JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Disassembly of influenza A virus cores during virus entry into host cells is a multistep process. We describe an in vitro method to analyze the early stages of viral uncoating. In this approach, velocity gradient centrifugation is used to biochemically dissect the steps that initiate uncoating under defined conditions.

Abstract

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus (IAV), virus fusion with the endosomal membrane as well as the subsequent disassembly of the viral capsid, called uncoating, is governed by the ionic conditions inside endocytic vesicles. The early steps in the virus life cycle are hard to study because endosomes cannot be directly accessed experimentally, creating the need for an in vitro approach. Here, we describe a method based on velocity gradient centrifugation of purified virions through a two-layer glycerol gradient, which enables analysis of the IAV core and its stability. The gradient contains a non-ionic detergent (NP-40) in its lower layer to remove the viral membrane by solubilization as the virus sediments toward the bottom. At neutral pH, viral cores are pelleted as stable structures. The major core components, matrix protein (M1) and the viral ribonucleoproteins (vRNPs), can be clearly identified in the pellet fraction by SDS-PAGE. Decreasing the pH to 6.0 or lower in the bottom layer selectively removes M1 from the pellet followed by release of vRNPs at more acidic conditions. Viral protein bands on Coomassie-stained gels can be subjected to densitometric quantification to monitor intermediate states of IAV disassembly. Besides pH, other factors that influence viral core stability can be assessed, such as salt concentration and putative viral uncoating factors, simply by modifying the detergent-containing glycerol layer accordingly. Taken together, the presented technique allows highly reproducible and quantitative analysis of viral uncoating in vitro. It can be applied to other enveloped viruses that undergo complex uncoating processes.

Introduction

فيروس الانفلونزا (IAV) هو فيروس يلفها وينتمي إلى عائلة فيروسات مخاطية قويمة. يتم ترميز جيناته على مجزأة، السلبي، بمعنى واحد الذين تقطعت بهم السبل جينوم الحمض النووي الريبي. في البشر، IAV يسبب التهابات الجهاز التنفسي، والتي تحدث في تفشي وباء الموسمية ويحمل احتمالات الأوبئة العالمية 1. على الربط إلى بقايا حمض اللعابي على سطح الخلية المضيفة 2، والمنضوية IAV بواسطة الإلتقام تعتمد على بالكلاذرين ومسارات مستقلة بالكلاذرين 3-8. الوسط الحمضي (درجة الحموضة <5.5) في فجوات التقامي يتسبب في تغيير متعلق بتكوين رئيسيا في IAV ارتفاع بروتين سكري هيماغلوتينين (HA)، مما يؤدي إلى انصهار الفيروسية والراحل endosomal غشاء 9. مرة واحدة قفيصة IAV (كما يشار إليها هنا ب "الأساسية" الفيروسي) قد فر من الإندوسومات أواخر (ليه)، وغير المصقول في العصارة الخلوية تليها النقل من ribonucleoproteins الفيروسية (vRNPs) في نواة - موقع ستكاثر الفيروس و والنسخ 10-13. قبل تفعيل حمض HA الفيروس يواجه انخفاض تدريجي في درجة الحموضة في النظام التقامي، الذي يعبي الأساسية للتفكك اللاحق 14-16. في هذا "فتيلة" خطوة القنوات الأيونية M2 في الغشاء الفيروسي توسط في تدفق البروتونات وK +10،14،16. التغير في تركيز الأيونية في الداخل فيروس يزعج التفاعلات تراكم من البروتين مصفوفة الفيروسي M1 وحزمة vRNP ثمانية، ويسهل IAV uncoating في السيتوبلازم التالية الغشاء الانصهار 10،14-17.

وقد أعاق تحليل مباشر والكمي للخطوة فتيلة من حقيقة أن الإندوسومات يصعب الوصول تجريبيا. كانت عملية الإدخال، وعلاوة على ذلك، إلى حد كبير غير متزامن. وبالإضافة إلى ذلك، المقايسات نقطة النهاية، مثل QRT-PCR RNA من القياسات أو العدوى الفيروسية المفرج عنهم، لا تقدم صورة تفصيلية عن الحالة البيوكيميائية للcapsi الفيروسيةد في أي خطوة معينة من الدخول. في حين اضطراب الإندوسومات من سيرنا أو العلاج من تعاطي المخدرات ساهم بشكل كبير في فهم دخول IAV 18-20، صقل صعب وعرضة لآثار جانبية غير محددة في برنامج الاندوسوم النضج لرقابة مشددة.

لتجنب هذه المشاكل، ونحن تكيفت لفي المختبر بروتوكول سبق وضعها على أساس استخدام سرعة التدرج الطرد المركزي 17. وعلى النقيض من المحاولات الأخرى 21،22، 23،24، التي استندت في معظمها على مزيج من انشقاق بروتين والعلاج المنظفات تليها تحليل EM، مكن هذا النهج نتيجة قابلة للقياس بسهولة. الطرد المركزي من خلال طبقات متدرجة مختلفة يسمح الجسيمات المترسبة إلى أن تتعرض لوتتفاعل مع الظروف المتغيرة في الطريقة التي تسيطر عليها. في بروتوكول المعروضة، IAV المستمدة من السوائل السقاء توضيح أو الجسيمات الفيروسية النقاء والرسوبية إلى الجلسرين من طبقتينالتدرج التي تحتوي الطبقة السفلى المنظفات غير الأيونية NP-40 (الشكل 1). كما يدخل الفيروس الثانية، طبقة التي تحتوي على مواد التنظيف، وبالفاعلات والفيروسية المغلف الدهون والبروتينات السكرية المغلف بلطف وتركت وراءها. جوهر، ويتألف من vRNP حزمة ثمانية ومحاطة بطبقة مصفوفة والرواسب بمثابة هيكل مستقر في جزء بيليه. البروتينات الأساسية الفيروسية، مثل M1 والبروتين النووي المرتبطة vRNP (NP)، يمكن تحديدها في بيليه بواسطة SDS-PAGE وCoomassie تلطيخ. على وجه الخصوص، والاستفادة من المواد الهلامية التدرج المتاحة تجاريا وتلطيخ مع الغروية حساسة للغاية Coomassie 25، وتمكن عالية الدقة وكشف حتى كميات صغيرة من البروتينات المرتبطة الأساسية الفيروسية.

هذا يضع أساسا لاختبار ما إذا كانت الظروف مختلفة مثل درجة الحموضة، تركيز الملح، والعوامل uncoating المفترضة لها آثار على سلوك الترسيب من المكونات الأساسية وSTABIL الأساسية إيتي. لتحقيق هذا الهدف، يتم تعديل فقط، الطبقة السفلى التي تحتوي على مواد التنظيف في التدرج الجلسرين عن طريق إدخال عامل أو شرط من الفائدة. وكانت هذه التقنية قيمة خاصة في التحقيق في تأثير القيم الرقم الهيدروجيني وتركيز الملح مختلفة على سلامة جوهر IAV 16. يمكن رصد الخطوات الوسيطة من IAV uncoating بما في ذلك تفكك طبقة المصفوفة في درجة الحموضة الحمضية أقل ما يقال (<6.5)، يليه vRNP التفكك في الرقم الهيدروجيني 5.5 وانخفاض 16،17 (الشكل 1). وتعززت الخطوة الأخيرة أبعد من ذلك وجود ارتفاع K + التركيز في طبقة الجلسرين، والتي تعكس بيئة التقامي أواخر 16. وبالتالي، بأنه الفيروس وجوهر الرسوبية من خلال التدرج أنها شهدت بيئة المتغيرة التي يحاكي الظروف في الإندوسومات. وكانت النتيجة التفكيك التدريجي للالأساسية الفيروسي في المختبر، واستكمال النتائج المستمدة من المقايسات بيولوجيا الخلية.

ر "> وقد مكن الطريقة المعروضة هنا سريع وتحليل تكرار للغاية من IAV (X31) و (A / WSN / 33) وIBV (B / لي / 40) uncoating الناجمة عن الحامضية وزيادة K +16،17 فضلا عن التفكيك من النوى الفيروسة المخاطانية على قلوية درجة الحموضة تعرض 17. فمن المتصور أن النهج يمكن أن تتكيف مع الفيروسات يلفها أخرى لاكتساب نظرة ثاقبة الخصائص الكيميائية الحيوية للهيكل قفيصة الفيروسية والتفكيك القفيصة أثناء دخول الخلية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. إعداد المخازن المؤقتة والحلول المالية

  1. إعداد العازلة MNT (20 ملي زارة التربية والعلم، 30 ملي تريس و 100 ملي مول كلوريد الصوديوم) عن طريق إذابة 470 ملغ تريس هيدروكلوريد، 390 ملغ MES هيدرات و 580 ملغ كلوريد الصوديوم في 80 مل ده 2 O. ضبط المخزن المؤقت إلى 7.4 درجة الحموضة وإحضاره إلى الحجم النهائي من 100 مل مع DDH 2 O.
  2. إعداد ثلاثة حلول متطابقة من 500 عازلة ملي زارة التربية والعلم عن طريق إذابة 9.76 ز MES هيدرات في 80 مل O 2 درهم لكل منهما. ضبط مخازن لدرجة الحموضة 5.8، 5.4، و 5.0، على التوالي، من خلال المعايرة مع تركيز هيدروكسيد الصوديوم. جلب كل المخزن المؤقت إلى الحجم النهائي من 100 مل مع DH 2 O.
  3. إعداد حلين متطابقة من 500 عازلة ملي تريس عن طريق إذابة 7.88 ز تريس هيدروكلوريد في 80 مل O 2 درهم لكل وضبط درجة الحموضة إلى 7.4 و 6.4، على التوالي، من خلال المعايرة مع المركز HCI. جلب المخزن المؤقت إلى الحجم النهائي من 100 مل مع DH 2 O.
  4. تجهيز 50٪ من محلول الجلسرين في DH 2 O ويقلب جيدا حتى glycإيرول هو مختلط متجانس. تصفية حل من خلال وحدة تصفية Steritop (0.22 حجم ميكرون المسام) في زجاجة.
  5. إعداد 10٪ NP-40 حل و 1 M كلوريد الصوديوم في DH 2 O.
  6. إعداد 25X تتركز مثبط البروتياز عن طريق إذابة قرصين في 4 مل ده 2 O.

2. إعداد الجلسرين التدرجات

  1. إعداد 5 مل المنظفات مزيج عازلة الرئيسي (300 ملي مول كلوريد الصوديوم، 2٪ NP-40، وتتركز 2X مثبط البروتياز) الحل لكل حالة الحموضة إلى اختبار (الرقم الهيدروجيني 7.4، 6.4، 5.8، 5.4، و 5.0). لهذا الغرض، خلط 9 مل من 1 M كلوريد الصوديوم، 6 مل من 10٪ NP-40، و 2.4 مل من الأسهم المانع 25X الأنزيم البروتيني، و 9 مل ده 2 0.
  2. لكل حالة الماصة درجة الحموضة 4.4 مل من مزيج الرئيسي إلى 50 مل أنبوب مخروطي الشكل.
  3. للحصول على قيم درجة الحموضة فوق 5.8 إضافة 0.6 مل للتعديل درجة الحموضة حل 500 سهم ملي تريس منها إلى الأنبوب. الرقم الهيدروجيني 5.8 وأقل إضافة 0.6 مل من 500 ملي زارة التربية والعلم محلول المخزون منها، تعديل درجة الحموضة.
  4. جعل 5مل من محلول العازلة التي تحتوي على 300 ملي مول كلوريد الصوديوم، 2X مثبط البروتياز، 60 ملي تريس تعديلها لدرجة الحموضة 7.4 و ده 2 O. وهذا سيكون بمثابة المخزن المؤقت وحة التحكم في التدرج خالية من المنظفات.
  5. إذا لزم الأمر، ودفع غرامة ضبط درجة الحموضة من الحلول لدرجة الحموضة 7.4، 6.4، 5.8، 5.4، و 5.0 عن طريق إضافة تتركز HCI أو هيدروكسيد الصوديوم الحلول، على التوالي.
  6. إضافة 5 مل من الأسهم الجلسرين 50٪ إلى 5 مل من خليط العازلة التي تحتوي على مواد التنظيف وخالية من المنظفات مما أسفر عن ستة مختلفة حلول الجلسرين 25٪. تحقق من قيم الرقم الهيدروجيني باستخدام شرائط مؤشر الرقم الهيدروجيني.
    ملاحظة: في حالة تختلف درجة الحموضة قياسها بشكل كبير من القيمة المطلوبة، ينبغي إعداد الحلول منها مرة أخرى.
  7. إعداد 15٪ من محلول الجلسرين عن طريق خلط 50٪ الأسهم الجلسرين مع DH 2 O في نسبة 3: 7.

3. تنبيذ فائق من IAV

  1. إضافة 3 مل 15٪ الحل الجلسرين في أنابيب الطرد المركزي فائقة الوضوح (13.2 مل، 14 ملم × 89 ملم) باستخدام حقنة 5 مل ونيDLE (21 G، 9 سم). لا تترك قطرات في الجدار الداخلي للأنبوب لأن ذلك قد يزعج سلامة التدرج. كرر هذا ليصبح المجموع ستة أنابيب الطرد المركزي، واحدة لكل من ظروف الأس الهيدروجيني خمسة لاختبار واحد للعينة السيطرة.
  2. وضع بعناية 3.4 مل 25٪ الحل الجلسرين تحت طبقة الجلسرين 15٪ باستخدام حقنة مل 5 و إبرة طويلة. الحرص على عدم خلط طبقتين. كرر هذا لجميع الشروط الستة لاختبار مع الحلول الجلسرين كل المعدلة درجة الحموضة.
    ملاحظة: العمل في الدرجة الثانية الوزراء للسلامة الأحيائية للخطوات التالية.
  3. تراكب بلطف التدرجات الجلسرين مع 30 ميكرولتر أوضح السوائل السقاء تحتوي على IAV (X31، H3N2) المخفف في 1 مل العازلة MNT (يناظر حوالي 20-30 ميكروغرام من البروتين الكلي الفيروسي) لكل التدرج.
  4. التوازن معارضة الأنابيب ووضعها في تنبيذ فائق الدوار SW41. الطرد المركزي لمدة 150 دقيقة، في 55000 x ج، و 12 درجة مئوية.
  5. بعد الطرد المركزي، بعنايةإزالة طاف، أي كل من طبقات الجلسرين باستخدام ماصة باستور نظيفة والشافطة. Resuspend وبيليه في 40 ميكرولتر (1X) غير الحد عينة العازلة LDS. ومن المهم أن الماصة صعودا وهبوطا عدة مرات بحل بيليه تماما. نقل العينة إلى أنبوب microcentrifuge 1.5 مل.

4. SDS-PAGE من بيليه الكسور وCoomassie تلطيخ

  1. حرارة جميع العينات في درجة حرارة 95 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة. عند هذه النقطة يمكن أن يتم تخزين العينات في -20 درجة مئوية حتى يتم تحليلها بواسطة SDS-PAGE.
  2. تحميل 20 ميكرولتر من الكريات المنحل على التدرج مسبقة الصب (4-12٪) مكرر تريس هلام صغيرة وتشغيل لمدة 1 ساعة على 200 V في 1X اجتماعات الأطراف SDS العازلة على التوالي.
  3. جعل حل التثبيت مع 40٪ الميثانول وحمض الخليك 10٪ الجليدية في ده 2 O.
  4. احتضان الجل في حل التثبيت لمدة 1 ساعة وصمة عار بين عشية وضحاها في 15 سم طبق ثقافة الخلية مع حجم كاف من الغروية حل Coomassie بينما بلطفاهتزاز في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: من المهم لإغلاق طبق من أجل تجنب التبخر من الحل تلطيخ.
  5. يزيل اللون هلام في ده 2 O. استبدال ده 2 O كل 15-20 دقيقة حتى يصبح خلفية جل واضحة. تخزين هلام في ده 2 O في 4 درجات مئوية حتى يتم مسحها لتقدير الفرقة.
  6. مسح هلام بدقة عالية واستخدام البرامج المتاحة أو حسب الطلب تجاريا لتقدير من شدة الفرقة البروتين. طرح إشارة الخلفية من منطقة قريبة من العصابات منها وتطبيع هذه القيم لعينات سيطرة خالية من المنظفات (في درجة الحموضة 7.4).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

كما سبق ذكره، مطلوب فتيلة في الإندوسومات لتقديم الأساسية IAV uncoating المختصة. بروتوناتيون من جوهر يضعف تفاعل M1 وvRNPs (تتكون من الحمض النووي الريبي الفيروسي، NP، والبلمرة PB1 معقد / PB2 / PA). يبدأ هذه العملية عندما يتعرض فيروس الواردة إلى الرقم الهيدروجيني من 6.5...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

capsids الفيروسية المجمعات الجزيئات متبدل الاستقرار. في حين تجميع virions يتطلب encapsidation والتكثيف من الجينوم فيروس، بدء الجولة القادمة من عدوى يعتمد على تفكيك هذه البنية القفيصة المضغوط. وقد تطورت الفيروسات لاستغلال الآليات الخلوية المختلفة للسيطرة على دورة طلاء uncoating، بم?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

نشكر يوهي ياموتشي وروبرتا مانشيني لتزويدنا الكواشف. وأيد المختبر ه من قبل ماري كوري شبكة التكوين الأولي (آي تي)، والمجلس الأوروبي للبحوث (ERC)، ومؤسسة العلوم الوطنية السويسرية (SINERGIA).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
cOmplete™, EDTA-free protease inhibitor tabletsSigma-Aldrich11873580001The stock solution can be stored at 2 to 8 °C for 1 to 2 weeks
Glacial acetic acidMerck Millipore100063
Glycerol anhydrous BioChemicaAppliChemA1123
Hydrochloric acidMerck Millipore100317
Long injection needle (21 G, 9 cm, bevel or blunt-end)
MES hydrateSigma-AldrichM8250
MethanolMerck Millipore106009
NP-40Sigma-AldrichI8896Now commercially available as IGEPAL® CA-630
NuPAGE 4-12% Bis-Tris mini gels, 10 wells, 1.0 mmLife TechnologiesNP0321
NuPAGE LDS sample buffer (4x)Life TechnologiesNP0008
NuPAGE MOPS SDS running buffer (20x)Life TechnologiesNP0001
pH indicator strips, pH 4.0-7.0Merck Millipore109542
QC Colloidal Coomassie StainBIO RAD1610803
Sodium chlorideMerck Millipore106406
SodiumhydroxideMerck Millipore106498
Steritop filter unitMerck MilliporeSCGPT05RE
SW41 Ti, ultracentrifuge rotor setBeckman Coulter331336
Thinwall, Ultra-clear centrifuge tubes, 13.2 ml, 14 mm x 89 mmBeckman Coulter344059
Tris hydrochloride AppliChemA1087
X31 Influenza A virus (H3N2), egg-grown, clarified allantoic fluidVirapurFreshly thawed on 4 °C

References

  1. Taubenberger, J. K., Kash, J. C. Influenza Virus Evolution, Host Adaptation, and Pandemic Formation. Cell host & microbe. 7 (6), 440-451 (2010).
  2. Skehel, J. J., Wiley, D. C. Receptor binding and membrane fusion in virus entry: the influenza hemagglutinin. Annual review of biochemistry. 69, 531-569 (2000).
  3. de Vries, E., et al. Dissection of the influenza a virus endocytic routes reveals macropinocytosis as an alternative entry pathway. PLoS pathogens. 7 (3), e1001329(2011).
  4. Matlin, K. S., Reggio, H., Helenius, A., Simons, K. Infectious entry pathway of influenza virus in a canine kidney cell line. J Cell Biol. 91 (3 Pt 1), 601-613 (1981).
  5. Patterson, S., Oxford, J. S., Dourmashkin, R. R. Studies on the mechanism of influenza virus entry into cells. J Gen Virol. 43 (1), 223-229 (1979).
  6. Rust, M. J., Lakadamyali, M., Zhang, F., Zhuang, X. Assembly of endocytic machinery around individual influenza viruses during viral entry. Nat Struct Mol Biol. 11 (6), 567-573 (2004).
  7. Sieczkarski, S. B., Whittaker, G. R. Dissecting virus entry via endocytosis. J Gen Virol. 83 (Pt 7), 1535-1545 (2002).
  8. Yoshimura, A., et al. Infectious Cell Entry Mechanism of Influenza Virus. Journal of Virology. 43 (1), 284-293 (1982).
  9. White, J., Kartenbeck, J., Helenius, A. Membrane-fusion activity of influenza virus. Embo Journal. 1 (2), 217-222 (1982).
  10. Martin, K., Helenius, A. Nuclear transport of influenza virus ribonucleoproteins: The viral matrix protein (M1) promotes export and inhibits import. Cell. 67 (1), 117-130 (1991).
  11. Palese, P., Shaw, M. L. Chapter 47. Fields Virology. Knipe, D. M., Howley, P. M. , Lippincott Williams & Wilkins. 1647-1690 (2006).
  12. Chou, Y. -Y., et al. Colocalization of Different Influenza Viral RNA Segments in the Cytoplasm before Viral Budding as Shown by Single-molecule Sensitivity FISH Analysis. PLoS Pathog. 9 (5), e1003358(2013).
  13. Martin, K., Helenius, A. Transport of incoming influenza virus nucleocapsids into the nucleus. Journal of Virology. 65 (1), 232-244 (1991).
  14. Bui, M., Whittaker, G., Helenius, A. Effect of M1 protein and low pH on nuclear transport of influenza virus ribonucleoproteins. Journal of Virology. 70 (12), 8391-8401 (1996).
  15. Li, S., et al. pH-Controlled Two-Step Uncoating of Influenza Virus. Biophysical Journal. 106 (7), 1447-1456 (2014).
  16. Stauffer, S., et al. Stepwise priming by acidic pH and high K+ is required for efficient uncoating of influenza A virus cores after penetration. Journal of Virology. , (2014).
  17. Zhirnov, O. P. Solubilization of matrix protein M1/M from virions occurs at different pH for orthomyxo- and paramyxoviruses. Virology. 176 (1), 274-279 (1990).
  18. Banerjee, I., et al. Influenza A virus uses the aggresome processing machinery for host cell entry. Science. 346 (6208), 473-477 (2014).
  19. Huotari, J., et al. Cullin-3 regulates late endosome maturation. Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (3), 823-828 (2012).
  20. Yamauchi, Y., et al. Histone Deacetylase 8 Is Required for Centrosome Cohesion and Influenza A Virus Entry. PLoS Pathog. 7 (10), e1002316(2011).
  21. Bachmayer, H. Selective Solubilization of Hemagglutinin and Neuraminidase from Influenza Viruses. Intervirology. 5 (5), 260-272 (1975).
  22. Reginster, M., Nermut, M. V. Preparation and Characterization of Influenza Virus Cores. Journal of General Virology. 31 (2), 211-220 (1976).
  23. Nermut, M. V. Further Investigation on the Fine Structure of Influenza Virus. Journal of General Virology. 17 (3), 317-331 (1972).
  24. Schulze, I. T. The structure of influenza virus: II. A model based on the morphology and composition of subviral particles. Virology. 47 (1), 181-196 (1972).
  25. Candiano, G., et al. Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis. Electrophoresis. 25 (9), 1327-1333 (2004).
  26. Greber, U. F., Singh, I., Helenius, A. Mechanisms of virus uncoating. Trends in microbiology. 2 (2), 52-56 (1994).
  27. Yamauchi, Y., Helenius, A. Virus entry at a glance. Journal of Cell Science. 126 (6), 1289-1295 (2013).
  28. Zhirnov, O. P., Grigoriev, V. B. Disassembly of Influenza C Viruses, Distinct from That of Influenza A and B Viruses Requires Neutral-Alkaline pH. Virology. 200 (1), 284-291 (1994).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

109 uncoating M1 vRNPs

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved