استخدام نظام شفويا الذوبان قطاع الدراسات الدوائية والسمية: بديل بسيط وإنساني إلى الفم بالتزقيم للحيوانات

Summary

يصف بروتوكول التالية طريقة جديدة لإعطاء الدواء عن طريق الفم المزمنة باستخدام الشريط حل عن طريق الفم (ODS) بدلا من طريقة أنبوب تغذية عن طريق الفم أكثر شيوعا. علينا أن نبرهن على ما قبل السريرية، عن طريق الفم تسليم المخدرات باستخدام أسلوب المواد المستنفدة للأوزون يمثل بديلا آمنة ومريحة، وإنسانية للتسمين عن طريق الفم.

Abstract

مطلوب قبل اختبار علاجات جديدة في البشر، قصيرة وطويلة المدى قبل السريرية (أي الحيوانات)، الدوائية المتكررة واختبار السمية. في معظم الحالات، وهو الطريق المفضل للإدارة هو عن طريق تسليم عن طريق الفم. في الوقت الحاضر، والتسليم عن طريق الفم ويتم إنجاز معظمها باستخدام إجراء أنبوب تغذية عن طريق الفم، في جزء منه، لأنه لا يمكن تحقيق الجرعات متسقة ودقيقة في نموذج حيواني. على الرغم من أن يتم تأسيس هذه الطريقة أيضا أنها لا تملك المضاعفات التي يمكن أن تؤدي إلى ارتفاع معدل الاستنزاف الحيوان. تحقيقا لهذه الغاية، وإجراء عرض هنا يصف بديلا للطريقة أنبوب تغذية عن طريق الفم التي تأسست الدواء المطلوب في منبهة للذوق، حل شفويا قطاع (ODS) التي يمكن ببساطة أن تقدم للحيوان الاختبار حيث يتم بعد ذلك اتخذت بسرعة هذا الامر مع التلاعب الحد الأدنى للموضوع اختبار. هنا، علينا أن نبرهن على ما قبل السريرية، عن طريق الفم تسليم المخدرات باستخدام أسلوب المواد المستنفدة للأوزون يمثل العبوة البديلة آمنة ومريحة، وإنسانيةrnative للتسمين عن طريق الفم.

Introduction

من أجل ترجمة ناجحة للدواء من قبل السريرية (التجارب على الحيوانات) إلى التطوير السريري، سلسلة من جيدا تعريف، هناك حاجة لدراسات الدوائية والسمية الحادة والمزمنة التي يتعين القيام بها في النماذج الحيوانية باستخدام الطريق السريري المقصود من إدارة (والذي هو عادة طريق الفم). لتحقيق هذا الهدف، فإن معظم الدراسات ما قبل السريرية تستخدم حاليا إجراء أنبوب تغذية عن طريق الفم نظرا إلى أن نتائج هذه الطريقة في تسليم ثابت ودقيق لمجمع اختبار للحيوان. ومع ذلك، في كثير من الحالات، أنبوب تغذية عن طريق الفم امر لا يمكن تحمله بشكل جيد من قبل الحيوان وتشير الأدلة المتراكمة التي يرتبط الأسلوب مع قدر كبير من التوتر تحريض ^1.

وهذا ينطبق بشكل خاص في تطوير علاج لأمراض مدى الحياة المزمنة التي تتطلب الدراسات قبل السريرية على المدى الطويل، مثل هو الحال مع، ولكن ليس على سبيل الحصر، كل اضطراب العصبية تقريبا. لانسtance، في نموذج الفأر وراثيا لمرض الزهايمر، اقترح مؤخرا أن طريقة أنبوب تغذية نفسها يمكن أن يربك النتائج التجريبية بسبب الجرعات التوتر الناجم عن ^2. وبالمثل، في نموذج الفأر من استهلاك الكحول، وقد وجدت نتائج غير منشورة من المختبرات الخاصة بنا أن الإدراج المتكرر لأنبوب أنبوب تغذية - في حد ذاته - يمكن أن تقلل بشكل كبير من مستوى تناول الكحول إلى حد يهدد سلامة التجريبية النموذج (انظر الشكل 1).

ونظرا لمحدودية المذكورة آنفا المرافقة لهذا الإجراء أنبوب تغذية عن طريق الفم، وقد بذلت جهود كبيرة من أجل تطوير طرق جديدة لتوصيل الدواء عن طريق الفم قبل السريرية. وتشمل النهج البديلة الحالية دمج مجمع الاختبار في خليط من زبدة الفول السوداني ^3، وقوالب هلامية ^4-5، والكريات الشوكولاته ^{6، 7} المياه، والمفرقعات ويفر ⁸ الشرب، وكلها associATED مع درجة من القضايا بما في ذلك عجز متفاوتة لاستخدامها بشكل صحيح في نموذج حيواني، وعدم اعتماد امتصاص اختبار مركب من موضوع اختبار أو تفضيل الفرد للنكهة التي تجعل من المخدرات بسرعة أقل يستهلك ^9.

الإجراء قدم هنا يصف الطريقة التي يتم تضمينها الدواء المطلوب في النكهة، حل شفويا قطاع (ODS) التي يمكن أن تكون بسهولة وبسهولة أن تستخدم لإدارة شفويا مجمع اختبار للحيوان الاختبار. وتركز هذه الورقة على إثبات فعالية من الأسلوب المواد المستنفدة للأوزون باستخدام الفئران. ومع ذلك، ليس هناك سبب للاعتقاد بان نفس الأسلوب لن يكون مفيدا في مكافحة القوارض الأخرى وكذلك المواد الثدييات الكبيرة أيضا. سريريا، واستخدام المواد المستنفدة للأوزون هو بداية لاعتمادها في طب الأطفال المرضى والمسنين، باعتبارها وسيلة للتغلب على صعوبات البلع ^10. نقترح أن المواد المستنفدة للأوزون ويمكن أيضا أن تستخدم بنجاح في برامج اكتشاف العقاقير قبل السريرية باعتبارها آمنة ومريحةوالبديل الإنساني للتسمين عن طريق الفم.

Protocol

وقد تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي وصفها اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) من جامعة جنوب كاليفورنيا.

1. التعامل مع الحيوان والتعويد

1. المقدمة
   1. السماح الفئران ليتأقلم مع الظروف تربية الحيوانات والتعامل مع تقنية التجربة لخفض التوتر خلال إجراءات إدارة المخدرات التي تلت ذلك. خلال هذا الوقت، تسجيل وزن الجسم وتناول الطعام من كل فأر. إذا رغبت في ذلك، فإنها يمكن أن تستخدم لاحقا كنقطة غير الغازية للمقارنة لتقييم سمية الدواء (اختياري). ويمكن أيضا أن تستخدم في السابق لتحديد القائمة على الوزن المخدرات الجرعات.
      ملاحظة: الروايات المتناقلة، ينبغي أن تحدد طول فترة التعود على أساس عدد من المجربون التفاعل مع الحيوانات. في تجربتنا، وقد لوحظ الفئران من سلالة / 6J C57BL لديك مشكلة في التعود على التعامل مع أكثر من ~ 5 أشخاص داخل لدينا نموذجية فترة التعود على مدى أسبوع. إذا كان ذلك ممكنا،ويتم تشجيع مجرب (ق) أيضا على الامتناع عن استخدام المستحضرات المعطرة، والصابون، والعطور قبل التعامل مع الحيوانات كما تشير التقارير السابقة محفزات جديدة، مثل الروائح، قد تعوق فترة التعود ^11.
2. خطوات
   1. بداية قبل 5 أيام على الأقل من بدء الدراسة، ونقل الحيوانات إلى الغرفة التي سوف تحدث في تجارب لاحقة.
   2. سجل وزن الماوس عن طريق الامساك بقوة منتصف الذيل ورفع بلطف الحيوان من القفص وفي قارب وزنه.
      1. ضع الماوس على نطاق وبمجرد رفعه من cagekeeping في الاعتبار لفهم صحيح الجانب الأنسي / القريبة من الذيل، لتجنب وقوع اصابات لحب، والتي يمكن أن تحدث عند استيعاب الجانب الأعلى من الذيل ^12.
      2. تسجيل القيمة الوزن مرة واحدة على الماوس تم وضعها بأمان في وزن القارب.
   3. سجل وزن الطعام لRECOMأوصت 2 أيام متتالية، وذلك لتحديد مستويات استهلاك المواد الغذائية الأساسية التي من شأنها مساعدة في القبض على سمية محتملة خلال تجربة ^13.

2. إعداد إبرة التغذية، السكروز الحل، والفرد المواد المستنفدة للأوزون

1. استخدام الأوتوكلاف لتعقيم الإبر غير القابل للصدأ الصلب أنبوب تغذية في التحضير لهذه التجربة. إعداد 2 الإبر / مجموعة و1 إبرة إضافية لاستخدامها احتياطية إذا لزم الأمر.
   ملاحظة: استخدمت هذه الدراسة 1.5 بوصة، منحنية، 18 G، الفولاذ المقاوم للصدأ تغذية إبرة مع كرة 2.25 ملم في نهاية الإبرة.
2. إضافة 20 مل من الماء إلى 0.85 غرام من السكروز إلى إنشاء 4.25٪ (ث / ت) حل السكروز.
   ملاحظة: اعتمادا على المعلمات قيد التقييم الجرعات المنخفضة غيرها من السكروز يحتمل أن تستخدم أيضا ^14.
3. إعداد الشريط تذويب عن طريق الفم (ODS) لكل حيوان عن طريق خفض قياسي شريط الاختبار مستطيلة في قطعة وهذا هو 0.5 سم بوصة في القطر لناجي متوفر تجاريا ربع واحد بوصة حفرة الناخس. وقد وضعت شريط الاختبار مستطيلة المستخدمة في هذه المظاهرة لاحتواء 6 ملغ من بالإيفرمكتين (IVM)، وعندما قطع لهذا الحجم، يخصص جرعة 0.21 ملغ لكل قطعة دائرية الفردي يقارب 10 ملغ / جرعة كغ لكل حيوان (لدينا المطلوب الجرعة / حيوان). هذه الجرعة يمكن تعديلها من خلال التركيز / تمييع صياغة الشاملة على قطاع مستطيلة و / أو قطع الشريط في حجم مختلف.

3. المخدرات - تسليم

1. تسجيل القيم الوزن كما هو موضح سابقا في خطوات 1،1-1،2.
2. بعد تسجيل الوزن، وتحريك الماوس إلى الأعلى معدن شبكة القفص. مرة واحدة هناك، وذلك باستخدام الإبهام السائد، السبابة، الإصبع و3 ^{الثالثة،} وسحب بلطف مرة أخرى على الذيل. وهذا سوف يسبب الماوس لعن غير قصد قبضة سلك القفص العلوي وتمتد من ظهرها، وتمتد الجسم بعيدا عن المجرب.
3. فهم القفا من الرقبة مع عدم افعلالإبهام minant، السبابة، الإصبع و3 ^{الثالثة} لكبح مريح الحيوان مع قبضة التي هي أمنا.
   ملاحظة: مجرب مع يد أصغر يمكن أيضا استخدام 4 إصبع ^عشر من نفس اليد، لسحب القفا من الخلف والحصول على عقد أكثر أمنا من الفأرة. بالإضافة إلى ذلك، اعتمادا على تفضيل الأفراد، البنصر، و / أو إصبع الخنصر ويمكن أيضا أن تستخدم لتأمين الذيل ولكن هذا ليس ضروريا ^12.
4. عقد الماوس في وضع مستقيم.
5. تحذير: لاحظ لون الأغشية المخاطية من الفأرة. والأرجواني / ظهور اللون الأزرق هو مؤشر على أن المجرب وتخبين القفا محكم جدا والفأر لا يستطيع التنفس.
   1. إذا حدث هذا، فورا الماوس تتراجع عن أعلى القفص المعدني والسماح لها للراحة ل~ 2-3 دقائق قبل reattempting لكبح جماح الحيوان.
6. غمر طرف لمبة من الإبرة أنبوب تغذية في محلول السكروز 4.25٪ ليكون بمثابة منبهة للذوقلاصق على المواد المستنفدة للأوزون.
7. اضغط لأسفل على ما قبل قطع المواد المستنفدة للأوزون مع طرف لمبة من الإبرة أنبوب تغذية إرفاق شريط حل عن طريق الفم.
8. تقديم المواد المستنفدة للأوزون الماوس عن طريق وضعها بالقرب من الخياشيم و / أو الفم، والسماح للحيوان للاستهلاك الفيلم. بدلا من المواد المستنفدة للأوزون يمكن أن يتم تسليم موضعيا لتجويف الفم عن طريق وضع شريط رقيقة مباشرة على اللسان للفئران لابتلاع.
9. استبدال إبرة منتصف المجموعة خلال الدورة جرعات الدواء لمنع انتشار العدوى.

النتائج

في التحقيقات النيابية التالية، كان على غرار الشرب الاجتماعي باستخدام 24 ساعة يومين زجاجة اختيار (الدرن) النموذج كما هو موضح سابقا ^(15). لفترة وجيزة، كان الفئران الوصول إلى زجاجتين من الحل، تضمن أحدها المياه، والآخر 10٪ (ت / ت) حل الإيثانول. تم توزيع...

Discussion

ويرتبط أنبوب تغذية عن طريق الفم مع العديد من المضاعفات التي تؤدي إلى جمع البيانات يحتمل شبهة وارتفاع معدلات الاستنزاف الحيوان ^1. هنا هو عرض طريقة بسيطة لتوصيل الدواء عن طريق الفم من خلالها الفئران (والحيوانات الأخرى المحتملة) بسهولة وبشكل موثوق ويمكن تستهلك ال?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Orally Dissolving Strip	Cure Pharmaceutical		Available upon special request. Alternatively, ODS may also be prepared in-house.
Gavage Feeding Needle	VWR	7912	Our rodent studies utilized a 18 gauge feeding needle. This size may need to be adjusted for use in other mammilian species.
Sucrose	Sigma Aldrich	S0389-500G