبحوث" (DFG). وأيد K. Schleimer من قبل ليز مايتنر زمالة من وزارة العلوم والبحوث من NRW. نود أن نشكر السيدة ماري جوان Blümich لها المساعدة التحرير ممتازة. وقد تم تمويل الدكتورة ماريا Kokozidou من فريزنيوس 2011_A61.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Braided Silk black 7-0 Ethicon Products892100
Vicryl 3-0Ethicon ProductsJ285G
Vicryl 4-0Ethicon ProductsJ284G
Ethilon 8-0Ethicon Products1714G
Ethilon 10-0Ethicon Products7770G
Vasofix safety 14GB Braun2758853
Vasofix safety 20GB Braun2758818
2 French (0.012”/0.3 mm ID x 0.025”/0.6 mm OD) x 24”/60 cm polyurethane catheterAccess technologies a division of Norfolk Medical, Inc., Illinois, USACNC-2P
HTK solution, CustodiolDr. Franz Köhler Chemie GmbH, Alsbach-Hähnlein, Germany
Isofluorane 5 %Any genericon
HeparinAny genericon
0.9% salineAny genericon
BuprenorphineAny genericon

References

  1. Boudjema, K., et al. Auxiliary liver transplantation for fulminant and subfulminant hepatic failure. Transplantation. 59, 218-223 (1995).
  2. Boudjema, K., Jaeck, D., Siméoni, U., Bientz, J., Chenard, M. P., Brunot, P. Temporary auxiliary liver transplantation for subacute liver failure in a child. The Lancet. 342, 778-779 (1993).
  3. Chenard-Neu, M. P., et al. Auxiliary liver transplantation: Regeneration of the native liver and outcome in 30 patients with fulminant hepatic failure - a multicenter European study. Hepatology. 23, 1119-1127 (1996).
  4. Gubernatis, G., Pichlmayr, R., Kemnitz, J., Gratz, K. Auxiliary partial orthotopic liver–transplantation (APOLT) for fulminant hepatic failure: first successful case report. World J Surg. 15, 660-666 (1991).
  5. Erhard, J., Lange, R., Giebler, R., Rauen, U., de Groot, H., Eigler, F. W. Arterialization of the portal vein in orthotopic and auxiliary liver transplantation. Transplantation. 60, 877-879 (1995).
  6. Erhard, J., et al. Auxiliary liver transplantation with arterialization of the portal vein for acute hepatic failure. Transpl Int. 11, 266-271 (1998).
  7. Emond, J., Capron-Laudereau, M., Meriggi, F., Bernuau, J., Reynes, M., Houssin, D. Extent of Hepatectomy in the rat. Eur Surg Res. 21, 251-259 (1989).
  8. Mas, A., Rode`s, J. Fulminant hepatic failure. Lancet. 349, 1081-1085 (1997).
  9. Terpstra, O. T. Auxiliary liver grafting: a new concept in liver transplantation. The Lancet. 342, 758 (1993).
  10. Terpstra, O. T., Reuvers, C. B., Schalm, S. W. Auxiliary heterotopic liver transplantation. Transplantation. 45, 1003-1007 (1988).
  11. Schleimer, K., Lange, R., Rauen, U., Erhard, J. Auxiliary liver transplantation in acute liver failure in the rat - an illustrated description of a new surgical approach. Langenbecks Arch Surg. 384 (2), 204-208 (1999).
  12. Schleimer, K., et al. Physiologic microcirculation of the heterotopically transplanted rat liver with portal vein arterialization depending on optimal stent diameter. Med Sci Monit. 28 (BR140-145), (2006).
  13. Hong, H. Q., et al. Study of portal arterialization with auxiliary liver in rats. Hiroshima J. Med. Sci. 40, 29-33 (1991).
  14. Higgins, G. M., Anderson, R. M. Experimental pathology of the liver. I--Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch. Path. 12, 186-202 (1931).
  15. Schleimer, K., et al. Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation. Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).
  16. Lee, S., Edgington, T. S. Liver transplantation in the rat. Surg. Forum. 17, 220-222 (1966).
  17. Hess, F., Willemen, A., Jerusalem, C. Auxiliary liver transplantation in the rat, influence of the condition of the recipient's liver on the fate of the graft. Eur. Surg. Res. 9, 270-279 (1977).
  18. Aguirrezabalaga, J., Arnal, F., Marini, M., Centeno, A., Fernandez-Selles, C., Rey, I., Gomez, M. Auxiliary liver transplantation with portal arterialization in the rat: description of a new model. Microsurgery. 22, 21-26 (2002).
  19. Palmes, D., Dietl, K. H., Drews, G., Holzen, J. P., Spiegel, H. U. Auxiliary partial orthotopic liver transplantation: treatment of acute liver failure in a new rat model. Langenbecks Arch Surg. (386), 534-541 (2002).
  20. Schleimer, K., et al. Improved microcirculation of a liver graft by controlled portal vein arterialization. J Surg Res. 116 (2), 202-210 (2004).
  21. Schleimer, K., et al. Portal hyperperfusion causes disturbance of microcirculation and increased rate of hepatocellular apoptosis: investigations in heterotopic rat liver transplantation with portal vein arterialization. Transplant Proc. 38 (3), 725-729 (2006).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

91 arterialization

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved