Гетеротопическая Вспомогательное Крыса трансплантации печени С Flow-регулируется воротной вены артериализации в острой печеночной недостаточности

Резюме

Трансплантация печени Вспомогательный не обеспечивает временную поддержку в острой печеночной недостаточности, до регенерации неисправного печени. Гетеротопическая вспомогательный трансплантация печени (HALT) с портальной вены артериализации (ПВС) оказывает достаточную функцию печени. Мы разработали аналогичную технику на крысах, чтобы изучить влияние воротной вены артериализации на морфологию и функцию трансплантата.

Аннотация

В острой печеночной недостаточности вспомогательного трансплантации печени является интересной альтернативой подход. Цель состоит в том, чтобы обеспечить временную поддержку, пока неисправный родной печени не регенерируется. ^1-3 APOLT-метод, ортотопическая имплантация вспомогательного segments- предотвращает большинство технических проблем. Однако этот метод требует обширные резекции обоих родной печени и трансплантата. ⁴ В 1998 году Эрхард разработал гетеротопической вспомогательный трансплантации печени (HALT) с использованием воротной вены артериализации (ПВА) (рисунок 1). Эта техника показала обещая начальные клинические результаты. ^5-6 Мы разработали HALT-технику с потока-регулируется ПВА на крысах для изучения влияния потока-регулируется ПВА на трансплантата морфологии и функции (рисунок 2).

Трансплантата печени снижается до 30% от своего первоначального размера, был имплантирован в гетеротопически правой почечной области реципиента после УВК правой почки.60; Инфра-печеночная полой вены трансплантата был анастомозировали с infrahepatic вены вены реципиента. Артериализация воротной вены донора была проведена с помощью правой почечной артерии реципиента с техникой стента. Регулирование кровотока в воротной вене arterialized была достигнута с использованием стента с внутренним диаметром 0,3 мм. Чревного ствола трансплантата был конец-в-бок анастомозировали с аорты реципиента и желчных протоков был имплантирован в двенадцатиперстную кишку. Субтотальная резекция родной печени была выполнена, чтобы вызвать острой печеночной недостаточности. ⁷

Таким образом были выполнены 112 трансплантаций. Скорость периоперационная выживаемость составила 90%, а выживаемость 6 недель составила 80%. Через шесть недель после операции, родной печени регенерировать, показывая увеличение веса от 2,3 ± 0,8 г на 9,8 ± 1 г. В это время, вес привитого снизилась с 3,3 ± 0,8 г до 2,3 ± 0,8 г. Мы смогли получить перспективные долгосрочные результаты с точки зрения трансплантата морфологии и функции. HALT с потока-регулируется ПВА надежно соединяет острой печеночной недостаточности, пока родной печени не регенерирует.

Введение

Острая печеночная недостаточность представляет серьезную проблему клинической медицины, ведущий к смертности 60-80%. ⁸ В острой печеночной недостаточности, трансплантация печени вспомогательный является перспективной альтернативой терапии для преодоления острой фазы. Уроженец печень слева регенерации и после регенерации иммуносупрессии препараты могут быть прекращены. Как следствие трансплантат будет атрофический. Однако оперативная техника для трансплантации печени вспомогательного все еще ​​обсуждается. ^1-3 В этом контексте, Terpstra сообщил отсутствие пространства для трансплантата, портал крови украсть явления и проблемы венозного застоя и дренажа. ^9-10 воротной вены донора был анастомозировали конца в сторону, чтобы воротной вены реципиента. Это привело портала конкуренции потока между трансплантатом и родной печени и портального тромбоза вен. Большинство из этих технических проблем можно избежать при использовании в APOLT-метода (orthotopIC имплантация вспомогательных сегментов). ⁴ Однако этот метод требует обширные резекции обоих родной печени и трансплантата. ⁴ В 1998 году Эрхард и его команда разработали гетеротопической вспомогательный трансплантации печени (HALT) с использованием воротной вены артериализации (ПВА) (рисунок 1 ). Рубчик и воротной вены родного печени уважаются с использованием этого метода. Это избавляет получателя от нежелательных побочных эффектов, таких как тромбоз воротной вены и портальной крови украсть явлением, которое может нарушить родной восстановление печени. Кроме того, нет обширные резекции печени родного печени и взяточничества не требуется для этого метода, с следовательно меньше кровотечения и более оставшейся общей массы паренхимы печени для преодоления (трансплантат) и регенерацию (родной печени). Эта техника показала обещая начальные клинические результаты. ^5-6 Цель этой экспериментальной работы была разработка методики HALT с портальной вены артериализации вкрыса в исследовательских целях (рисунок 2). В предварительных экспериментах мы не брали во внимание регулирование кровотока в arterialized воротной вены, в результате чего скопления пересаженной трансплантата после реперфузии и массивного кровотечения из капсулы печени. ⁺¹¹ С тех пор кровотока в arterialized воротной вены регулировалась стента с внутренним диаметром 0,3 мм и длиной 8 мм. Пилотные эксперименты показали, что диаметр стента 0,3 мм дает среднюю кровоток в воротной вене arterialized, что находится в пределах верхней физиологическом диапазоне (1,7 +/- 0,4 мл / мин / г веса печени). ¹² Наши результаты без регулирования потока крови коррелируют с результатами Хун, который исполнил HALT с ПВА через подвздошной артерии реципиента. ⁺¹³ В своих опытах без регулирования кровотока массивной портала и произошло синусоидные скопления.

Цель нашего видео является гemonstrate шаг за шагом этот ne.w экспериментальная хирургическая техника на крысах. В долгосрочной перспективе предложенная методика может быть использована в исследованиях по регенерации печени и конкуренции между печени и портальной вены артериализации, портальной вены гиперперфузии и регулирования кровотока портала.

протокол

1. Экспериментальные животные

1. Получить одобрение местным комитетом по этике для всех экспериментов, которые будут выполняться в соответствии с руководящими принципами защиты животных FELASA (K 40, 17/99).
2. Используйте самцов крыс Льюиса приобрести у любого коммерческого заводчика (например, Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Германия). Здесь 224 животных (112 доноров, 112 получателей) были использованы для выполнения 112 трансплантаций. Получатели были принесены в жертву в течение 6 недель после операции. Во время операции, животные должны весить 250-350 г.
3. Держите животных в климатические камеры с бесплатным доступом к пище и воде.

2 Анестезия и оперативной подготовки

1. Поместите крысу в плексигласа окна, подключенного к анестезии машины с расходом кислорода 1 л / мин, и изофлуораном испарителем с 5% анестезирующего газа для анестезии. Поддержание анестезии в 1,5% изофлуораном.
2. Поместите крыс вположение лежа на спине на потепления пластины.
3. Снимите мех живота с депиляции кремом.
4. Подготовьте стерильную хирургическую поле следующим образом: Используйте дезинфицирующее средство для очистки настольный. Для дезинфекции разрез использования сайта Хлоргексидин первой, алкоголя второй и, наконец, решение скраб (например, хлоргексидин и 70% изопропилового спирта). Носите одноразовые хирургические платье и хирургические перчатки.
5. Используйте стерильные микрохирургические инструменты.
6. Используйте Операционный микроскоп в увеличении 12-20 раза.

3 Хирургические процедуры

1. Операция донора
   
   Подготовка
   1. Выполните средний лапаротомии и резекции левой боковой лепесток и средний лепесток трансплантата, как описано Хиггинс. ⁺¹⁴
   2. Тогда подготовить печеночно связки. Впервые перевязывать желчный проток с целью побудить заторов и расширение малого желчного протока. Тогда перевязывать и секут в gastroduodeнал вены и артерии. Впоследствии, изолировать чревного ствола и общей печеночной артерии и секут левую артерию желудка и селезенки артерии. Надрезать перегруженный желчный проток, и ввести 20-G стента в нем. Позиционирование стента должны обеспечить дренаж всей грудной системы желчных протоков. Разреза желчный проток дистальнее стента.
   3. Изолировать infrahepatic сегмент вены вены прямо над правой почечной вены.
      
      Перфузии
   4. После перевязки выше чревного ствола аорты, зажать в портальную вену и надрезать его. Представьте перфузии катетер (14 G) в воротной вене, и выполнить перфузии 30 мл гистидин-триптофан-кетоглутарата (НТК) -решения (12 см H2O, 4 ° С).
   5. Разрежьте диафрагму и suprahepatic Caval вену, чтобы позволить перфузат вытекать.
   6. Акцизный чревного ствола вместе с аорты патча и промойте его с гистидин-триптофан-КГ решения.
      
      Эксплантация
   7. Разреза на infrahepatic Caval вену прямо над правой почечной вены.
   8. Затем поместите стент диаметром 0,3 мм в воротной вене и закрепите его с помощью лигатуры. Во время следующей операции, портал вена arterialized через правой почечной артерии. Разреза в портальную вену дистальнее стента.
   9. После перевязки suprahepatic вены вены, секут его вместе с манжетой диафрагмы.
   10. Эксплантата трансплантата и сохранить его в гистидин-триптофан-кетоглутарата (НТК) -решения на 4 ° по Цельсию в полиэтиленовом пакете на льду. Место угловые швы (8-0 Ethilon) в infrahepatic вены вены.
2. Операция Получатель
   1. Выполните средний лапаротомии и подготовить infrahepatic Caval вену. Тогда изолировать правой почечной артерии и мочеточника, перевязывать мочеточник и секут его. Зажмите правую почечную артерию на его происхождения, то перевязывать правую почечную вену. Тогда после перерезки обоих повторноконечные сосуды, выполняют нефрэктомию. Впоследствии, сократить правой почечной артерии, промойте его гепарина физиологическим раствором (40 гепарин UI / мл солевого раствора).
   2. Разреза правой почечной вены проксимальнее лигатуры после проксимального и дистального зажима infrahepatic вены вены, чтобы создать овал просвет в infrahepatic вены вены. Промойте Caval вену гепарином физиологического раствора. Имплант трансплантата в правой почечной области живота получателя.
   3. Анастомозирует infrahepatic полой вены конца в сторону донора к Получателя вены вены с 8-0 Ethilon управлением шва.
   4. После промывки гепарин / солевого раствора, ввести стент в воротной вене в правой почечной артерии (рисунок 3). Подключите портальную вену и почечной артерии с 2 швами (8-0 Ethilon). Закрепите связывающую стента в почечную артерию с лигатуры (плетеный шелк черный 7-0).
   5. Чтобы разрешить реперфузии, сначала снимите артериальное зажим, то обавенозные зажимы (Рисунок 4).
   6. Подготовьте ИНФРАРЕНАЛЬНОГО аорту, затем поместите ближний и дальний microclamp и надрезать аорту прямо между двумя зажимами. Выполните анастомоза конец-в-бок между аортой и чревного ствола донора, используя аорты патч, с 10-0 Ethilon управлением шва.
   7. Вставьте желчный проток в двенадцатиперстную кишку: Нанесите pursestring шов в стенке двенадцатиперстной кишки, сделать небольшой разрез в стенке двенадцатиперстной кишки прямо в середине pursestring. Представьте стентированной желчный проток в двенадцатиперстную кишку, и затяните pursestring шва. Наконец, провести в двенадцатиперстную кишку и желчный проток плотно вместе с двумя стежками (Ethilon 8-0) (Рисунок 5).
   8. Затем выполните субтотальная резекция родной печени, впервые описанного Emond соавт. чтобы имитировать острой печеночной недостаточности. ⁷
   9. Закрепите suprahepatic Caval вену трансплантата, вместе с манжетой диафрагмы, к боковой брюшной стенки реcipient 4-0 викрил шва. Промойте живота с физиологическим раствором (рисунок 6).
   10. Для мышечного слоя использовать бегущую шва 4-0 викрил и для кожного работает шовный 3-0 Vicryl.

4 Восстановление и управление Послеоперационный

1. Пусть животных восстановления после анестезии под инфракрасной лампой потепления.
2. Введите бупренорфин в дозе 0,03-0,05 мг / кг массы тела подкожно каждые 8-12 ч в течение 2 дней.
3. Изучите животных, касающиеся общего состояния и признаков болезни или инфекции.

5 Расчет начальной Native печени Вес

Рассчитать первоначальный родной вес печени следующим образом: вычесть вес резекции долей печени от полного веса печени (2,66% от массы тела (это значение со стандартным отклонением 0,49% +/- было определено в предыдущих экспериментах с п = 80 животных из того же штамма, и аGE)). ¹⁵

Результаты

Средняя продолжительность трансплантации было около 150 мин. Холодное время ишемии было 64 +/- 7 мин, тепловой ишемии было менее 25 мин.

Скорость периоперационная выживаемость составила 90%, а выживаемость 6 недель составила 80%. Потеря 20% было связано с перитонитом, потому что д?...

Обсуждение

Первый вспомогательный гетеротопическая трансплантации печени крысы был описан Lee и соавт., ¹⁶ в 1966 году, а затем Hess. ¹⁷ воротной вены трансплантата была анастомозировали с воротной вены реципиента. Во время этой процедуры, портал подачи венозной крови с нативным печени н...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Braided Silk black 7-0	Ethicon Products	892100
Vicryl 3-0	Ethicon Products	J285G
Vicryl 4-0	Ethicon Products	J284G
Ethilon 8-0	Ethicon Products	1714G
Ethilon 10-0	Ethicon Products	7770G
Vasofix safety 14G	B Braun	2758853
Vasofix safety 20G	B Braun	2758818
2 French (0.012”/0.3 mm ID x 0.025”/0.6 mm OD) x 24”/60 cm polyurethane catheter	Access technologies a division of Norfolk Medical, Inc., Illinois, USA	CNC-2P
HTK solution, Custodiol	Dr. Franz Köhler Chemie GmbH, Alsbach-Hähnlein, Germany
Isofluorane 5 %			Any genericon
Heparin			Any genericon
0.9% saline			Any genericon
Buprenorphine			Any genericon