Method Article
هذه المخطوطة يصف كيفية التمييز بين الحبليات مختلفة استخدام التواقيع حيود المتطرف الميدانية. قارنا الحركة من 139 من نوع البرية و 108 "الاسطوانة" C. ايليجانس بحساب متوسط ترددات المقترنة بالتوقيع حيود فراونهوفر الزمانية في مكان واحد باستخدام ليزر موجات مستمرة.
هذه المخطوطة يصف كيفية تصنيف الديدان الخيطية استخدام التواقيع الزمني الأقصى حقل الحيود. هو تعليق واحد C. ايليجانس في عمود مياه داخل ومبومو ضوئية. يتم توجيه 632 نانومتر ليزر زناد موجات مستمرة من خلال ومبومو استخدام المرايا سطح الجبهة. ويضمن مسافة كبيرة من 20-30 سم على الأقل سافر بعد الضوء يمر عبر ومبومو نمط حيود (فراونهوفر) أقصى ميدان مفيدة. التغييرات نمط حيود في الوقت الحقيقي كما ديدان أسطوانية تسبح ضمن شعاع الليزر. الضوئي يوضع خارج المركز في نمط الحيود. إشارة الجهد من الضوئي ويلاحظ في الوقت الحقيقي وتسجيلها باستخدام الذبذبات رقمية. يتم تكرار هذه العملية لنوع البرية 139 و 108 "الاسطوانة" C. ايليجانس. الديدان نوع البرية يحمل نمط التذبذب سريع في الحل. وقد الديدان "الاسطوانة" طفرة في أحد مكونات رئيسية لبشرة الذي يتداخل مع انتقال سلس. يتم تجاهل الفواصل الزمنية التي لا تخلو من التشبع والخمول. أنها عملية قسمة كل المتوسط إلى الحد الأقصى لمقارنة الكثافات النسبية. الإشارة لكل دودة من تحويل فورييه حتى أن يظهر نمط التكرار لكل دودة. إشارة لكل نوع من الفيروس المتنقل هو في المتوسط. متوسط الأطياف فورييه لنوع البرية و "الاسطوانة" C. ايليجانس تختلف اختلافاً واضحا وتكشف عن أنه يمكن التمييز بين الأشكال دودة دينامية من سلالات مختلفة من دودة اثنين استخدام تحليل فورييه. طيف فورييه لكل سلالة دودة مطابقة نموذج تقريبي باستخدام اثنين من الأشكال دودة ثنائية مختلفة تتوافق مع لحظات مرضوا. ويؤكد المغلف لتوزيع تردد متوسط للديدان الفعلية وعلى غرار النموذج مطابقة البيانات. يمكن هذا الأسلوب بمثابة أساس لتحليل فورييه لكثير من الأنواع المجهرية، كما كل الكائنات الدقيقة سيكون لها طيف فورييه فريدة من نوعها.
ويقارن هذا الأسلوب أطياف التردد التجريبية وعلى غرار الحركة من ايليجانس جيم- استخدام سلالات اثنين مع أنماط مرضوا مختلفة جداً. وتبين النتائج أن الطيف الترددي يعتمد على التغيرات الزمنية كما ديدان أسطوانية تسبح في عمود الماء حيث أن الصور المجهرية واضحة ليست هناك حاجة لتحليل. هذا الأسلوب يسمح للتحليل الكمي في الوقت الحقيقي ويوفر معلومات مكملة للصور/الفيديو التي تم الحصول عليها مع المجاهر التقليدية. حيود فراونهوفر، كما دعا حيود المتطرف الميدانية، يوفر الأساس للحصول على الحيود يعيش البيانات1،2. شدة الضوء في أي نقطة واحدة في نمط حيود هو نتيجة لفرض الضوء من كل نقطة في مخطط السلكية3. نتيجة لذلك شدة الضوء التي تم جمعها على مر الزمن يحمل معلومات عن الحركة ديدان أسطوانية. تحليل الإشارات حيود تعتمد على الوقت يمكن تحديد الحركة المميزة للمسخ المقابلة نظراً لتحليل جميع الترددات تشارك في الحركة ويكمل التحليل الفيديو التقليدية. وفي هذه الحالة، تأكدت الفروق المميزة بين الحركة من "الاسطوانة" والبرية نوع C. ايليجانس بمقارنة الأطياف تردد اثنين من سلالات مختلفة من ديدان أسطوانية.
وقد أكد بعض الخصائص السابقة استخدام تردد تحليل الإشارات حيود مثل السباحة الترددات2،4. الأهم من ذلك، يمكن استخدام هذا الأسلوب كوسيلة تكميلية للفحص المجهري التقليدي لمراقبة الحركة في الوقت الحقيقي على شاشة كمبيوتر، ويتم جمع البيانات. يمكن قياس الطيف الترددي من الديدان مع أنماط مرضوا متميزة بالنظر في تحويل فورييه إشارة الإشارات الحيود.
طبيعة متعددة التخصصات على أساس فورييه حيود في هذا العمل ينطوي على ميادين البيولوجيا والفيزياء. طالما استخدمت الحيود بإطار أخذ العينات للتحقيق في هياكل الكريستال في البيولوجيا5 وغيرها من المجالات. في هذه التجربة، بيد الإفراط6،7 ينشئ نمط حيود المتطرف الحقل حيث يتم توسيط الكائنات الحية في شعاع الليزر. الإفراط يستخدم عادة لأقل عدسة التصوير8 بالاقتران مع خوارزمية استرداد مرحلة التي يعيد بناء صورة للكائن الأصلي. استرجاع المرحلة من الصعب تحقيق عند عدسات موجودة كما الحال بالنسبة ديدان أسطوانية. توقيع حيود الزمانية ما يكفي لتقييم الترددات الرئيسية للاقتراح دودة. هذا الأسلوب هو أقل ضرائب حسابياً ويوفر وسيلة بصرية للتحديد الكمي للحركة. هذا الأسلوب يمكن سهولة تكييفها وفقا لتحليل الطفرات أو الظروف البيئية التي تغير السلوك.
1-C. ايليجانس النمو والصيانة
2. إعداد البصرية ( الشكل 1)
3. الإعداد الذبذبات
4. إعداد دودة وومبومو "جمع البيانات"
5. الحصول على البيانات "الوقت الحقيقي" "تغيرات كثافة نمط الحيود"
6. طيف فورييه للبيانات
7. النمذجة طيف فورييه
يسمح الإعداد التجريبية الضوئية هو مبين في الشكل 1 لدراسة الكائنات الحية الدقيقة دون أن تكون مرتبطة بطائرة تنسيق. ويمكن ملاحظة إشارة سحق من الضوئي في الوقت الحقيقي على شاشة الكمبيوتر كما البيانات التي يتم جمعها. سوف تظهر أنماط غير عادية فورا دون الحاجة إلى تحليل شريط فيديو بالتفصيل.
أمثلة على دودة متسلسلة على غرار حركة والمقابلة حيود أنماط مبينة في الشكل 2. أنماط الحيود على غرار نوعيا تشبه أنماط التجريبية1 ومؤشرا أولياً أن عمليات المحاكاة النموذجية بنجاح ديدان أسطوانية.
توقيع حيود الزمانية عينة من هذين النوعين من C. ايليجانس درس هنا يظهر في الشكل 3. يمكن أن تعتبر نوعيا أن كل ديدان أسطوانية ثراشيس في معدلات مختلفة والاتساع. بعض الاختلافات يمكن قياسها كمياً من خلال المنحنى المناسب كما حدث في منشور سابق1. ومع ذلك، يكشف تحويل فورييه المنفصل، مزيد من التفاصيل فيما يتعلق بالترددات المضمنة:
، (1)
حيث وك تحويل فورييه الرقمية (قدم) و وn هو إشارة حيود الخام تعتمد على الوقت مع الوقت منفصلة المتغير n و متغير التردد منفصلة ك. ن هو مجموع عدد نقاط البيانات. تحويل فوريي الرقمية متوسط يسمح لديدان أسطوانية تحديد السعة طيف الترددات الحيود (الشكل 4). الطيف النوع المتوحش تسيطر على ترددات أقل من الطيف الحركة الدوارة.
نموذج يقارب نوع البرية مقابل تلاحظ C. ايليجانس الاسطوانة نوع البرية يميل إلى التهيج في حركة (شكل W أو S) وافيليكي (الشكل 2a) بينما الاسطوانة يميل لصالح جانب واحد يشبه تقريبا على شكل ج تتأرجح ( الشكل 5). وهذا يوفر بعض التفسير لمختلف الأطياف. معظمهم ستشكل الاسطوانة C إلى جانب واحد بينما يمكن اعتبار التذبذب ث كاثنين معارضة الاقتراحات ج. ولهذا السبب، اقتراح ث أكثر تعقيداً من الكشف عن مزيد من الترددات المنخفضة الثانوية من الحركة ج. ويؤكد هذه النتيجة في النموذج الحسابي. وقد شكل ث كثافة تواتر أعلى كثيرا من هذا الشكل C (الشكل 6). هذا ما أكدته في الاتحاد الفرنسي للتنس في الشكل 4 حيث الترددات الاسطوانة تتجمع أكثر حين لا منفصلة تماما. إحصائيات الاسطوانة هي منحرفة منذ الاسطوانة يمكن أن تعود إلى الحركة البرية نوع مؤقتاً.
أطياف الطاقة متجانسة من نوع الاسطوانة C. ايليجانس يظهر ذروتها واسعة في ~1.5 هرتز، بينما يسلك نوع البرية السباحة C. ايليجانس طائفة المتعدد الوسائط (بما في ذلك قمم في ~1.0 هرتز وهرتز 1.75). الضوئي (PD) يحتوي على حجم محدود ينتشر عبر عدة عناصر المصفوفة. تختلف عناصر المصفوفة الفردية أو النقاط على نمط حيود في كثافة منذ التدخل البناءة والهدامة ويختلف؛ ومع ذلك، الترددات التي تختلف الشدة هي نفسها بالنسبة لجميع عناصر المصفوفة، كما يتبين في الشكل 7. وبالنظر على الوقت مشتق مكافئ. 1، يمكن أن نرى أن تواتر التقلبات التي لا تعتمد على المصفوفة المرحلة ولكن فقط على تقلبات الكائن الأصلي:
، (2).
كما PD ينتشر عبر عدة عناصر المصفوفة، متوسط مواقع الذروة إلى ملف تعريف تردد متسق. ويمكن توقع بعض الاختلاف ويمكن إعطاء أدلة حول التوجه للدودة. سيتم تغيير توزيع الترددات كمشية التغييرات الدودة. النموذج الحالي هو نموذج بسيط يسمح فقط لتقييم المواقع الذروة بدلاً من مرتفعات الذروة النسبية. سيكون متوسط مختلف أنماط مرضوا إلى مواقع مختلفة من الذروة.
رقم 1. الإعداد التجريبية. يتجلى يسافر شعاع الليزر منخفضة الطاقة من خلال مرشح الكثافة محايدة، مرآة M1 أسفل من خلال ومبومو يحتوي على الدودة على مرآة M2، ويسافر نحو الضوئي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2. دودة متسلسلة أشكال وأنماط الحيود المقابلة. () بعض حدد صور ثنائية متتابعة من ث على غرار الشكل الديدان الخيطية وأنماط الحيود متسلسلة المقابلة (ب). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3. تواقيع حيود العينة التجريبية. جمع التوقيعات الحيود () OH7547 "الاسطوانة" و (ب) N2 البرية نوع C. ايليجانس استخدام الضوئي وحيد في نمط الحيود. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4. التجريبية في المتوسط أطياف الطاقة للأسطوانة ونوع البرية سلسلة حيود فراونهوفر. تسجيل العرض أطياف الترددات موجودة في متوسط تحويل فورييه للسلاسل الزمنية، مع الضوئي. عامل تصفية ضبابي للانحراف المعياري 0.075 هرتز، اقتطاع في 3 الانحرافات المعيارية، يستخدم لتنعيم. ملاحظة واسعة النطاق الطيفي الذروة في ~1.5 هرتز في الطيف الاسطوانة متجانسة، بالمقارنة مع الطيف المتعدد الوسائط من النوع المتوحش متجانسة (بما في ذلك قمم في ~1.0 و 1.75 هرتز). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5. حيود تشكيل الرسم التوضيحي. يمكن أن تكون على غرار أنماط الحيود بالتفكير في كل مقطع الخط كخط مستقيم الحظوة صغيرة (إلى اليسار). فرض هذه الخطوط (يمين) يوضح بناء أنماط الحيود المتطرف الميدانية التي تم إنشاؤها بواسطة C على شكل ديدان أسطوانية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 6. محاكاة أطياف الطاقة للأسطوانة ونوع البرية سلسلة حيود فراونهوفر. () ج الشكل و (ب) ث الديدان الشكل مع الضوئي تركزت في عناصر المصفوفة 200 (عمودي) و 175 (أفقي). ويبين الشكل ث كثافة أعلى من الترددات بسبب الحركة أكثر تعقيداً. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 7. محاكاة أطياف الطاقة للأسطوانة وسلسلة حيود فراونهوفر نوع البرية في مواقع مختلفة الضوئي. () ث دودة الشكل والدودة الشكل (ب) ج لعناصر مصفوفة واحدة في مواقع شتى من محاكاة مواقع مختلفة الضوئي. تختلف مستويات الذروة لمواقع مختلفة؛ ومع ذلك، ذروة مواقع لا تزال هي نفسها لأشكال معينة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
بما في ذلك مساحات من البيانات مع الخمول سوف تحرف النتائج حيث سيكون متوسط ترددات أقل مصطنعة إلى النتائج. يمكن التعرف على تشبع الضوئي قمم مسطحة أو "قطع" قمم في البيانات الخام. تقسيم كل مجموعة البيانات الخام بشدة الذروة سوف يساعد مع المحاسبة للتقلبات في كثافة الليزر.
ترددات الذروة مؤشر لمجمل سحق التردد؛ بيد أن الحركة المعقدة يؤدي التدخل في ترددات فاز في نمط حيود وتحتاج إلى أن تدرس بعناية.
يمكن استخدام هذا الأسلوب للتحقيق في الحركة من الديدان الخيطية الأخرى. يمكن تغيير البيئة بأية وسيلة أخرى. قد يتم تغيير الأطوال الموجية كذلك. وتعمل في النطاق المرئي من الطيف الكهرومغناطيسي أسهل وأكثر أماناً.
وسوف محاكاة نموذج أكثر دقة الأطياف الحيود أكثر واقعية في المستقبل. قد يتضمن نموذج مستقبلي دودة التي يمكن تغيير التوجهات، التي لن تؤثر على مواقع الترددات ولكن مرتفعات الذروة النسبية. يسمح نموذج أكثر واقعية لتوزيع احتمالي لسحق الترددات، التي من شأنها أن توسع على قمم كما هو الحال في البيانات التجريبية. وستمثل حيز في ترددات الاختلافات في ترددات سحق.
شكل دودة الحالي النفط الخام، خاصة في منطقة الرأس والذيل، الذي ينبغي أن يكون مدبب أكثر مما في الطراز الحالي. قد يكون من المثير للاهتمام أن إجراء تحليل مفصل للسلسلة الزمنية للإشارات نظراً لأنها يمكن أن تعطي أدلة حول الطابع المعقد للحركة في طفرات مختلفة.
يجدر النظر في إمكانية التطبيق العملي لتوسيع نطاق هذا الأسلوب في وصف الديدان الخيطية متعددة في وقت واحد. ينبغي أن يفهم هذا الأسلوب كطريقة مكملة للطرق القائمة باستخدام المجاهر التقليدية. يحتوي هذا الأسلوب ميزة في عدم اشتراط مجهر خلال--الحصول على البيانات حيث أن الدودة يمكن الخروج من الطائرة التنسيق. تظهر اختلافات واضحة في الحركة دودة أطياف التردد المتوسط ويمكن قياسها كمياً بقمم التردد السائدة، وهو أسلوب رواية في التحديد الكمي لانتقال الفيروس المتنقل. تحليل بيانات التواقيع حيود في مزيد من التنمية ونأمل أن تؤدي إلى عملية تحديد هوية الآلي عدة طفرات والأفراد.
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
ونحن نشكر خوان فاسكيز لإسهاماته الحسابية مع هذا المشروع. ونحن ممتنون للدعم لكلية فاسار الجامعية البحثية الصيفية معهد (URSI)، وصندوق البحوث السلمون ماينارد لوسي وجبهة الخلاص الوطني جائزة رقم 1058385.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tunable Helium-Neon laser | Research Electro-Optics | 30602 | Four wavelengths can be selected between 543 nm and 633 nm. |
2 Front Surface Aluminum Mirrors | Thorlabs | PF10-03-F01 | |
Photodiode: SI Amplified Detector | Thorlabs | PDA 100A | |
Quartz Cuvette | Starna Cells | 21/G/5 | Plastic cells may be used as well. |
MatLab (Software) | MathWorks | R2016b (9.1.0.441655) | Use the fft command to simulate diffraction |
Excel | Microsoft | 14.7.1 | Used for data analysis of Figure 4 |
Caenorhabditis elegans Roller | University of Minnesota Caenorhabditis elegans Center (CGC) | Strain: OH7547 Genotype: otIs199. | https://cbs.umn.edu/cgc/home |
Caenorhabditis elegans Wild Type | University of Minnesota Caenorhabditis elegans Center (CGC) | Strain:N2 Genotype: C. elegans wild isolate | https://cbs.umn.edu/cgc/home |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved