JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نقدم هنا بروتوكولا للتلاعب بالجينات الخاصة بالقلب في الفئران. تحت التخدير، تم تجسيدها في قلوب الماوس عبر الفضاء ربية الرابعة. وفي وقت لاحق، غدية تم حقن جينات محددة الترميز مع حقنه في عضلة القلب، تليها قياس التعبير البروتين عن طريق التصوير في فيفو والغربية لطخة تحليل.

Abstract

إلى حد كبير تحفيز التلاعب بالجينات على وجه التحديد في القلب التحقيق باثوميتشانيسمس أمراض القلب وإمكاناتها العلاجية. ويتحقق في فيفو إيصال الجينات الخاصة بالقلب عادة بالتسليم أما منهجية أو المحلية. حقن الجهازية عن طريق الوريد الذيل سهل وفعال في معالجة التعبير الجيني القلب باستخدام الفيروسات المرتبطة بالغدة المؤتلف 9 (AAV9). بيد أن هذا الأسلوب يتطلب كمية عالية نسبيا من ناقلات لكفاءة توصيل، وقد ينتج عن توصيل الجهاز nontarget الجينات. وهنا يصف لنا طريقة بسيطة وفعالة، وتوفير الوقت لحقن إينتراميوكارديال في فيفو التلاعب بالجينات الخاصة بالقلب في الفئران. تحت التخدير (بدون تهوية)، تم تشريح العضلات الرئيسية والثانوية صدري صراحة، وتعرضت قلب الماوس بسرعة بتخريج اليدوي من خلال شق صغير في الفضاء ربية الرابعة. وفي وقت لاحق، تم حقن إتش ترميز لوسيفراس (لوك) ومستقبلات فيتامين (د) (لزاما)، أو دبوس الشعر القصير الحمض النووي الريبي (شرنا) استهداف لزاما، مع حقنه هاملتون في عضلة القلب. اللاحقة في فيفو تصوير أثبتت أن لوسيفراس كان أوفيريكسبريسيد بنجاح على وجه التحديد في القلب. وعلاوة على ذلك، أكد تحليل لطخة غربية overexpression ناجحة أو إسكات لزاما في قلب الماوس. متى يتقن، يمكن استخدام هذا الأسلوب للتلاعب بالجينات، فضلا عن حقن الخلايا أو مواد أخرى مثل نانوجيلس في قلب الماوس.

Introduction

أمراض القلب هي السبب الرئيسي للاعتلال والوفيات في جميع أنحاء العالم1،2. عدم وجود استراتيجيات علاجية فعالة لأمراض القلب تهدد الحياة بما في ذلك احتشاء عضلة القلب وفشل القلب يجذب استكشاف مكثفة من باثوميتشانيسمس الأساسية، وتحديد الخيارات العلاجية رواية3. لهذه الاستكشافات العلمية، هو التلاعب بالجينات الخاصة بالقلب المستخدمة على نطاق واسع4،5. التلاعب بالجينات القلب يمكن أن يتحقق عن طريق تحرير الجينوم باستخدام نوكلاس المستجيب مثل المنشط النسخ قوية (TALEN) وتجمع بانتظام إينتيرسباسيد يكرر المتناوب قصيرة (كريسبر)/كريسبر المرتبطة البروتين 9 (Cas9) الأدوات، أو عن طريق تسليم المواد الوراثية خارج الرحم (مثلاً، نواقل فيروس يحمل جينات ترميز البروتينات للفائدة)6. على الرغم من تحرير الجينوم تسمح التعديلات الجينوم الدقيقة والزمانية المكانية في الفئران الحية، إلا أنها لا تزال الناحية العملية تستغرق وقتاً طويلاً وتتطلب عمالة مكثفة6. وبدلاً من ذلك، إجراء معالجة الجينات الخاصة بالقلب بناقل الفيروس أو التدخل الصغيرة تسليم مجمع الجيش الملكي النيبالي (siRNA) يتم بصورة روتينية6.

ويتحقق تسليم ناقل الفيروس إلى قلب الماوس الكبار باستراتيجيتين تقريبا: حقن النظمية أو المحلية. حقن النظمية للنمط المصلي المسيطر كارديوتروبيك من آفس مثل AAV9 موسع ل التلاعب بالجينات محددة القلب7. ومع ذلك، هذا الأسلوب يتطلب كمية عالية نسبيا من ناقلات اللازمة لتوصيل تتسم بالكفاءة، والتعبير الجيني، وقد يؤدي مهمة توصيل أجهزة nontarget مثل العضلات و الكبد7. حقن الفيروسات المحلي يتحقق عن طريق الحقن إينتراميوكارديال أو الولادة إينتراكوروناري7. تسليم إينتراكوروناري يؤدي إلى توزيع أكثر توازناً للفيروس داخل القلب مقارنة بحقن إينتراميوكارديال. عيوب هذا الأسلوب غير الغسيل السريع خارجاً من النواقل الفيروسية إلى الدوران الجهازي وتوصيل في أجهزة nontarget8, ومتطلباتها من الأجهزة لقياس الضغط أثناء العملية. في المقابل، تمكن حقن إينتراميوكارديال أفضل الاحتفاظ بالفيروس في عضلة القلب فضلا عن تسليم موقع معين، ولكن فشل لتوزيعها بالتساوي الفيروسية ناقلات7. للحيوانات الصغيرة، يتم تسليم إينتراكوروناري صعبة من الناحية الفنية لإجراء، بينما الجهازية AAV9 حقن وحقن إينتراميوكارديال هي أكثر شيوعاً تمارس4،،من57. على الرغم من أن حقن النظامية من السهل القيام، يتطلب التهوية الميكانيكية و thoracotomy حقن إينتراميوكارديال التقليدية يسبب تلف الأنسجة واسعة النطاق، وتستغرق وقتاً طويلاً.

وفي هذا التقرير، وصفت لنا طريقة سهلة، وتوفير الوقت، وذات كفاءة عالية لحقن إينتراميوكارديال. تم حقن إتش ترميز لوسيفراس ولزاما، أو شرنا استهداف لزاما، للتلاعب بالجينات القلب. متى يتقن، يمكن استخدام هذا الأسلوب للتلاعب بالجينات، فضلا عن حقن الخلايا أو غيرها من المواد في قلب الماوس.

Protocol

جميع التجارب على الحيوانات نفذت وفقا للمبادئ "التوجيهية الوطنية للمعاهد الصحية" على "استخدام الحيوانات المختبرية"، وقد وافقت "لجنة الأخلاقيات الحيوان" للمعهد. واستخدمت لجميع التجارب الفئران الذكور C57BL/6J (الذين تتراوح أعمارهم بين 8-10 أسابيع). تم إيواء الفئران تحت ظروف خالية من العوامل الممرضة في 24 درجة مئوية ± 4 درجة مئوية، وتحت 12-ح دورة الضوء/الظلام، مع حرية الوصول إلى المياه والغذاء.

1-إعداد حل إتش

  1. عند الوصول للحل إتش المنقي، تخزين الحل في ثلاجة-80 درجة مئوية.
    ملاحظة: أجريت حقن إتش في الفئران قادرة على البقاء. أن تكفل العقم ناقل إتش إتش (لوسيفراس الترميز أو لزاما شرنا استهداف لزاما) أعدت وتنقية تجارياً9،10.
  2. في يوم العملية، إخراج الحل إتش المنقي (3 × 1010 البلاك تشكيل وحدات [بفو]/mL) من الثلاجة-80 درجة مئوية، وذوبان الجليد إتش ناقلات الحل على الجليد.
  3. وضع على فاسيماسك وقفازات معقمة والعقيمة بثوب.
  4. إعداد 50-ميليلتر حقنه هاملتون الذي قد تم تعقيمها قبل العملية اليوم.
    ملاحظة: كان للتعقيم، والمحاقن هاملتون ملفوفة في شاش ووضعها في معقم ضغط ارتفاع درجة حرارة/عالية. تم اختيار طريقة "التعقيم الصلبة" وبدأ بالتعقيم بالضغط على زر "ابدأ".
  5. بعد ذوبان الجليد كاملة من الحل إتش المنقي، رش الأنبوبة التي تحتوي على الحل إتش مع الإيثانول 75%، ونقل الحل إتش إلى غطاء معقم الاندفاق الصفحي.
  6. في غطاء معقم الاندفاق الصفحي، نضح 50 ميليلتر إتش الحل باستخدام المحاقن هاملتون دون إبرة، تليها مرفق إبرة ز 30 للمحاقن هاملتون.
  7. عقد المحاقن مع 30 جرام الإبرة إلى الأعلى، ودفع المكبس للمحاقن بلطف حتى يتم شغل الإبرة مع الحل إتش (مؤكدة بظهور قطرات الحل الأول من طرف الإبرة).
    ملاحظة: يستغرق حوالي 45 ميليلتر حل لشغل الإبرة 30 غرام، حتى الآن تقريبا لا يوجد حل غير مرئية في المحاقن.
  8. استخدام المحاقن استعداد أعلاه لنضح آخر 30 ميليلتر إتش الحل بعناية، ووضع المحاقن توج فضفاضة على الجليد للاستخدام اللاحق.

2-التخدير وإعداد المنطوق

  1. إضافة 20 مل إيسوفلوراني إلى المبخر isoflurane، والاتصال المرذاذ isoflurane دبابة الأوكسجين.
  2. فتح الصمام والأكسجين واسمحوا تدفق من خزان الأوكسجين إلى المبخر إيسوفلوراني. الحفاظ على معدل تدفق الأكسجين في 2 لتر في الدقيقة عن طريق جهاز تدفق أكسجين في المبخر إيسوفلوراني.
  3. حمل التخدير الماوس مع إيسوفلوراني 4 ٪ في الأكسجين 100% (2 لتر في الدقيقة) لمدة 2 دقيقة في قفص بلاستيكية متصلة المبخر إيسوفلوراني.
  4. تأخذ بها الماوس أنيسثيتيزيد من القفص البلاستيك، وتأمينه على منصة بلاستيكية في موقف المعرضة في غطاء معقم الاندفاق الصفحي والمحافظة على التخدير مع إيسوفلوراني 2% في الأكسجين 100% (2 لتر في الدقيقة) عن طريق مخروط الآنف.
  5. تأكيد التخدير الكافي بسبب عدم استجابة قرصه أخمص القدمين.
  6. تطبيق كريم العيون العقيمة لكل عين لحماية القرنيات من التجفيف.
  7. يحلق في الصدر والجزء العلوي من البطن. تطبيق كريم مزيل الشعر المتاحة تجارياً إلى موقع حلق لإزالة الحد الأدنى 1 كريم مزيل الشعر وتبقى الفراء مع جاوزيس الرطب.
  8. تعقيم موقع الجراحية (الجزء السفلي الأيسر من الصدر) مع دعك 3 من اليود-الكلورهيكسيدين أساس مطهر (مثل انتويوديني). تغطية الموقع الجراحي مع ثني عقيمة.

3-إينتراميوكارديال حقن إتش في قلب الماوس

  1. خلع القفازات ووضع على زوج جديد من القفازات المعقمة.
  2. تعقيم الملقط، هيموستات الصغرى-البعوض، وزوج من مقص الجراحة، وحامل إبرة في اليوم السابق للعملية في ارتفاع درجة الحرارة/عالية الضغط المطهر (انظر الملاحظة الخطوة 1، 4).
  3. جعل شق جلد 0.5 سم على طول الخط الذي يربط بين الرهابه والإبطين. صراحة تشريح الصدرية الرئيسية والعضلات طفيفة صدري بالملقط وهيموستات الصغرى-البعوض.
  4. كشف المساحات ربية بتراجعه الصدرية الرئيسية والعضلات طفيفة صدري. بيرس من خلال وفتح الفضاء ربية الرابعة (أو الفضاء ربية أوسع بالمراقبة) مع هيموستات الصغرى-البعوض.
  5. دفع القلب اتجاه الشق تخريج القلب بسبابة اليد غير المهيمنة بالضغط بلطف على الجانب الأيمن من جدار الصدر.
  6. تأمين بلطف قلب الخارجية مع السبابة والإبهام من اليد غير المهيمنة.
  7. ضخ ما مجموعة 30 ميليلتر إتش الحل في عضلة القلب البطين الأيسر في ثلاثة مواقع (الجدار البطني والظهريه والجانبي من البطين الأيسر) عن طريق حقنه هاملتون مليئة إتش (الشكل 1) مع اليد المسيطرة.
  8. بعد انتهاء حقن، فورا مكان القلب العودة إلى الحيز الوعائي.
  9. إخلاء الهواء في الحيز الوعائي يدوياً عن طريق الضغط بلطف على جدار الصدر تجاه موقع شق الجلد.
    ملاحظة: يمكن أن يدل الإجلاء الجوي الناجحة التي ترفرف الصدرية الكبرى وصدري العضلات الثانوية الناجمة عن الهواء المطرود.
  10. إغلاق الجلد بخياطة مفرش الأفقي مع خياطة حرير 5-0.
    ملاحظة: الصدرية الكبرى وصدري عضلات بسيطة ينبغي أن لا تكون خياطة، نظراً لأنها هي فقط صراحة تشريح وهياكلها تشريحية سليمة طوال العملية.

4-بعد عملية إدارة

  1. إدارة البوبرينورفين (3 مغ/كغ) مرتين يوميا عن طريق الحقن تحت الجلد لتخفيف الألم بعد العمليات الجراحية عن 48 ساعة الأولى بعد العملية11.
  2. بعد العملية مباشرة الحفاظ على الفئران على لوحة حرارة (37 درجة مئوية) حتى شُفي تماما. ضع الماوس مرة أخرى إلى القفص بعد أن يتعافى تماما.
  3. تعقيم تستخدم هاملتون حقنه وابرة حقنه ز 30 في معقم ضغط ارتفاع درجة حرارة/عالية (انظر الملاحظة الخطوة 1، 4). جمع ز 30 حقنه إبرة معقمة في حاوية الأدوات الحادة.

5. في فيفو تصوير لقياس التعبير لوسيفراس القلب

  1. في يوم 5 بعد حقن إتش، تعد حلاً أسهم جديدة من لوسيفرين في 15 ملغ/مل في الفوسفات مخزنة المالحة دولبيكو (دببس). تصفية الحل عن طريق فلتر 0.2 ميكرون.
  2. داخل بيريتونيلي حقن الفئران مستيقظا مع الحل لوسيفرين في 150 مغ/كغ من وزن الجسم.
  3. قم بتشغيل نظام التصوير.
  4. بعد الاختبار الذاتي لنظام التصوير التلقائي، حدد وضع التصوير ك "الإنارة"، وجعل الإعدادات التالية: التعرض: السيارات؛ Binning: 8؛ FStop: 1؛ الإثارة: الكتلة؛ الانبعاثات: مفتوحة.
  5. في 10 دقيقة بعد حقن لوسيفرين، تخدير الفئران بحقن كلورال هيدرات (300 ملغ/كغ من وزن الجسم). تأكيد التخدير الكافي بسبب عدم استجابة قرصه أخمص القدمين.
  6. تأمين الفئران أنيسثيتيزيد في مرحلة تصوير ساخنة في الموقف الذي عرضه، مع الصدر موجهة نحو الكاميرا.
  7. جمع الصور (صورة 1 لكل الماوس) وقياس كثافة الإشارات عن طريق رسم المناطق قياس دائرية متطابقة للفائدة (ROI) حول الصدر.
  8. بعد مجموعة الصور والتضحية الفئران وجمع الأنسجة كما هو مذكور في المقطع التالي.

6-حصاد الأنسجة

  1. في نقاط زمنية مختلفة بعد حقن الفيروس (الشكل 1B)، تخدير الفئران مع إيسوفلوراني 4 ٪، والحفاظ على التخدير مع إيسوفلوراني 2% عن طريق مخروط الآنف، وتأمينه على منصة بلاستيكية في موقف المعرضة.
  2. تجعل من شق البطني خط الوسط في الرقبة الأمامية. كشف الشريان السباتي المشترك الحق بسحب العضلات أوموهيويد والترقويه.
  3. التضحية الفئران ترانسيكتينج الشريان السباتي المشترك الحق وتذكية.
  4. تجعل من شق البطني خط الوسط في البطن. قطع الأضلاع من كلا الجانبين من القفص الصدري على طول الخط الكتفي، وقطاع الحجاب الحاجز.
  5. كشف القلب عن طريق رفع في الرهابه. العثور على الشريان الاورطي تصاعدي وإزالة الأنسجة الدهنية ارتشاح بلطف.
  6. كانولاتي الشريان الاورطي ونتخلل القلب ريتروجراديلي بإبرة ز 30 يعلق على 1 مل حقنه مليئة 0.5 مل من 4 درجات مئوية الفوسفات المخزن المؤقت الحل (PBS).
  7. بعد نضح، المكوس في القلب، وتقسم إلى البطينين الأيسر والأيمن. المكوس في الكبد والرئة والطحال.
  8. بعد يغسل اثنين في برنامج تلفزيوني الباردة (4 درجة مئوية)، تخزين كل الأنسجة التي تم جمعها بشكل منفصل في قنينات المبردة في نيتروجين سائل.

7-تحديد التعبير البروتين

  1. يعد التجانس المخزن المؤقت عن طريق إضافة كوكتيل مثبط البروتياز في المخزن المؤقت لتحلل متوفرة تجارياً بنسبة 1: 100. حساب الحجم الإجمالي استناداً إلى عدد العينات بحيث تتم معالجتها. الحفاظ على التجانس إعداد المخزن المؤقت عند 4 درجة مئوية للاستخدام اللاحق.
  2. إخراج الأنسجة من خزان النتروجين السائل. وزن الأنسجة على مقاييس عالية الدقة (حوالي 60 ملغ لكل قطعة من الأنسجة).
  3. نقل الأنسجة إلى أنبوب 1.5 مل ميكروسينتريفوجي جديدة. فور إضافة 200 ميليلتر التجانس المخزن المؤقت وكرات الصلب بريكوليد 1.5 ملم (4 درجة مئوية) في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
  4. تأمين أنابيب ميكروسينتريفوجي في بريكوليد (4 درجات مئوية) أصحاب المعادن في أنسجة تلقائي آلة طحن، وتبدأ التجانس قبل بدء تشغيل الجهاز بالإعدادات التالية: التردد: هرتز 70؛ الوقت: 120 ثانية.
  5. بعد التجانس، الطرد المركزي هوموجيناتي (16,000 ز ×، 4 درجة مئوية)، ونقل المادة طافية بعناية إلى أنبوب 1.5 مل جديدة مع ماصة 100 ميليلتر.
  6. أضف تحميل المخزن المؤقت الحل (5 س) للبروتين طافية بنسبة 1:4، وتجريدها من البروتين في 100 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
  7. مستويات البروتين التعبير في القلب والأنسجة الجهاز الأخرى تخضع لمواصلة تحليل لطخة غربية (الممثل وترد النتائج في الشكل 2 و الشكل 3) وفقا للبروتوكول تم وصفه سابقا12.

النتائج

بروتوكول التجربة وبعض الخطوات الرئيسية لأسلوب الإبلاغ عنها يرد في الشكل 1. في 5 أيام بعد الحقن إينتراميوكارديال من إتش لوسيفراس الترميز (ادف لوك)، في فيفو التصوير في لوك ادف حقن الفئران أوضحت قوية overexpression من لوسيفراس على وجه التحديد في القلب (

Discussion

هذا التقرير يوضح تقنية معدلة لحقن إينتراميوكارديال من النواقل الفيروسية للتلاعب بالجينات القلب، الذي عدل من أسلوب لتحريض احتشاء عضلة القلب بغاو et al. 13 حاليا، في فيفو توصيف لوظائف الجينات محددة في أغلب الأحيان تنطوي على توليد خروج المغلوب أو الفئران المعدلة وراثيا

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

هذا العمل كان يدعمها "الصندوق الوطني للعلوم" للعلماء الشبان البارزين (81625002)، الوطنية الطبيعية مؤسسة العلوم الصينية (81470389، 81270282، 81601238)، البرنامج من شانغهاي أكاديمية بحوث الزعيم (18XD1402400)، وبلدية شانغهاي التعليم اللجنة جوفينج الطب السريري منحة الدعم (20152209)، مركز تطوير مستشفى في شانغهاي شينكانج (16CR3034A)، جامعة شانغهاي جياو تونغ (YG2013MS42)، شانغهاي جياو تونغ جامعة مدرسة الطب (15ZH1003 و 14XJ10019)، شانغهاي الإبحار (18YF1413000)، وبرنامج الابتكار بعد التخرج من كلية الطب بنغبو (Byycx1722). ونشكر الدكتور آر قاو لمساعدته السابقة في المختبر لدينا.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Equipments
Laminar flow sterile hoodFengshi Animal Experimental  Equipment Techonology Co., Ltd. (Soochow, China)FS-CJ-2F
CentrifugeThermo Scientific (Waltham, USA)75005282
Tissue grinding machineScientz Biotechnology Co., Ltd. (Ningbo, China)Scientz-48
High temperature/high pressure sterilizerHirayama (Saitama, Japan)HVE-50
Isoflurane vaporizer Matrix (Orchard Park, USA)VIP3000
IVIS  Lumina III imaging systemPerkinElmer (Waltham, USA)CLS136334
Precision balanceSartorius (Göttingen, Germany)28091873
Instruments 
Eppendorf pipette (100 µL)Eppendorf (Westbury, USA) 4920000059
Eppendorf pipette (10 µL)Eppendorf (Westbury, USA) 4920000113
ForcepsShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. JD4020Curved tip
Hamilton syringeHamilton (Nevada, USA)80501Volume 50 μL
Micro-mosquito hemostatF.S.T (Foster City, USA)13011-12Curved, tip width 1.3mm
Needle holder Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. (Shanghai, China)J32110
Surgical scissorsF.S.T (Foster City, USA)14002-12
1-mL SyringeWeiGao Group Medical Polymer Co.,Ltd. (ShangDong, China)
Materials and reagents
Anti-GAPDH antibodyCST (Danvers,  USA)#2118
Anti-Luciferase antibodyAbcam (Cambridge, UK)ab187340
Anti-rabbit IgGCST (Danvers,  USA) #7074
Anti-VDR antibodyAbcam (Cambridge, UK) ab109234
BuprenorphineThermo Scientific (Waltham, USA)PA175056
Chloralic hydrasLingFeng Chemical (ShangHai, China)
Cryogenic VialsThermo Scientific (Waltham, USA)3754181.8 mL 
Depilatory creamVeet (Shanghai, China)
Dulbecco's phosphate buffered saline Gibco (Grand Island,  USA)14040133
EntoiodineLiKang (Shanghai, China)310132
EP tubeSarstedt (Newton, USA)PCR001
FilterMillipore (Bedford, USA)Pore size 0.2 µm 
IsofluraneYipin Pharmaceutical Company (Hebei, China)
LuciferinPromega (Madison, USA)P1041
Lysis buffer for western  blotBeyotime (Shanghai, China)P0013JWithout inhibitors
Ophthalmic creamApex Laboratories ( Melbourne, Australia))
PBSGibco (Grand Island,  USA)10010023
Protease inhibitor cocktailThermo Scientific (Waltham, USA)78438
5-0 silk sutureShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. (Shanghai, China)
Steel ballScientz Biotechnology Co., Ltd. (Ningbo, China)Width 1.5 mm
Syringe needleKindly Medical Devices Co., Ltd. (Zhejiang, China)30 gauge 
Warm matWarmtact Electrical Heating Technology Co., Ltd. (Guangdong, China )NF-GNCW

References

  1. Yancy, C. W., et al. 2017 ACC/AHA/HFSA Focused Update of the 2013 ACCF/AHA Guideline for the Management of Heart Failure: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines and the Heart Failure Society of America. J Card Fail. 23 (8), 628-651 (2017).
  2. Pu, J., et al. Cardiomyocyte-expressed farnesoid-X-receptor is a novel apoptosis mediator and contributes to myocardial ischaemia/reperfusion injury. Eur Heart J. 34 (24), 1834-1845 (2013).
  3. He, B., et al. The nuclear melatonin receptor RORα is a novel endogenous defender against myocardial ischemia_reperfusion injury. J Pineal Res. (3), 313-326 (2016).
  4. Yao, T., et al. Vitamin D receptor activation protects against myocardial reperfusion injury through inhibition of apoptosis and modulation of autophagy. Antioxid Redox Signal. 22 (8), 633-650 (2015).
  5. He, Q., et al. Activation of liver-X-receptor alpha but not liver-X-receptor beta protects against myocardial ischemia/reperfusion injury. Circ Heart Fail. 7 (6), 1032-1041 (2014).
  6. Ding, J., et al. Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts. J Vis Exp. (118), (2016).
  7. Bish, L. T., Sweeney, H. L., Muller, O. J., Bekeredjian, R. Adeno-associated virus vector delivery to the heart. Methods Mol Biol. 807, 219-237 (2011).
  8. Michael, J., et al. Cardiac gene delivery with cardiopulmonary bypass. Circulation. 104 (2), 131-133 (2001).
  9. Lei, S., et al. Increased Hepatic Fatty Acids Uptake and Oxidation by LRPPRC-Driven Oxidative Phosphorylation Reduces Blood Lipid Levels. Front Physiol. 7, 270 (2016).
  10. Zhang, H. B., et al. Maintenance of the contractile phenotype in corpus cavernosum smooth muscle cells by Myocardin gene therapy ameliorates erectile dysfunction in bilateral cavernous nerve injury rats. Andrology. 5 (4), 798-806 (2017).
  11. Virag, J. A., Lust, R. M. Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction. J Vis Exp. (52), (2011).
  12. Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: technique, theory, and trouble shooting. N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).
  13. Gao, E., et al. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ Res. 107 (12), 1445-1453 (2010).
  14. Zhao, Y., et al. Novel protective role of nuclear melatonin receptor RORα in diabetic cardiomyopathy. J Pineal Res. 62 (3), (2017).
  15. Nduhirabandi, F., Lamont, K., Albertyn, Z., Opie, L. H., Lecour, S. Role of toll-like receptor 4 in melatonin-induced cardioprotection. J Pineal Res. 60 (1), 39-47 (2016).
  16. Wu, H. M., et al. JNK-TLR9 signal pathway mediates allergic airway inflammation through suppressing melatonin biosynthesis. J Pineal Res. 60 (4), 415-423 (2016).
  17. de Luxan-Delgado, B., et al. Melatonin reduces endoplasmic reticulum stress and autophagy in liver of leptin-deficient mice. J Pineal Res. (1), 108-123 (2016).
  18. Scofield, S. L., Singh, K. Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography. J Vis Exp. (117), (2016).
  19. Cai, B., et al. Long noncoding RNA H19 mediates melatonin inhibition of premature senescence of c-kit(+) cardiac progenitor cells by promoting miR-675. J Pineal Res. 61 (1), (2016).
  20. Chua, S., et al. The cardioprotective effect of melatonin and exendin-4 treatment in a rat model of cardiorenal syndrome. J Pineal Res. 61 (4), 438-456 (2016).
  21. Pei, H. F., et al. Melatonin attenuates postmyocardial infarction injury via increasing Tom70 expression. J Pineal Res. 62 (1), (2017).
  22. Yu, L., et al. Membrane receptor-dependent Notch1_Hes1 activation by melatonin protects against myocardial ischemia-reperfusion injury_ in vivo and in vitro studies. J Pineal Res. 59 (4), 420-433 (2015).
  23. Yu, L., et al. Melatonin rescues cardiac thioredoxin system during ischemia-reperfusion injury in acute hyperglycemic state by restoring Notch1/Hes1/Akt signaling in a membrane receptor-dependent manner. J Pineal Res. 62 (1), (2017).
  24. Poggioli, T., Sarathchandra, P., Rosenthal, N., Santini, M. P. Intramyocardial cell delivery: observations in murine hearts. J Vis Exp. (83), e851064 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

134

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved