약리 및 독성 연구에 대한 구두 또한 용해 스트립을 활용 : 동물 용 구강 투여에 대한 간단하고 동물 애호 대안

요약

다음 프로토콜은 일반적으로 사용되는 구강 투여 방법 대신 경구 용해 스트립 (ODS)을 사용하여 만성 경구 약물 투여를위한 신규 한 방법을 설명한다. 우리는 ODS 방법을 사용하여 전임상, 경구 약물 전달은 구강 투여에 안전하고 편리하며 인도적인 대안을 나타낸다는 것을 보여줍니다.

초록

인간의 새로운 치료제를 테스트하기 전에 단기 및 장기 전임상 (즉, 동물), 반복적 인 약리 및 독성 시험이 필요합니다. 대부분의 경우, 관리의 기본 경로는 경구 전달을 통해입니다. 현재, 경구 전달은 대부분이 동물 모델에서 일관되고 정확한 투여를 달성 할 수 있기 때문에, 부분적으로 경구 위관 절차를 사용하여 달성된다. 이 방법은 잘 구축되어 있지만 그것은 동물 마찰의 높은 비율이 발생할 수 있습니다 합병증을 가지고있다. 이를 위해, 여기에 도입되는 과정은 단순히 그 후 급속으로 용해되는 실험 동물에게 제공 될 수있는 원하는 약물이 경구 스트립 (ODS)을 용해하는 tastant 혼입되는 구강 투여 방법에 대한 대안을 설명 시험 대상의 최소 조작. 여기서, 우리는 ODS 방법을 이용한 전임상 구강 약물 전달은 안전하고 편리하며 인간 알테을 나타낸다는 것을 입증구강 투여에 rnative.

서문

임상 개발에 전임상 (동물 실험)로부터 약물의 성공적인 번역 위해서는 일련의 인 (급성 및 만성 약리학 적 및 독성 학적 연구는 투여의 목적으로 임상 경로를 사용하여 동물 모델에서 수행 될 필요가 잘 정의 일반적으로 경구). 이 목표를 달성하기 위해, 대부분의 전임상 연구는 현재 주어진 구강 투여 절차를 이용하는 동물에게 시험 화합물의 일관되고 정확한 전달이 방법은 그 결과. 그러나, 많은 경우, 구강 투여는 당해 동물에 의해 허용 및 축적의 증거는 상기 방법은 응력 유도 ^한 상당량와 관련된 제안하지 않는다.

이 같은 장기 전임상 연구를 필요 만성 평생 조건 치료법의 개발에 특히 그러하다의 경우 만, 거의 모든 신경 장애, 이에 한정되지 않는다. 기능에 대한tance 알츠하이머 병의 트랜스 제닉 마우스 모델에서는, 최근 위관 방법 자체 의한 ^{응력이 유도} 투여에 실험 결과를 혼란시킬 수 있다고 제안 하였다. 그 자체 - - 현저 실험의 완전성을 위태롭게 지점 알콜 섭취의 정도를 감소시킬 수있다 유사하게, 알코올 소비의 마우스 모델에서, 우리의 실험에서 미공개 발견은 위관 영양 튜브의 반복 삽입 것을 발견 패러다임 (도 1 참조).

경구 위관의 절차와 관련된 상기 한계를 감안할 때, 상당한 노력이 전임상 경구 약물 전달의 새로운 방법을 개발하는쪽으로 넣어왔다. 현재 다른 방법은 associ 있습니다 모두, 물 ⁷ 및 웨이퍼 크래커 ^(8)를 마시고, 땅콩 버터 혼합물 ^(3), 젤라틴 금형 ^4-5, 초콜릿 펠렛 ^(6)에 시험 화합물을 포함 포함못하는 등의 문제 다양한 각도 ated가 동물 모델에서 안정적으로 사용하기 위해, 약물이 덜 용이하게 ^구를 소비하게 피검 사체 또는 풍미의 개별 환경에 의한 시험 화합물 흡수의 도입 부족.

본원에 도입 절차는 원하는 약물이 경구 투여 실험 동물에게 시험 화합물을 투여하는데 사용될 용이 용이하게 할 수 향미 경구 용해 스트립 (ODS)에 포함시키는 방법을 설명한다. 이 논문은 마우스를 사용하여 ODS 방법의 효과를 입증에 초점을 맞추고 있습니다. 그러나, 동일한 방법이 또한 다른 설치류뿐만 아니라, 더 큰 포유 동물 피험자에서 유용하지 않을 것이라고 예상 할 이유가 없다. 임상 ODS의 사용은 곤란 ^{10 삼} 극복하기위한 방법으로, 소아과 및 노인 환자에 채용되기 시작한다. 우리는 ODS는 또한 안전하고 편리한대로 전임상 신약 개발 프로그램에서 성공적으로 사용될 수 있음을 제안구강 투여, 그리고 인도적인 대안.

프로토콜

설명 모든 절차는 남부 캘리포니아 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.

1. 동물 취급 및 요법 이니

1. 소개
   1. 마우스가 사육 조건에 적응하고 실험의 기술을 취급하는 것은 다음의 약물 관리 과정에서 스트레스를 감소 할 수 있습니다. 이 시간 동안, 체중과 각 마우스의 음식 섭취를 기록; 원하는 경우, 나중에 약물 독성 (옵션) 평가하기위한 비교의 비 침습적 포인트로서 사용될 수있다. 전자는 중량 계 약물 투여를 결정하는데 사용될 수있다.
      주 : 일화의 습관화 기간의 길이가 상호 작용 실험자 동물의 수에 근거하여 결정되어야한다. 우리의 경험에서, C57BL / 6J 균주의 마우스는 문제가 우리의 전형적인 주일 동안 습관화 기간 내에보다 5 ~보다 사람 취급 habituating가 존재하는 것이 확인되었다. , 가능하면실험은 (들)도 이전 보고서는 냄새와 같은 새로운 자극을 나타냅니다으로 습관화 기간 ^(11)을 방해 할 수있다, 동물을 취급하기 전에 향수 로션, 비누, 향수를 사용을 자제하는 것이 좋습니다.
2. 단계
   1. 이상에서 5 일 이전에 연구의 시작에 시작, 이후의 실험이 발생하는 방에 동물을 전송합니다.
   2. 단단히 꼬리의 중간을 잡고 조심스럽게 케이지에서 그리고 무게 보트에 동물을 올려 마우스의 무게를 기록한다.
      1. 이 꼬리 ^(12)의 말단 부분을 파악 할 때 발생할 수있는 degloving 부상을 방지하기로 제대로, 꼬리의 중간 / 근위 측면을 파악하기 위해 염두에 cagekeeping에서 해제되는 즉시 규모에 마우스를 놓습니다.
      2. 마우스가 안전하게 무게 보트에 배치 된 후 중량 값을 기록한다.
   3. RECOM 대한 음식의 질량을 녹음실험 ¹³ 중에 캡처 잠재적 독성 도움 기준선 음식 소비 레벨을 설정하기 위해, 연속 2 일 동안 수선.

먹이 바늘 2. 준비, 자당 솔루션 및 개별 ODS

1. 실험을위한 준비로 스테인리스 위관 영양법 바늘을 살균 오토 클레이브를 사용한다. 필요하다면 2 바늘 / 그룹 및 1 추가 바늘을 준비하는 백으로 사용할 수 있습니다.
   참고 :이 연구는 곡선 1.5 인치, 18 G를 이용, 바늘의 끝에서 2.25 mm 공 바늘을 공급 스테인레스 스틸.
2. (w / v)의 자당 용액을 4.25 %을 만들 자당의 0.85 g에 물 20ml를 추가합니다.
   참고 : 자당의 평가 다른 낮은 용량에서 매개 변수에 따라 잠재적으로 ¹⁴ 사용될 수있다.
3. 직경 0.5 cm 인치 조각으로 표준 직사각형 테스트 스트립을 절단하여 각 동물의 구강 용해 스트립 (ODS)를 준비 우리시중에서 판매하는 단일 분기 인치 구멍 구멍을 뚫는을 보내고. 이 데모에 사용 된 직사각형의 테스트 스트립은 이버 멕틴의 6 밀리그램 (IVM)를 포함하도록 제조하고,이 크기로 잘라 때, 원하는 각 동물에 대한 10 ㎎ / ㎏ 용량에 근접 각 원형 조각에 0.21 mg을 투여을 (우리의 할당 된 용량 / 동물). 이 투여 량 / 농축 직사각형 스트립 전체 제형을 희석 및 / 또는 다른 크기로 스트립을 절단함으로써 조정될 수있다.

3. 약물 - 배달

1. 이전 단계 1.1-1.2에서 설명한 바와 같이 가중치를 기록한다.
2. 무게를 녹음 한 후, 금속 격자 케이지 위로 마우스를 이동합니다. 이 후, 지배적 인 엄지, 검지 손가락, 3 ^{번째 손가락을} 사용하여 조심스럽게 꼬리에 당깁니다. 이 마우스에 실수 그립 와이어 케이지 상단의 원인이 멀리 실험에서 몸을 스트레칭, 그 뒤쪽을 스트레칭합니다.
3. 비-DO와 목의 목덜미를 잡고minant 엄지, 검지 손가락, 3 ^{번째 손가락이} 편안하게 안전 손잡이와 동물을 억제합니다.
   참고 : 작은 손을 가진 실험은 또한 뒷면의 목덜미를 다시 끌어와 마우스의보다 안전한 유지를 얻기 위해, 동일한 손의 손가락 ^번째 4를 사용할 수 있습니다. 또한, 개인이 선호하는 약지 및 / 또는 새끼 손가락에 따라 같은 꼬리를 보호하는데 사용될 수 있지만은 이것은 ¹² 불필요하다.
4. 수직 위치에 마우스를 잡으십시오.
5. 주의 : 마우스의 점막 점막의 색을 관찰한다. 보라색 ​​/ 파란색 외관은 실험자가 너무 꽉 목덜미를 cinching하고 마우스가 숨을 쉴 수 없다는 것을 나타냅니다.
   1. 이 경우, 즉시 다시 아래로 금속 케이지 위에 마우스를 놓고는 동물을 억제하기 위해 다시 시도하기 전에 ~ 2 ~ 3 분을 휴식 할 수 있습니다.
6. tastant 역할을 4.25 % 자당 용액에 위관 바늘의 전구 팁을 잠수함는 ODS에 접착.
7. 경구 용해 스트립을 부착하는 위관 바늘의 전구 팁과 프리 컷 ODS 아래로 누릅니다.
8. 콧 구멍 및 / 또는 입에 가까이 배치함으로써, 마우스의 ODS가 존재하고, 동물이 필름을 소비 할 수있다. 대안 ODS는 마우스 제비위한 혀에 직접 얇은 스트립을 배치하여 구강에 국소 적으로 전달 될 수있다.
9. 감염의 확산을 방지하기 위해 약물 투여 세션 동안 바늘 중간 그룹을 교체합니다.

결과

다음 대표적인 연구에서, 소셜 음주는 이전 ¹⁵ 바와 같이 24 시간 두 병 선택 (TBC) 패러다임을 사용하여 모델링되었다. 요약하면, 마우스는 물을 포함하는 하나의 해결책 두 병에 대한 액세스를 가지고, 다른 하나는 10 % (v / v) 에탄올 수용액. 평균 10E (10 % 에탄올 / 90 % 물, v / v)의 흡기 그룹간에 유사하도록 주제이어서 약물 처리 군에 할당 하였다.

토론

구강 투여는 잠재적으로 손상된 데이터 수집 및 동물 감소 ^1의 높은 비율을 초래 다양한 합병증과 연관되어 있습니다. 여기 경구 약물 전달하는 간단한 방법을 통해 마우스 (그리고 잠재적으로 다른 동물) 경구 용해 스트립 (ODS)을 통해 선택의 약물을 소비 용이하고 확실하게 할 수 도입된다. 특히,이 방법의 사용은 구강 투여에 안전하고 편리하며 인간 대안을 나타낸다.

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Orally Dissolving Strip	Cure Pharmaceutical		Available upon special request. Alternatively, ODS may also be prepared in-house.
Gavage Feeding Needle	VWR	7912	Our rodent studies utilized a 18 gauge feeding needle. This size may need to be adjusted for use in other mammilian species.
Sucrose	Sigma Aldrich	S0389-500G