الفاري شرب النماذج في وضع فارماكوثيرابيس لإدمان الكحول: شرب في اختيار الظلام واثنين--زجاجة

Summary

اضطرابات استخدام الكحول (AUD) مشكلة صحية وطنية كبرى ومطلوب تطوير علاجات أكثر فعالية لمواجهة احتياجات السكان هذا المريض. وتحقيقا لهذه الغاية، تستخدم البروتوكول التالي نموذجين الشرب القوارض بسيطة لتقييم فعالية الإكلينيكية لمركبات الكحول المضادة الرصاص.

Abstract

اضطرابات استخدام الكحول (AUD) مشكلة رئيسية مع أكثر من ما يقدر ب 76 مليون شخص في جميع أنحاء العالم الوفاء بمعايير التشخيص. العلاجات الحالية تقتصر على الأدوية وافقت إدارة الأغذية والعقاقير الثلاثة التي غير فعالة إلى حد كبير حتى عندما جنبا إلى جنب مع النفسية الانتكاس التدخل، كما يتضح من الارتفاع معدل. على هذا النحو، والبحث عن علاجات أكثر رواية تمثل هدفا هاما في مجال صحة العامة. وتحقيقا لهذه الغاية، تستخدم البروتوكول التالي نموذجين الشرب القوارض بسيطة لتقييم فعالية الإكلينيكية لمركبات الكحول المضادة الرصاص: اختيار اثنين--زجاجة (الدرن)، وشرب في الظلام (DID). السابق يسمح للفئران للشرب الطوعية في الاعتدال بينما يدفع الأخير الفئران للتبرعات تستهلك كمية كبيرة من الكحول في فترة قصيرة أن يحاكي السمر. تسمح طبيعة بسيطة وعالية الإنتاجية لكل من هذه النماذج للفحص السريع لوكلاء الدوائية أو لتحديد سلالات فئران الذي يحمل بعض السلوك الطوعية مياه الشرب.

Introduction

للماضي 25 بالإضافة إلى سنوات، وضعت جهدا كبيرا نحو تطوير أدوية لعلاج اضطرابات استخدام الكحول (AUD)¹. على الرغم من أن العديد من تقدم، أسترالي لا يزال مشكلة رئيسية لصحة العامة، التي تؤثر على الأميركيين ما يزيد على 18 مليون، وتكلف ما يزيد على مبلغ 220 بیلیون سنوياً^2،3. يوجد حاليا ثلاثة فقط الأدوية التي وافقت عليها إدارة الأغذية والعقاقير، ديسولفيرام، نالتريكسون، واكامبروسيت، كل هذه قد أسفرت عن نتائج غير متناسقة في التجارب السريرية ونجاحاً محدودا حتى عندما جنبا إلى جنب مع التدخل النفسي الاجتماعي في إعدادات عيادة ^{4 , 5 , 6 , 7}.

سبب الرئيسي لفشل العلاج أسترالي الحالي يرتبط بطبيعة ايربان أسترالي⁸. بينما تسهم العوامل البيئية والوراثية على حد سواء لتنمية أسترالي، حسابات التوريث لما يقدر 50-60 ٪ من خطر ظهور⁹. مشابهة لعلاج الاكتئاب، فإنه مقبول على نطاق واسع أن المرضى الذين يعانون من أسترالي سوف تحتاج إلى مجموعة متنوعة من الأدوية التي صممت خصيصا لتلبية احتياجات كل مريض¹⁰.

ومن الواضح أن هناك حاجة ملحة لعلاجات أكثر فعالية سيتيسر إذا كانت عملية شاقة بالفعل وتستغرق وقتاً طويلاً لاكتشاف المخدرات مبسطة³. وتحقيقا لهذه الغاية، يوضح البروتوكول التالي انطباق هذين النموذجين الشرب القوارض المستخدمة على نطاق واسع لدراسة أساس العصبية الحيوية AUD¹¹الإكلينيكية. وبشكل أكثر تحديداً، طريقة عرض هذه الوثيقة يمكن تقييم كفاءة المركبات المرشحة في الحد من الكحول الاستهلاك في كل من "المعتدلين" وسيناريوهات "حفلة شرب" استخدام الخيار الثاني--زجاجة (TBC) وشرب في النماذج (DID) الظلام، على التوالي. دراسة كلا نماذج الإدارة الذاتية الإيثانول هواء غير فعال، حيث الفئران يبتلع الإيثانول شفويا وفي الإرادة، وذلك توضيح الوجه عالية وبناء صحة كنموذج لإدمان الكحول البشرية¹¹.

في TBC الشرب، ويعرف أيضا باسم حرية اختيار الشرب، وتفضيل شرب، أو الشرب الاجتماعي، زجاجتين من الحل متوفرة بشكل مستمر في قفص المنزل. زجاجة واحدة على المياه، وأخرى تحتوي على حل مخفف من الإيثانول، حيث يمكن أن تختلف تركيز الإيثانول (على سبيل المثال-، 5-30% v/v)^11،12. الفئران من الوصول المستمر إلى كلا زجاجات، وذلك، يمكن اختيار كم تشرب من كل زجاجة.

ويقيم هذا النموذج استهلاك الإيثانول كل الماوس (غرام/كغ)، فضلا عن نسبة تفضيل الإيثانول (حجم الإيثانول المستهلكة ÷ إجمالي حجم السائل المستهلكة). يتم استخدامه بشكل روتيني لمقارنة مستويات مياه الشرب عبر سلالات مختلفة من الفئران، أو بعد تلاعب بالجينات محددة (على سبيل المثال.، خروج المغلوب الجينات أو ضربة قاضية) والنتائج في تركيزات الإيثانول الدم (بكس) مماثلة لما هو موجود في البشر عندما الشرب في الاعتدال^13،14.

في الإجراء فعلت، ح 3 بعد بدء دورة الظلام، يتم تبادل زجاجة قفص المنزلية للمياه مع زجاجة من 20% (v/v) الإيثانول الحل لوصول محدود شرب الدورة. تحدث دورات مياه الشرب كدورة 4 أيام متتالية ودائم ح 2 في 1-3 أيام وح 4 يوم 4. 1-3 أيام بمثابة فترة تعود الكحول قبل إجراء الاختبار في يوم 4. ونتيجة لذلك، الفئران موثوق سوف تستهلك الإيثانول ما يكفي لبلوغ بكس > 100 ملغ/دل، ونتيجة لذلك تظهر الآثار السلوكية للتسمم التي وجدت في البشر التي حفلة الشرب^13،،من¹⁴¹⁵. الحصول على الماء متاح في جميع الأوقات عدا دورة مياه الشرب.

وهناك العديد من الاختلافات للشرب الوصول المحدود. على سبيل المثال، في نموذج access متقطعة، الفئران تلقي اثنان زجاجات (المياه التي تحتوي على واحد والايثانول الأخرى التي تحتوي على 20% (v/v)) إلا في يوم الاثنين والأربعاء والجمعة مع فترة انسحاب ح 24 و 48 ساعة خلال أيام الأسبوع وعطلات نهاية الأسبوع، على التوالي¹⁶. بعد عدة أسابيع من الوصول المتقطع، الفئران تدريجيا وتصعيد طوعا شرب مستويات، في نهاية المطاف تحقيق بيكس مشابهة لما يلاحظ في طراز فعلت. ومع ذلك، فعلت، يبدو أن النموذج الأكثر شيوعاً لتقييم سلوك نهم مثل مياه الشرب. توجد نماذج أخرى للشرب متقطعة، لكنها تعتمد على تقييد إمكانية الوصول إلى الغذاء أو بخار الدائرة الناجمة عن الزيادات في الإدارة الذاتية الطوعية، مما يجعلها أقل تمثيلاً ل استهلاك الكحول البشرية الطوعية¹⁶.

Protocol

عليها جميع الإجراءات الموضحة هنا برعاية الحيوان المؤسسية واللجان استخدام الحرم الجامعي العلوم الصحية جامعة جنوب كاليفورنيا.

1-الإعداد التجريبية والجمعية

1. الحصول على جميع المواد الكيميائية قبل بدء الدراسة واللوازم التالية: الفئران، قمم القفص أقفاص/المعادن، الفراش، الغذاء، المياه، الإيثانول، بيبيتس، وقمم سيبر، يتقلص التفاف، فائدة سكين، العلاقات الرمز البريدي، الشريط، موقد بنسن، والحجم، وكشافات.
2. الحصول على فئران C57BL/6J، أما من مصدر تجاري أو مستعمرة داخل المنظمة، مع الأخذ في الاعتبار أن الفئران يمكن أن الفريق يضم حتى وقت الاختبار.
   ملاحظة: العدد الكلي للفئران التي تم شراؤها يعتمد على تعقيد التصميم التجريبي. خطة لاستيعاب ما يقرب من 12-15 الفئران كل مجموعة، مع دراسات رائدة لا أصغر من 5-7 الفئران كل مجموعة. أننا استخدمت في النتائج الممثل هو موضح أدناه إنشاء مجموعة اثنين بسيطة لتقييم العلاقة السببية باستخدام جرعة واحدة (5 مغ/كغ) من المخدرات (MOX).
3. اتبع الخطوات التالية لتجميع الزجاجات¹⁸.
   1. الحرارة بسكين فائدة استخدام موقد بنسن.
   2. باستخدام هذا السكين، قطع تقريبا شبر قبالة نهايات بيبيت المصلية البلاستيك 18 مل أعلى وأسفل.
      1. لاحظ أن بيبيتس حجم أصغر (أي، 10 مل) يمكن أن يستخدم أيضا لزيادة دقة القياس.
   3. الحارة بيبيت تحت بندقية حرارة.
   4. إدراج أنبوب سيبر واضعا الكرة في نهاية "أسفل" بيبيت (وبعبارة أخرى، فتح الأقرب إلى السطر داش مل 18).
   5. ختم الأنبوب سيبر في المكان مع تقليص التفاف استخدام بندقية التفاف انكمش متاحة تجارياً.
   6. فتح غطاء قبالة الأخرى مع سداده سيليكون.

2-الحيوان التعود

1. ابتداء من 1 أسبوع على الأقل قبل تاريخ بدء التجربة، نقل الفئران إلى الغرفة التي توجد فيها إجراءات تجريبية تنفذ حتى أن كانوا قد تأقلم على ظروف تربية (بما في ذلك درجة الحرارة المحيطة (21 ± 1 درجة مئوية) و 12-ح عكس اتجاه دورة الضوء/الظلام، مع أضواء إيقاف الساعة 12:00 م). تأكد من اتباع مبادئ توجيهية مؤسسية وإخطار القنوات المناسبة قبل نقل الحيوانات من مكان إلى آخر.
   1. إذا كان يجري نقل الفئران من دائرة الضوء/الظلام قياسية تسمح 2 أسابيع وقت الإضافي التعود.
2. ملء الزجاجات حديثا أدلى مملوءة بالمياه. تأكد من أن يتم إغلاق الغطاء بطريقة آمنة وخالية من أي فقاعات الهواء أو تسرب من صنبور. إذا كان الحل هو تسرب، إعادة تأمين الحد الأقصى. قم بإزالة أي فقاعات الهواء ببساطة التنصت على الزجاجة حتى يفلت الهواء في الأنبوب.
3. ولدى وصوله، بيت واحد كل الماوس في أقفاص القياسية البولي/بوليسولفوني مع الأسرة وأعلى قفص شبكة معدنية؛ قم بإزالة غطاء القفص كما لم يعد يتم استخدامه.
   1. توفير إمكانية الوصول إلى الغذاء و water bottle(s) libitum الإعلانية.
   2. تأمين كل زجاجة إلى أعلى القفص بالتفاف تعادل الرمز بريدي بلاستيك حول كل زجاجة أنه عقد في مكان. تقليم أي البلاستيكية الزائدة من التعادل الرمز البريدي التأكد من أن أنها لا تبرز في القفص.
      ملاحظة: للشرب في الإجراء (DID) الظلام، مطلوب زجاجة واحدة فقط من المياه. ومع ذلك، يتطلب التعود على نموذج الاختيار (TBC) زجاجة اثنين، أن تشمل إنشاء قفص زجاجتين من المياه. إذا تم تصميم هوبر الشبكة المعدنية التي قدمت لعقد زجاجة واحدة فقط من الحل، ينحني بلطف وبصرف النظر عن أشرطة لإنشاء مساحة لصفيحة إضافية لاستيعاب الزجاجة الثانية للدرن.
4. إعداد على الأقل 3 أقفاص الحرة التحكم الماوس. وهذا سيسمح لرصد أي خسارة السوائل بسبب التبخر أو انسكاب من الزجاجات، الذي هو مجرد تواجد طبيعي الذي يحدث كما توضع الأقفاص وإيقاف حامل قفص (راجع الخطوة رقم 2.6.3 و 3.6.1 و 4.6.1 للمعادلات).
5. اعتبارا من يوم 4 التأقلم الإسكان مدتها أسبوع واحد، قياس وتسجيل أوزان كل الماوس، استخدام مقياس، (بالغرام) فضلا عن كمية المياه، استخدام محفورة جنبا إلى جنب مع زجاجة المقلوب لتسجيل أعلى نقطة في الجسم والغذاء اليومي غضروف (في مل).
   1. في حين أنها معيار الممارسة العلمية لقراءة أدنى نقطة من غضروف مقعرة، لأن الزجاجات البقاء في وضع مقلوب أثناء أخذ القياس، سجل أعلى نقطة غضروف.
6. تقييم معلمات 2.5 استخدام المعادلات التالية:
   1. قياس "تغير وزن الجسم" (ز): الوزن لليوم الحالي (ز)-وزن (ز) في اليوم السابق.
   2. قياس "المدخول الغذائي" (ز): وزن الغذاء في اليوم السابق (ز)-وزن الغذاء في اليوم الحالي (ز).
   3. قياس "كمية المياه" (مل): فقدان الماء متوسط [حجم المياه في اليوم الحالي (mL)-حجم المياه في اليوم السابق (mL)]-من كل عنصر تحكم أقفاص (mL).
7. كرر الخطوة 2.5 تباعا، في أيام 5-7، للسماح لتحديد خط الأساس لمدة الثلاثة أيام مباشرة قبل إدخال الإيثانول. إذا كان لا يمكن تجميع تسجيل على التوالي، تمديد فترة التأقلم للسماح بتقييم قياسات أساسية.
8. مرة واحدة قد استقرت كمية المياه إلى تقلب ± 10% من متوسط آخر 3 أيام، تبدأ الوصول الإيثانول بالدرن (وصول غير محدود) أو فعلت (وصول محدود).
   ملاحظة: في مناسبة نادرة، واحد إلى اثنين أيام إضافية قد يلزم للمواضيع تحقيق هذا الاستقرار؛ لا تندهش إذا كان يلزم وقت إضافي للقيم المراد عرضها تقلب ± 10% من متوسط آخر 3 أيام.

3-24 ساعة اثنين زجاجة خيار (الدرن)

ملاحظة: أعد 1 الشكلتخطيطي.

1. تعد حلاً إيثانول 10% (v/v) في حجم 500 مل بإضافة مل 52.65 190 الحبوب دليل على الإيثانول (الإيثانول ~ 95 ٪) إلى 447.35 مل ح₂س؛ يجب التأكد من أن يهز جيدا. ونظرا لأن الإيثانول تتبخر بسرعة، يحل محل الحل في الفاصل الزمني لكل يوم 3-4.
   ملاحظة: يمكن استخدام تجمعات أخرى من الإيثانول، وكذلك، ولكن يوصي المؤلفون بتركيز 10% لهذا النموذج.
2. اليوم الأول من الدرن، (يوم 8 في أقرب وقت ممكن) فارغة 1 من 2 زجاجات المياه، في كل قفص، وملء حتى أسنانها مع الحل الإيثانول الطازجة. نظراً لأن الإيثانول والمياه صعبة ينبغي تمييز بصريا، وضوح تسمية الزجاجات مع محتوياتها المقابلة. ببساطة تطبيق قطعة من إخفاء الشريط إلى الزجاجة وواصفا إياه بأنه علامة أو بالكتابة مباشرة على الزجاجة.
3. إضافة أكثر من حل لزجاجة الماء، حسب الحاجة.
4. ضع الزجاجات مرة أخرى في القفص، التأكد من أن يتم إغلاق كافة caps بشكل أمن وخال من أي فقاعات الهواء أو تسرب من صنبور. إذا كان الحل هو تسرب، إعادة تأمين الحد الأقصى. قم بإزالة أي فقاعات الهواء ببساطة التنصت على الزجاجة حتى يفلت الهواء الزجاجة.
5. البديل موقف زجاجات يوميا للصحيح لتفضيل المكان مكيفة ذات الصلة التأثيرات في الشرب النشاط (انظر مناقشة لمزيد من المعلومات).
6. بالإضافة إلى القياسات اليومية من 2.5 و 2.6، والتي ظلت مستمرة، تبدأ في قراءة وتسجيل مستويات استهلاك الإيثانول كذلك. تحليل نسبة 10% إيثانول المدخول وتفضيل استخدام المعادلات التالية:
   1. قياس 10% "استهلاك الإيثانول" (مل): [وحدة التخزين من الإيثانول في اليوم الحالي (mL)--وحدة التخزين من الإيثانول في اليوم السابق (mL))]-متوسط الخسارة الإيثانول من كل عنصر تحكم أقفاص (mL).
   2. قياس 10% "استهلاك الإيثانول" (غرام/كغ): [10% إيثانول المدخول (mL) × 0.07893 غ/مل]/الجسم الوزن (كجم).
   3. قياس % التفضيل: [10% استهلاك الإيثانول (mL) المياه (mL)] x 100.
7. بمجرد استهلاك الإيثانول أصبح مستقرا، إدارة حقنه (مالحة) داخل (القائمة) تحكم واحد (0.01 مل/غرام وزن الجسم) لكل الماوس أثناء القياس الروتين اليومي. وبهذه الطريقة، مواضيع أصبحت معتادة لحقن نفسه.
   1. يتم تعريف الاستقرار كتقلب ± 10% من متوسط آخر 3 أيام (نفس القسم 2.8).
      ملاحظة: يمكن أن يستغرق يصل إلى 1 الأسبوع لمستويات الإيثانول لتحقيق الاستقرار. وهذا ينطبق بشكل خاص إذا الفئران تستخدم إعادة من تجربة سابقة، وكان التعرض السابق إلى الإيثانول. عنصر التحكم هو ببساطة المذيبات المستخدمة لحل المخدرات.
8. مرة واحدة بخط أساس إيثانول مع تقلب منخفض إعادة تأسيس، تقسيم الفئران إلى الجرعات مجموعات باستخدام قيم كمية الإيثانول حيث يكون جميع فئات مماثلة تقريبا متوسط قيم كمية الإيثانول.
   1. تعيين مجموعة واحدة كعنصر التحكم (الاستمرار في تلقي المالحة) والآخر التجريبية (القائمة حقن المخدرات التحقيق في 0.01 مل/غرام وزن الجسم). تبدأ المخدرات يوميا الجرعات، أما لمدة الحادة أو عدة أيام. في وقت لاحق، يمكن أن يكون عنصر التحكم إعادة عرض لاختبار آثار المخدرات بعد (اختياري).
      ملاحظة: نظراً للشرب ويتم رصد عبر فترة طويلة 24-ح، وقت الإدارة الجرعة لا تعتمد على دورة الظلام.

4-الشرب في الظلام (فعلت)

ملاحظة: أعد 3 الشكلتخطيطي.

1. في كل يوم للوصول إلى الإيثانول المجدولة (الأيام 1-4) تسجيل القياسات، لتخزين المياه، وتناول الطعام، ووزن الجسم، وتؤدي الجرعات المخدرات. القيام بذلك خلال وقت المختارة خلال دورة الخفيفة التي يتم اختيارها وفقا الدوائية للمخدرات حيث يكون المجمع في/أو تقترب من تركيز المخ كحد أقصى خلال فترة مياه الشرب.
   ملاحظة: تذكر الأيام 1-3 تهدف إلى مجرد تأقلم الفئران للشرب مستويات وفيرة من الإيثانول في فترة قصيرة من الزمن. في حين أن الفئران لا تصل إلى مستويات تيرو مماثلة إلى 0.08 البشرية؛ في هذه الأيام "التدريب" ضمان أن يوم 4، خلال الدورة فترة أطول قليلاً من مياه الشرب، وسيكون في الواقع شرب إلى هذا المستوى.
   1. إعطاء عنصر التحكم (المالحة) في الأيام 1-3، وأما من عنصر التحكم أو المخدرات جميع الفئران في يوم 4. يحدث هذا الإجراء فعلت على مدى فترة ثلاثة أسابيع مخدرات قبل (الأسبوع الأول)، وتشمل المخدرات (الأسبوع الثاني) ودورة مياه الشرب بعد المخدرات (الأسبوع 4).
   2. ملاحظة: لاحظ أنه خلال الأسبوع الذي يجرب المخدرات، وتستخدم مستويات استهلاك الإيثانول يوم 3 تعيين الفئران أما مجموعة عنصر التحكم أو المخدرات بطريقة يكون فيها مستويات استهلاك الإيثانول من كلا الفريقين لتباين أقل. وهذا خلافا للدرن، الذي يقوم بتعيين مجموعات على أساس متوسط 3 أيام على.
2. تعد حلاً إيثانول 20% (v/v) (20E) في حجم 500 مل بإضافة مل 105.25 من 190 الحبوب دليل على الإيثانول (الإيثانول ~ 95 ٪) إلى 394.75 مل ح₂س؛ يجب التأكد من أن يهز جيدا.
3. تعبئة الزجاجات الإيثانول قبل بدء دورة مياه الشرب حيث أنه بمجرد أن يبدأ فعلت زجاجات المياه يمكن ببساطة الاستعاضة عن زجاجات الكحول.
4. أثناء الدورة فعلت أسرة (الخطوات 4، 4، 5-8)، استخدام كشافات الضوء الأحمر حيث لا تزعج الحيوانات.
5. في بداية فعلت شرب الدورة، ومن المقرر أن تبدأ 3 ساعات في دوامة الظلام، سجل حجم المياه لكل الماوس. ثم، استبدال كل زجاجة مياه بزجاجة من الحل 20E وسجل حجم الإيثانول ابتداء.
6. قراءة وتسجيل حجم الإيثانول النهائية 2 ساعة في وقت لاحق، في نهاية دورة مياه الشرب في أيام 1-3 و 4 ساعات في وقت لاحق في اليوم 4. تحليل استهلاك الإيثانول 20 ٪ باستخدام المعادلات التالية.
   1. قياس 20% "استهلاك الإيثانول" (مل): [وحدة التخزين من الإيثانول في نهاية الدورة (mL)--وحدة التخزين من الإيثانول في بداية الدورة (mL) شرب شرب]-الإيثانول متوسط الخسارة من كل عنصر تحكم أقفاص (mL).
   2. قياس 20% "استهلاك الإيثانول" (غرام/كغ): [20% "استهلاك الإيثانول" (mL) × 0.15786 غ/مل]/الجسم الوزن (كجم).
7. في يوم 4 فقط، مباشرة بعد تسجيل كميات الإيثانول، وقبل إعادة إدخال الوصول إلى المياه، جمع الدم لتقييم تركيز الإيثانول الدم من كل الماوس (اختياري).
   ملاحظة: أي أسلوب جمع الدم غير الطرفية يمكن استخدام، مثل التهاب الجيوب الرجعية-المداري جمع الدم، أو جمع الدم الوريد الصافن. لبروتوكولات مفيدة راجع مراجع ل Parasuraman et al. ²¹ وياردلي et al. ²⁰.
   1. إجراء تحليل باستخدام أساليب مختلفة بما في ذلك لكمس، أو الآلية المتاحة تجارياً (انظر الجدول للمواد).
8. استبدال جميع الإيثانول الزجاجات بزجاجات المياه وكمية المياه سجل.

النتائج

في التحقيقات التالية الممثل، شرب الاجتماعية كان على غرار استخدام نموذج اختيار اثنين--زجاجة (الدرن). باختصار، كان الفئران الوصول إلى زجاجتين من الحل، الواردة منها المياه، والآخر حل إيثانول 10% (v/v). تم بعد ذلك تقسيم المواضيع والمعينة بالتساوي إلى جماعات المخدرات العلاج، موك...

Discussion

في جميع أنحاء العالم تشير التقديرات إلى أن ما يصل إلى 76 مليون شخص تفي بمعايير تبرر إجراء تشخيص لاضطرابات استخدام الكحول (أسترالي). ولسوء الحظ، العلاجات الدوائية المتوفرة حاليا غير فعالة إلى حد كبير وزيادة تطوير ضروري لمقابلة احتياجات هذا السكان السريرية²⁰. وتحقيقا لهذه الغاية...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 L  graduated cylinder	VWR	https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co	To prepare ethanol solution.
1 L glass bottle	Pyrex (Fisher Scientific)	https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752	To prepare ethanol solution.
100 mL graduated cylinder	Fisher Scientific	https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311	To prepare ethanol solution.
Analox			One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine
ball-bearing sipper tubes	Ancare Corp.	http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point	Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100
C57BL/6J Mice	Jackson lab	https://www.jax.org/strain/000664	May also come from internal breeding colony
disposable serological pipets	VWR International (VWR)	https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged	10 mL, 18 mL, or 25 mL
ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC	Decon Labs (VWR)	https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec	---
heat gun	Master Appliances Corp.	http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/
heat shrink tubing	---	---	Diameter: 3/8 inches
industrial knife/blade	---	---	---
metal cage plate	---	---	Should be available through the university/institutional vivarium
mouse RO water	---	---	Should be available through the university/institutional vivarium
portable electronic scale	Ohaus (VWR)	https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus	---
red light headlamp	nyteBright (Amazon)	https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&qid=1499591137&sr=8-1-spons&keywords=red+lamp+headlamp&psc=1	---
silicone stoppers	Fisher	---	---
thermometer	Fisher Scientific	https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232	---
weigh boat	VWR International (VWR)	https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes	The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative