利用一种口腔溶解地带的药理毒理研究:一个简单的和人道的替代口服灌胃动物

摘要

以下方案描述了使用代替更常用的经口管饲法口服溶解条（ODS）慢性口服药物给药的新方法。我们表明，使用消耗臭氧层物质的方法临床前，口服给药代表了安全，方便，和人性化的替代口服灌胃。

摘要

之前在人类中测试新的治疗，短期和长期的临床前（ 即动物），重复的药理和毒理试验是必需的。在大多数情况下，给药的优选途径是通过口服给药。在当前时刻，口服递送是使用口服管饲法过程，部分是因为它可以实现在动物模型一致和精确的定量给料大多完成。虽然这种方法是公认它确实有并发症，可能导致动物的高损耗率。为此，这里所介绍的过程描述，可以简单地呈现给测试动物在那里，然后迅速采取与替代，其中所希望的药物被掺入一个促味剂，口腔溶解条（ODS）的经口管饲法被检者的最小操纵。在此，我们证明，使用消耗臭氧层物质的方法临床前，口服给药代表了安全，便捷，人性化和阿尔特rnative口腔灌胃。

引言

为了使药物从临床前（动物试验）成功翻译到临床发展，一系列的明确定义，急性和慢性的药理学和毒理学研究需要在动物模型中也可以执行使用管理的预期临床路径（这是通常口服途径）。为了实现这个目标，最临床前研究目前利用给定的口服管饲法程序，该方法在测试化合物对动物的一致和精确的递送的效果。然而，在许多情况下，经口管饲法不能很好被动物耐受，越来越多的证据表明，该方法是用应力感应¹的显著量相关联。

这是在用于需要长期的临床前研究慢性终身的条件下，如治疗的发展尤其如此与的情况下，但不限于，几乎每一个神经精神障碍。对于插件tance，在阿尔茨海默病的转基因小鼠模型，最近建议，强饲法本身可以由于加药引起的应力²混淆的实验结果。同样地，在酒精消费的小鼠模型中，我们的实验室未发表的研究结果已经发现，强饲管的重复插入 - 在其本身和 - 可以显著酒精摄入的水平减少到危及实验的完整性的点范例（ 见图1）。

定与口腔管饲过程相关联的上述限制，相当大的努力已投入朝着显影临床前口服药物递送的新方法。当前备选的方法包括掺入试验化合物成花生酱的混合物^3，凝胶状模具^4-5，巧克力小球^6，饮用水⁷和晶片饼干^8，所有这些都是associ有不同程度的问题，包括无法ated在动物模型可靠地使用，缺乏通过试验化合物的摄取的被测试受试者或风味个人偏好，使药物不易消耗^9。

本文所介绍的过程描述了在其中需要的药物掺入调味，口腔溶解条（ODS），可以很容易地和很容易地被用于口服施用测试化合物对测试动物的方法。本文侧重于展示利用老鼠进行的ODS方法的有效性。然而，没有理由认为同样的方法将不会也有在其他啮齿动物，以及较大的哺乳动物受试者是有用的。临床上，使用消耗臭氧层物质的开始在儿童和老年患者被采纳，以此来克服吞咽困难^10。我们建议，消耗臭氧层物质，也可以成功地在临床前药物研究计划作为一种安全，方便使用和人道的替代口服灌胃。

研究方案

描述的所有程序已经批准了南加州大学的机构动物护理和使用委员会（IACUC）。

1.动物处理和习惯化

1. 介绍
   1. 允许小鼠适应的饲养条件和处理实验技术，在随后的给药方法减少压力。在此期间，记录体重和各小鼠的食物摄入;如果需要的话，它们可以在以后用作非侵入点比较，以评估药物毒性（可选）的。前者也可用于确定基于重量的药物剂量。
      注意:有趣的是，应根据实验者与动物相互作用的数目来确定的习惯期的长短。根据我们的经验，在C57BL / 6J品系小鼠已观察到有麻烦我们典型的为期一周的习惯时间内超过〜5人habituating搬运。如果可行的话，我们也鼓励实验者（S）使用香味乳液，香皂，香水和处理动物之前与以前的报告表明新的刺激，如气味，可能会阻碍习惯¹¹期不要。
2. 脚步
   1. 研究开始前至少5天开始，将动物转移到在其中随后的实验将发生室。
   2. 牢牢抓住尾巴的中间，轻轻提起动物出笼子，进入重船记录鼠标的重量。
      1. 一旦放置在标尺上的鼠标，因为它是在记提升出cagekeeping的适当掌握尾部的内侧/近侧方面中，以避免脱套伤，抓尾部¹²的远侧方面时可能发生。
      2. 记录的权重值，一旦老鼠已被安全地放置在权衡船。
   3. 记录食物的重量为RECOM谁料连续2天，以建立基线的食品消费水平将会在实验过程中¹³帮助捕获潜在的毒性。

2.准备喂食针的，蔗糖溶液，与个人ODS

1. 使用高压釜灭菌的不锈钢管饲针头在用于实验的准备。准备2根/基和1个另外的针被用作后备如果需要的话。
   注意:此研究利用1.5英寸，弯曲的，18 G，不锈钢在针的末端馈送带有2.25毫米球针。
2. 20ml水加至0.85克蔗糖以创建一个4.25％（重量/体积）的蔗糖溶液。
   注:根据正在评估其他低剂量蔗糖的参数可能也可使用^14。
3. 通过切割标准的矩形试片成片是在直径为0.5厘米英寸制备每个动物的口腔溶解条（ODS）我们ING市售的单季英寸的孔，打孔机。在此演示中使用矩形试验片制成含有6毫克伊维菌素（IVM），并切成此大小时，分配一个0.21毫克剂量将每个独立的圆形片近似10毫克/公斤的剂量为每只动物（我们的期望的剂量/动物）。此剂量可通过浓缩/在矩形条稀释整体制剂和/或切断所述带状成不同尺寸来调整。

3.药物 - 送货

1. 如先前在步骤1.1-1.2中所述记录重量值。
2. 记录重量后，将鼠标移动到金属网格笼子顶部。一旦出现，使用占主导地位的拇指，食指，和^第三的手指，轻轻地拉回来的尾巴。这将导致鼠标无意中夹住金属丝笼顶部和伸出它的后面，伸展它的身体从实验者路程。
3. 把握颈背与非待办事项minant拇指，食指，和^第三手指舒适地抑制所述动物用把手是安全。
   注意:用较小的手的实验者也可以使用4 ^个手指，同一只手的，拉回背面的颈背，将获得的小鼠的更安全的保持状态。另外，根据个人喜好，无名指和/或小指也可以用于固定尾巴然而这是没有必要的^12。
4. 按住鼠标在直立位置。
5. 注意:观察小鼠的粘膜的颜色。紫色/蓝色的外观是一个迹象表明实验者得太紧收紧颈背和鼠标无法呼吸。
   1. 如果发生这种情况，立即把鼠标放在铁笼顶部回落，并允许它重新尝试抑制动物之前休息2-3〜分钟。
6. 浸没灌胃针的灯泡尖端4.25％蔗糖溶液以用作促味剂粘合剂的消耗臭氧层物质。
7. 向下按压与灌胃针的尖泡一个预切的消耗臭氧层物质的口腔溶解条连接。
8. 通过将其鼻孔和/或口附近目前的消耗臭氧层物质的老鼠，并让动物消耗薄膜。可替代地，ODS可以通过直接放置在薄带到舌头的小鼠吞局部递送到口腔。
9. 药物剂量会期间更换针头中期组，以防止感染扩散。

结果

在下面的代表调查，社交饮酒是使用24小时双瓶选择（TBC）模式如前所述¹⁵建模。简言之，将小鼠获得的溶液两瓶，其中一个含有水，另10％（体积/体积）乙醇溶液中。受试者被随后分配到药物处理组，使得平均10E（10％乙醇/ 90％水体积/体积）的摄入量是跨组相似。

图1示出了当使用一个管饲车辆口服偏好...

讨论

口管饲法是与导致潜在的损害的数据收集和动物减员¹的高速率许多并发症。此处的口服药物递送的一个简单的方法被引入，通过该小鼠（和潜在的其他动物）可容易且可靠地通过口服溶解条（ODS）消耗的首选药物。值得注意的是，使用这种方法的代表安全，方便，和人性化的替代口服管饲法。

其他流动资产替代口服灌胃，虽然有点希望的，与该妨碍他们覆盖了全方?...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Orally Dissolving Strip	Cure Pharmaceutical		Available upon special request. Alternatively, ODS may also be prepared in-house.
Gavage Feeding Needle	VWR	7912	Our rodent studies utilized a 18 gauge feeding needle. This size may need to be adjusted for use in other mammilian species.
Sucrose	Sigma Aldrich	S0389-500G