تقنيات خزعة البقري الغدة الثديية

Summary

ويعرض هذا المقال خزعة غدة الثديية الأبقار باستخدام أدوات خزعة الأساسية والإبر. يمكن استخدام أنسجة المقطوع لثقافة الخلية أو تقييم الفيزيولوجيا الثديية والتمثيل الغذائي بما في ذلك التعبير الجيني والتعبير البروتين والبروتين التعديلات، إيمونوهيستوتشيميستري وتركيزات المستقلب.

Abstract

خزعات الغدة الثديية البقري السماح للباحثين بجمع عينات الأنسجة لدراسة بيولوجيا الخلية بما في ذلك التعبير الجيني، التحليل النسيجي، مما يشير إلى مسارات، وترجمة البروتين. توضح هذه المقالة اثنين من التقنيات لخزعة الغدة الثديية البقري (MG). وكانت ثلاثة صحية هولشتاين الأبقار الحلوب المواضيع. قبل الخزعات، حلب الأبقار وضبط النفس في وقت لاحق المشغلة ماشية. مسكن (ميجلوميني فلونيكسين، 1.1 إلى 2.2 ملغ/كغ من وزن الجسم) تدار عن طريق الحقن [IV] عن طريق الحقن الوريدي جوجولار 15-20 دقيقة قبل أن خزعة. لتخدير الدائمة، هيدروكلوريد إكسيلازيني (0.01-0.05 مغ/كغ من وزن الجسم) تم حقن عن طريق السفن كوكسيجيل 5-10 دقيقة قبل الإجراء. مرة واحدة على نحو كاف مخدراً، الموقع خزعة أسيبتيكالي وأعد وفظاعتها محلياً مع 6 مل هيدروكلوريد ليدوكائين 2% عن طريق الحقن تحت الجلد. باستخدام تقنية معقمة، تم شق عمودي 2 إلى 3 سم من استخدام مشرط رقم 10. وقد استخدمت أدوات خزعة الأساسية والإبر. أداة خزعة الأساسية تم إرفاقه مثقاب وإدراجها في الأنسجة مغ من خلال شق استخدام إجراء حفر clock-wise. وأدرج الأداة خزعة الإبرة يدوياً في الموقع شق. مباشرة بعد هذا الإجراء، مساعد ضغطاً على موقع شق لمدة 20 إلى 25 دقيقة باستخدام منشفة عقيمة لتحقيق الأرقاء. واستخدمت الدبابيس الجراحية الفولاذ المقاوم للصدأ لمعارضة شق الجلد. السلع الأساسية تم إزالة 10 أيام بعد انتهاء الإجراء. المزايا الرئيسية الخزعات الأساسية والإبر هي أن كلا النهجين كسبها من الإجراءات التي يمكن القيام بها بأمان في الأبقار السليمة. وكان إنتاج الحليب عقب الخزعة لم تتأثر. هذه الإجراءات تتطلب وقت انتعاش قصير ويؤدي إلى مخاطر أقل من المضاعفات. قيود محددة قد تشمل النزيف بعد خزعة والإصابة في موقع خزعة. وتشمل تطبيقات هذه التقنيات جمع الأنسجة لأغراض البحث، مثل زراعة الخلايا الأولية والتشخيص السريري.

Introduction

خزعة إجراء لحصاد قسم أساسية من الأنسجة من المواضيع الطبية أو لأغراض البحث. وأسلوب كسبها والمستخدمة على نطاق واسع لجمع الأنسجة كبديل للقتل الرحيم¹ للسماح بتحليل الردود الأنسجة للعلاج أو غيرها من العوامل ذات الأهمية. عينات أنسجة الغدة الثديية البقري (MG) ضرورية لبحوث الألبان لدراسة التعبير الجيني والبروتين، علم الأنسجة، ومنظمة العضيات الخلوية ومسارات الإشارات وعمليات الأيض في الاستجابة للتغييرات في الإدارة أو البيئة. بالإضافة إلى ذلك، يلزم الأنسجة مغ لتشخيص وبحوث بعض الأمراض المعدية، مثل التهاب الضرع البقري الناجمة عن العدوى البكتيرية².

ضرع الماشية على أربع غدد منفصلة وكل غدة تحتوي على نظام افرازي حليب مستقلة تسمى مجتمعة حمة. الحويصلات الهوائية، والقنوات، والنسيج الضام موجودة في حمة الثديية. الحويصلات الهوائية المجهرية هياكل جوفاء كروية تتكون من الخلايا الظهارية في السطح الداخلي (لومينال) والخلايا myoepithelial المتخصصة على السطح الخارجي (القاعدية). الحويصلات الهوائية المسؤولة عن تجميع وإفراز الحليب. يمكن فصل النسيج الضام الليفي في حمة مجموعة من الحويصلات الهوائية من مجموعات أخرى من الحويصلات الهوائية، وكل مجموعة تسمى الفصيص³. عدة عوامل يمكن أن تؤثر على التنمية والدالة ملغ بما في ذلك فسيولوجيا الحيوان والتغذية، وإدارة، وعلم الوراثة و البيئة⁴. التهاب الضرع هو أيضا أحد عوامل حاسمة التي تؤثر تأثيراً سلبيا على مغ الدالة والحليب نوعية⁵. يمكن أن تتسبب في الأضرار بالحويصلات الهوائية السموم الصادرة عن مسببات الأمراض ماستيتيك وحمل نخر أسفرت التغيرات البيوكيميائية وغذائها في الأنسجة ملغ⁶. وهكذا، قد يكون علم الأنسجة والعمليات الأيضية لكل الحويصلات الهوائية أو الفصيص في ملغ تختلف اختلافاً كبيرا عن الآخرين. على هذا النحو، والخزعات التي عينات تمثيلية من الغدة الثديية كامل من المستصوب. يمكن فقط التقاط الخزعات الصغيرة الفصيص واحد أو سنخ الفردية، يحد من المعلومات العلمية أو التشخيصية الناتجة. لأغراض البحث، من الضروري أن تكون على علم أن يوفر خزعة الثديية 'لقطة' من خصائص الأنسجة ولكن خزعة لا تميز على نحو كاف مجموع الدالة الثديية في غياب تقديرات إجمالي الغدة الثديية الشامل.

وقد وضعت العديد من أدوات خزعة على مدى السنوات ال 30 الماضية للاستخدام البشري. حاليا عمليات التكييف هذه الصكوك المتوفرة للاستخدام مع الحيوانات. للأبقار الحلوب، أخذت عينات أنسجة مغ استخدام تقنيات مختلفة بما في ذلك الاستئصال الجراحي (تشريح كليلة)⁷وخزعة الإبر^1،8الأساسية خزعة الصكوك^9،10. وهكذا، قد انتقلت تقنيات خزعة مغ في الأبقار الألبان من الإجراءات باستخدام التخدير راقد مع التشريح الجراحي باستخدام electrocautery الأرقاء في 1992⁷ إلى مجموعة من الخزعات الأساسية تحت التخدير الدائمة^{9، 10،،}من¹¹¹². خزعة جراحية هو الجرح طريقة الغازية، والتي يمكن أن تكون مكلفة وقد نسبة أعلى من المضاعفات مثل ورم دموي، المشاكل، والورم انتشر¹³. في الوقت الراهن، خزعة الأساسية وابرة خزعة (يعرف أيضا باسم خزعة ترو-قص) قد اعتمدت على نطاق واسع كبدائل لخزعة جراحية. وتشمل مزايا الخزعات الأساسية وابرة خزعة جراحية بالمقارنة مع: الإجراء مينيملي؛ المضاعفات الرئيسية نادرة؛ التخدير العام غير مطلوب؛ هذا الإجراء هو relativley السريع؛ الوقت الانتعاش القصير؛ هناك الحد الأدنى من الآثار السلبية على الصحة ضرع، والآثار القصيرة الأجل فقط على الحليب الغلة وتكوين^8،،من⁹¹⁰؛ والتكلفة خزعة جراحية أقل من¹³.

إجراء خزعة الأساسية الموصوفة في عام 1996 استخدام قنية فولاذ المقاوم للصدأ عقيمة، مع شفرة قابل الإزالة لإزالة كمية ممثل من الأنسجة من مغ الأبقار دون تخدير^{9،10،11 ،12}. أثناء الإجراء، علقت الصك مثقاب لخلق بسرعة منخفضة، اقتراح التناوب الذي قطع أنسجة أساسية نظيفة كما كانت متقدمة الأداة في الأنسجة. صالح كان نسيج أكبر عينة (70 مم × 4 مم في القطر، وحوالي 0.75 إلى 1 ز) ⁹. دراسة الأخيرة¹⁰ أظهرت أن الإجراء خزعة الموصوفة بفار جيم خامساet al. ⁹ يمكن استخدامها لأداء مجموعات الأنسجة مغ المتكررة دون تأثير سلبي على صحة الأداء وضرع الأبقار الألبان. وفي الآونة الأخيرة، أجريت دراسة¹⁴ في الأبقار الحلوب لتقييم الخزعات المتكررة ملغ استخدام تروكار أكبر (القطر 31 سم طويلة، الخارجي 9.5 مم والقطر الداخلي من 8 مم) مع فراغ المطبقة على قنية فولاذ المقاوم للصدأ داخلية جمع خزعة . هذا الأسلوب يستخدم التخدير (إكسيلازيني) والتخدير الموضعي (2% ليدوكائين هيدروكلوريد).

خزعة الإبرة أسلوب آخر لجمع الأنسجة الثديية. وقد اعتمدت عدة دراسات هذا الأسلوب. واحد الدراسة¹ استخدام التخدير (ديتوميديني) ومخدر موضعي (ليدوكائين 1%) في الإجراء. بعد الخزعة، تلقي الأبقار علاج بالمضادات الحيوية الاتقائية. وكان مدلك الغدة الثديية يدوياً قبل وبعد في حلب. لوحظ الدم في الحليب ليصل إلى 84 ح بعد الخزعة. وتأثرت بالمبلغ وتكوين الحليب لفترة قصيرة من الزمن. في الآونة الأخيرة، دراسة استخدام إبرة خزعة لتنفيذ المتكررة ملغ خزعات في الأبقار الحلوب⁸. التخدير (1% أسيبرومازيني، العضلي) وكانت تدار التخدير الموضعي (2% ليدوكائين هيدروكلوريد، تحت الجلد) للحيوانات. الحيوانات لم يتلق الأدوية إينتراماماري أو المضادات الحيوية قبل أو بعد العملية، وكانت هناك أي علامات على الإصابة في موقع خزعة خلال فترة ما بعد العمليات الجراحية. في هذه الدراسة، كان خزعات مغ الأبقار المتكررة باستخدام إبرة طفيفة أثر سلبي على صحة الإنتاج وضرع الحليب من الأبقار الحلوب. وبوجه عام، يبدو خزعة الإبرة أسلوب أقل الغازية من الصك خزعة الأساسية. ومع ذلك، كما ذكر سابقا، من الضروري تقنية خزعة لحصاد عينة تمثيلية من الأنسجة مغ. الحد من خزعة الإبرة هو الحصول على كمية صغيرة من الأبقار مغ الأنسجة (حوالي 20 إلى 25 ملغ)^8،15.

تقريبا جميع الدراسات استخدمت مجموعة من التخدير مؤثر α-2 ومخدر موضعي^8،،من⁹¹⁰، عما إذا كان الخزعة عن طريق إبرة أو نواة أكبر. في مغ البقري، ترتبط معظم النهايات العصبية بالجلد. تعصيب للأنسجة متني هو إلى حد كبير عن طريق مستقبلات التمدد مع نوع متفرق ألياف العصبية للكشف عن الألم الجراحي الحاد. نتيجة لذلك الآليات الفيزيولوجية من الألم بسبب المعالجة الجراحية ملغ عن طريق الجلد والأنسجة تحت الجلد³ ولا عميق الأنسجة مثل الأنسجة متني. ولذلك، إجراءات خزعة، من الضروري إلا محلياً تخدير الجلد والأنسجة تحت الجلد، كما تسلل مخدر موضعي إلى أنسجة أعمق لا تقلل إلى حد كبير الألم الجراحي. بعد إعداد مناسبة من منطقة خزعة، عدم الراحة الحيوانية، في المقام الأول، المرتبطة بضبط النفس.

قد جمع العينات الأساسية أكبر زيادة تشكيل ورم دموي وتزيد من خطر العدوى داخل حمة ملغ. ولذلك، كثيرا ما تتضمن البروتوكولات التعاونية القريبة الإدارة من المضادات الحيوية حقنا⁷، على الرغم من أن هذا ليس المسلمات⁸. تحقيق الأرقاء أيضا عامل مهم للحد من الاعتلال البقر. في الدراسة المذكورة آنفا استخدام الأساسية الكبيرة خزعة صك¹⁴، وضغط يدوي تم تطبيقها على الموقع خزعة واستخدمت الصدرية بقرة لتطبيق الثلج على الجروح على الأقل 2 ح في الإجراء التالي. وعلى الرغم من كمية كبيرة من الأنسجة المقطوع، انخفاضات طفيفة فقط في تغذية العائد المتحصل والحليب، والإجراء وتكرر كل ثلاثة أسابيع دون آثار سلبية على صحة البقرة.

الباحثين إجراء خزعة مغ في الأبقار الحلوب تحتاج إلى النظر في نوعية خزعة الناتجة عن التشخيص أو التحليلية، وسهولة الأسلوب، والاعتلال البقر. التقنيات الجراحية الدقيقة ومخططة مسبقاً لا غنى عنه لتحقيق هذه الأهداف. وحتى الآن، مغ خزعة الدراسات ركزت على وصف نتائج خزعة، بدلاً من وصف خزعة التقنية ذاتها، وأوصاف للأبقار الحلوب المرضعات تفتقر إلى التفاصيل الكافية للسماح للنسخ المتماثل. وهكذا، كان الهدف من هذا العمل لوصف خزعة الإبرة وتقنيات خزعة الأساسية أكبر بتفصيل كاف للسماح للنسخ المتماثل آمنة وإنسانية من خزعة مغ من الماشية.

Protocol

وافق جميع الأساليب الموصوفة "فيرجينيا تك رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك).

1-الأفراد

1. وقد مساعدين اثنين على الأقل مع الخبرة الجراحية ومعالجة البقرة.
2. تدريب المساعدين كل ثلاث مرات على الأقل، وإذا أمكن استخدام المواد المأخوذة، قبل تنفيذ الإجراءات المقترنة بهذا البروتوكول على الحيوانات الحية.
   ملاحظة: ينبغي إجراء التدريب من قبل مدرب الذي كان سابقا تدريبهم وتنفيذ الأسلوب.
3. الطبيب بيطري حيوانات كبيرة الفعلي للدواء وضروريا في حال هذا العلاج في حالات الطوارئ أثناء الإجراء. حالات الطوارئ التي قد تحدث أثناء هذا الإجراء تشمل ولكن لا تقتصر على: النزف، مؤثر α-2 جرعة زائدة وذمة رئوية وانكفاء والتطلع للمواد الغذائية، والألم، ومقاومة المريض التي تحتاج إلى مزيد من التخدير.

2-إعداد الأدوات الجراحية واللوازم، ومرفق

1. المخزون، وشراء جميع المعدات واللوازم (انظر الجدول للمواد).
2. نظيفة والستائر الجراحية اﻷوتوكﻻف، خزعة الصكوك وأصحاب المبضع، والمناشف الجراحية والملقط.
3. قد شلال ضغط الحجم بشكل صحيح وبوابة رئيس لكبح جماح الأبقار.
4. إنشاء مساحة عمل مع جدول قرب شلال الضغط.
5. ضمان أن منطقة العمل نظيفة ومحدودة البقر من خلال حركة المرور.
6. تنظيم المعدات واللوازم في مساحة العمل ليسهل الوصول إليها.
7. أن الإضاءة المناسبة داخل مساحة العمل.

3-إعداد الحيوانات

1. يوم واحد قبل خزعة المجدولة، غسل وفرك الحيوان، ولا سيما ضرع لإزالة السماد والمواد المتسخة.
2. اتبع الإجراءات لضبط النفس آمنة وإنسانية من الماشية.
3. قبل الخزعة، ومرة أخرى في وقت عينة، تقييم الصحة والحالة المادية وسلوك الحيوان.
   ملاحظة: يشمل دراسة الحد أدنى درجة الحرارة، النبض، ومعدلات الالتهاب الرئوي، فضلا عن فحص لالتهاب الجلد عبر موقع الجراحية المقترحة أو مجالات أخرى من العدوى البكتيرية. جمع عينات حليب من كل ربع سنة، والتحقق من التهاب الضرع.
4. استخدم فقط صحة الأبقار.
5. حليب البقر تماما.
6. نقل الحيوانات إلى المظلة الضغط، من الناحية المثالية داخل ح 2 من حلب للتقليل من وجود الحليب في الغدد.
7. كبح جماح الحيوان مع بوابة الرأس.

4-التسكين والتخدير

1. مكان هالتر حبل على رأس البقرة لمنع إلى الخلف وإلى الأمام حركة.
2. سحب رأسه الحيوان إلى جانب واحد، وربط الحبل على المظلة الضغط باستخدام عقده الإفراج سريع لعقد الرأس في المكان.
3. تنظيف منطقة الحقن بمسحه كحول الأيزوبروبيل 70% وإدارة فلونيكسين ميجلوميني (2، 1، 1 إلى 2 مغ/كغ وزن الجسم) عن طريق الوريد عن طريق الوريد قبل 15-20 دقيقة لخزعة.
   ملاحظة: في بعض البروتوكولات، تدار nonsteroidal العقاقير المضادة للالتهابات بعد الخزعة إذا كانت العقاقير المضادة للالتهابات لن تؤثر على نتائج البحث.
   1. قم بتحديد موقع حبل الوريد.
   2. رفع حبل الوريد عن طريق تطبيق الضغط على قاعدة jugular groove.
   3. تحقق للتأكد من أنه لا يوجد أي فقاعات في المحاقن.
   4. أدخل الإبرة في الوريد التي أثيرت، ورسم 0.5 مل دم في المحاقن مرتين وتخلط مع المحتويات. إذا كان الدم لا يظهر في المحاقن، نقل الإبرة. إذا كان الإبرة المقيمين في هذا السياق، حقن المحتويات.
   5. إزالة الإبرة برفق.
   6. تطبيق شاش مع ضغط لطيف على موقع الحقن منع النزيف.
4. إدارة هيدروكلوريد إكسيلازيني عن طريق الوريد (0.01 إلى 0.05 مغ/كغ وزن الجسم) في السفينة كوكسيجيل حوالي 5-10 دقيقة قبل خزعة لإتاحة الوقت الكافي لإنشاء للتخدير.
   تنبيه: التحقق من الحيوان لعلامات على ذمة رئوية. وتشمل الأعراض الإكلينيكية لذمة رئوية الضائقة التنفسية وضيق التنفس الحاد، وصعوبات في التنفس، والسعال، والبصاق بروذرز واللسان الأزرق. إذا لوحظت علامات على ذمة رئوية، من المستحسن استخدام تولازيني (من 2 إلى 4 مغ/كغ وزن الجسم) لعكس آثار إكسيلازيني.
   1. رفع الذيل وتنظيف منطقة الحقن بمسحه كحول الأيزوبروبيل 70%.
   2. تحقق للتأكد من أنه لا يوجد أي فقاعات في المحاقن.
   3. أدخل الإبرة في السفينة الذيل ورسم 0.2 مل دم في المحاقن وخلط مع محتويات للتأكد من الإبرة المقيم في السفينة. إذا كان الإبرة المقيم في السفينة، حقن محتويات المحاقن.
   4. إزالة الإبرة برفق.
   5. تطبيق شاش مع ضغط لطيف على موقع الحقن.

5-إعداد الموقع خزعة

1. يكون مساعدا التعادل حتى الذيل لهذا الإجراء.
2. حدد موقع خزعة في ضرع (عادة في منطقة علوية للتقليل من مجموعة من الأنسجة الضامة وتجنب اقتحام صهريج الغدة، الشكل 1)، وإزالة أي مواد المتسخة أو السماد الطبيعي من موقع خزعة المحدد.

الشكل 1 . صورة ضرع الأبقار التي توضح الموقع خزعة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- 

3. مراقبة وجس الجلد مع إيلاء اهتمام خاص لتحديد أي كبيرة من الأوعية الدموية تحت الجلد لتفادي هذه السفن خلال الخزعة.
4. مقطع الشعر من 15 سم × 15 سم محيط الموقع خزعة.
5. تعد منطقة خزعة مع بوفيدون (0.75 ٪ اليود المتاحة) أو فرك غلوكونات الكلورهيكسيدين. بالتناوب مع كحول الأيزوبروبيل 70 في المائة على الأقل ثلاث مرات لإزالة جميع الأنقاض المرئية وغير المرئية. تطبيق الحل فرك العقيم وكحول الأيزوبروبيل في حركة دائرية باستخدام نهج من الداخل إلى الخارج. تأكد من أن الحل فرك مطهر لا يزال على اتصال مع الجلد لمدة 5 دقائق على الأقل.
6. استخدام جرعة فراشة بإبرة ز 18 إيداع 6 مل من 2% ليدوكائين هيدروكلوريد تحت الجلد في موقع شق لإنشاء خط كتلة. لا تخترق الأنسجة الأعمق.
   ملاحظة: جرعة يدوكائين يتراوح بين 3 و 8 مل.
7. السماح مخدر لنزع فتيل لتنفيذ الحد الأدنى من 3 إلى 5 تكرار آخر حل فرك والكحول قبل شق. بينما كان ينتظر، إعداد الصكوك خزعة.

6-خزعة الداخلي

1. استخدام تقنيات العقيم عند التعامل مع الأدوات خزعة والشق.
2. أغسل يديك لإزالة التلوث مرئية كافة وتطبيق القفازات الجراحية المعقمة.
3. ترتيب الأدوات الجراحية في منطقة معقمة في النظام للاستخدام. وقد مشرط رقم 10 وشاش معقم وأداة خزعة تجميعها ومنشفة عقيمة للارقاء.
   ملاحظة: اتبع الإجراء 1 لإجراء خزعة الأساسية أو الإجراء 2 لإجراء خزعة إبرة.

الشكل 2 . التمثيل التخطيطي للجمعية والإعداد للأداة خزعة الأساسية وصفتها ف جيم فأر، وآخرون ⁹ شريط مقياس هو 1 سم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

4. صك خزعة الأساسية (فأر et al.⁹)
   1. تجميع الصك خزعة الأساسية باستخدام قفازات معقمة (الشكل 2).
      1. ضع قطعة معقمة 7 على ثني عقيمة (الشكل 2A).
      2. إدراج الشفرة (قطعة 1) في نظام الالتحام في قطعة 2 (الشكل 2 ).
         تنبيه: لا تضع الأصابع مباشرة في السطر بليد.
      3. إدراج قطعة 3 على رأس قطعة 2 (الشكل 2) ضمان أنه سيتم محاذاة محطة الإرساء.
         ملاحظة: مراعاة نظام الالتحام في الجدران الداخلية لقطعة 4 (الشكل 2D).
      4. الدخول النهائي حافة النصل (قطعة 1) في نظام الالتحام قطعة 4 (الشكل 2D).
      5. دفع قطعة 4 ونلاحظ إذا قطعة 4 بجوار قطعة 3 (الشكل 2E).
      6. إدراج قطعة 5 على الجهاز (بليد + قطعة 2) (الشكل 2 واو).
      7. تأكد من أن يتم محاذاة محطة الإرساء (الشكل 2).
      8. إدراج قطعة 6 في الجزء العلوي من قطعة 2 (مقابل الجانب النصل) (الشكل 2 ح)
      9. تأكد من أن يتم محاذاة محطة الإرساء (الشكل 2 ح).
      10. إدراج المسمار تأمين (قطعة 7) في محطة الإرساء (الشكل 2 طاء).
      11. دفع قطعة 3 (أسود) لتغطية تأمين المسمار.
          تنبيه: لا تضع الأصابع على خروج بليد.
      12. تنشيط أداة دفع قطعة 4 ومراقبة الشفرة خارج الأداة.
      13. سحب قطعة 4 على التراجع عن النصل إلى الأداة (جاهزة للاستخدام).
          ملاحظة: ينبغي تفعيل الشفرة فقط عندما الأداة قد اخترقت المسافة المطلوبة داخل الأنسجة يتم فحص.
   2. ضمان أن البقرة هي مخدراً بما فيه الكفاية والموقع خزعة يتم تخديره بما فيه الكفاية. قرصه الجلد للتأكد من أي رد فعل.
   3. جعل شق عمودي 2 إلى 3 سم من خلال الجلد والأنسجة تحت الجلد من الأقرب إلى الأعلى باستخدام مشرط رقم 10.
   4. إرفاق صك خزعة مثقاب في استخدام تقنية العقيمة.
   5. المثقاب ضد أداة خزعة والتحقق إذا الأداة موصولة بثبات إلى التدريبات.
   6. ضمان ضبط النفس كافية بوجود فرد رفع الذيل أثناء إجراء كافة.
   7. قم بتشغيل حفر استخدام دوران مع عقارب الساعة وسرعة منخفضة.
      ملاحظة: المناورات ليست عقيمة، والمشغل لا تظل عقيمة عند استخدام التدريبات.
   8. تقدم الأداة خزعة كاملة (حوالي 7.5 سم) إلى ضرع من خلال الشق بينما يدور الحفر عدد القتلى.
   9. إيقاف الحفر وتمديد قطعة 4 الأداة يدوياً.
   10. قم بتشغيل حفر استخدام دوران مع عقارب الساعة وسرعة منخفضة.
   11. قم بإزالة الأداة التي تحتوي على الأنسجة الأساسية من ضرع.
   12. تطبيق ضغط قوي على الفور للجرح باستخدام منشفة عقيمة لمدة 20 دقيقة على الأقل.
       ملاحظة: يكون مساعد للقيام بهذا باستخدام تلك القبضة الحديدية لضمان تطبيق ضغط كاف.
   13. إزالة الأنسجة من أداة خزعة باستخدام الملقط.
   14. الاحتفاظ العينة في 1 x الفوسفات مخزنة المالحة وتقييم كمية الأنسجة.
   15. أن العلامات الحيوية للبقرة كل 10 دقيقة بعد خزعة لمدة 30 دقيقة على الأقل.
   16. تحقق من وجود النزيف بعد 20 دقيقة من الضغط على الموقع خزعة. إذا كان هناك تقطر دم يستمر تطبيق الضغط 5-10 لكل دقيقة إضافية.
   17. إغلاق الشقوق باستخدام دبابيس الفولاذ المقاوم للصدأ على فترات 5 مم نزيف بعد كل توقف. استخدم بين 5 و 8 في المواد الغذائية الأساسية.
   18. تطبيق ضمادة الهباء الجوي لمنطقة خزعة.
   19. مراقبة الحيوانات لمدة 50 دقيقة بعد الإجراء.
5. إبرة خزعة الصك
   1. اتبع إرشادات الشركة المصنعة للجهاز.
   2. إزالة إبرة خزعة من الحزمة باستخدام تقنيات عقيمة.
   3. تجاهل الإبرة إذا لم يتم ملاحظة أي ضرر.
   4. إرفاق الإبرة للجهاز.
   5. أغلق الغطاء والديك الجهاز.
   6. ضمان أن البقرة هي مخدراً بما فيه الكفاية والموقع خزعة يتم تخديره بما فيه الكفاية. قرصه الجلد للتأكد من أي رد فعل.
   7. جعل شق عمودي 1 إلى 2 سم من خلال الجلد والأنسجة تحت الجلد من الأقرب إلى الأعلى باستخدام مشرط رقم 10.
      ملاحظة: يمكن الشق للصك إبرة خزعة صغيرة (1-2 سم) من ذلك الصك خزعة الأساسية.
   8. أدخل إبرة خزعة في الموقع شق (حوالي 10 إلى 13 سم من الجلد).
   9. تنشيط جهاز إبرة خزعة لجمع الأنسجة.
   10. إزالة الإبرة من ضرع.
   11. تطبيق فوري وقوى الضغط على الجرح باستخدام منشفة عقيمة لمدة 20 دقيقة على الأقل.
   12. إزالة الأنسجة من إبرة خزعة استخدام الملقط.
   13. الاحتفاظ العينة في 1 x الفوسفات مخزنة المالحة وتقييم كمية الأنسجة.
   14. أن العلامات الحيوية كل 10 دقيقة بعد خزعة لمدة 30 دقيقة على الأقل.
   15. تحقق من وجود النزيف بعد 20 دقيقة من الضغط على الموقع خزعة.
   16. إغلاق الشقوق باستخدام دبابيس الفولاذ المقاوم للصدأ نزيف بعد كل توقف.
   17. تطبيق ضمادة الهباء الجوي لمنطقة خزعة.
   18. مراقبة الحيوانات لمدة 50 دقيقة بعد الإجراء.

7-خزعة بعد رعاية الحيوان

1. توثيق جميع العقاقير التي تديرها للحيوانات.
   ملاحظة: تم تجاهل الحليب خلال مدة 36 ساعة بعد هذا الإجراء؛ وكان انسحاب اللحوم 4 فترات انسحاب دال للحليب واللحوم، وقد تختلف حسب البلد أو الاختصاص والأدوية المستخدمة. الرجاء التحقق من اللوائح والقواعد المحلية.
2. التحقق من وجود الدم في الحليب لمد 7 إلى 10 بعد الخزعة.
3. من ناحية قطاع تجلط الدم من الربع فحص في ميلكينجس اللاحقة والتأكد من أن الحليب الكامل تحدث إزالة.
   ملاحظة: من المتوقع وجود تجلط الدم من الربع فحص ل milkings 1-3 في الإجراء التالي. ويمكن ملاحظة الدم في اللبن د 1 إلى 6 بعد الخزعة.
4. مراقبة الحليب العائد، وإذا كان ذلك ممكناً، تغذية اليومية الفردية المدخول حتى تم إزالة الدبابيس الجراحية.
5. مراقبة الحيوان مرتين في يوم لدرجة حرارة الجسم، والتنفس ومعدل ضربات القلب، وسلوك حتى الدبابيس الجراحية قد أزيلت.
6. تحقق من الموقع خزعة مرتين يوميا تورم والرقة، وأي علامات للصرف حتى تم إزالة الدبابيس الجراحية. إذا كانت هذه هي لاحظت، استشارة طبيب بيطري.
   ملاحظة: الاحتفاظ بالموقع خزعة نظيفة وإعادة تطبيق ضمادة الأيروسول كل واحد إلى ثلاثة أيام حسب الحاجة.
7. إزالة من السلع الأساسية من موقع شق د 10 إلى 14 بعد الخزعة، تبعاً لمعدل الشفاء.
8. استشارة طبيب بيطري إذا لوحظت أي علامات على الإصابة المحلية أو المنهجية.

النتائج

في هذا البروتوكول، أنتجت تقنية خزعة الأساسية عينة الأنسجة من 200 إلى 600 ملغ بينما خزعة الإبرة أنتجت عينات من 10 إلى 30 ملغ لخزعة. ولوحظت الحيوانات مرتين يوميا لمدة 10 د بعد هذا الإجراء. لا توجد مضاعفات حدثت أثناء الإجراء أو في الفترة اللاحقة للعمليات الجراحية، مع معلمات الحيوية من الأبقار تبقى ضمن الحدود الطبيعية (متوسط معدل التنفس = 31.4 ± 7.04 (SD) نفسا في الدقيقة، متوسط معدل ضربات القلب = 75.9 ± 8.9 نبضة في دقيقة، ومتوسط درجة حرارة المستقيم = ± 38.2 0.68 درجة مئوية، الشكل 3).

بعد الضغط اليدوي على المنطقة خزعة لتحقيق الأرقاء (حوالي 25 دقيقة)، أظهرت جرح مفتوح الحد الأدنى النزيف (الشكل 4). تم تغذية الأبقار نفس النظام الغذائي ad متواصلة، وأبقى الحيوانات في مرفق الإسكان نفسه خلال الفترة اللاحقة للعمليات الجراحية. الحيوانات لم تظهر علامات الإصابة في موقع خزعة؛ لم يكن هناك الألم، والنزيف، وتورم، والصرف، أو درجة حرارة مرتفعة (الشكل 5). الجرح تلتئم في غضون 8 إلى 10 د الخزعة (الشكل 5).

وضع الحيوان واحدة تهيج الجلد البسيطة المستحقة للجرح فرك في اليوم الثامن بعد الإجراء. وعولج هذا البقر بتنظيف الموقع خزعة باستخدام حل بوفيدون وكحول الأيزوبروبيل 70%. أزيلت دبابيس الفولاذ المقاوم للصدأ للسماح بالصرف وطبق البوفيدون اليود مرهم (1%) مرتين في يوم على موقع خزعة لمد 2 إلى 3. تهيج الجلد اختفى 2 (د) بعد تطبيق مرهم بوفيدون والجرح تلتئم مع لا مضاعفات أخرى.

تم إزالة تجلط الدم من جهة تجريد من الحليب من الربع فحص قبل آلة الحلب. في هذا البروتوكول، لوحظ وجود تجلط الدم في الحليب ليصل إلى ثلاثة ميلكينجس (حوالي 36 ح) بعد الخزعة. ولوحظ تلوث الدم من الحليب ليصل إلى 48 ساعة بعد الخزعة. لم تكن هناك البصرية فروق بين الخزعات الأساسية وابرة بالنسبة لكمية الدم في الحليب. الحيوانات لم تظهر انخفاضا كبيرا في إنتاج الحليب بعد هذا الإجراء (الشكل 6). وكان تكوين الحليب متوسط 4.37 ٪ من الدهون والبروتين 3.34% اللاكتوز 4.64%. وكان العد الحليب متوسط الخلية الجسمية (SCC) 200,000 أقل من الخلايا كل مل.

يمكن استخدام مغ الأنسجة التي تم الحصول عليها لأغراض بحثية مختلفة مثل الثقافات الخلية الابتدائية (الشكل 7).

الشكل 3 . تقييم مؤشرات الصحة الحيوانية بعد خزعة الغدة الثديية البقري. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- 

الشكل 4 . مظهر الموقع خزعة بعد تم تطبيق الضغط اليدوي إلى منطقة خزعة لتحقيق الأرقاء. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 5 . صور موقع خزعة. (A) خزعة الموقع 3 د بعد هذا الإجراء. (ب) خزعة الموقع د 6 بعد هذا الإجراء. موقع خزعة (ج) د 10 بعد الإجراءات التي توضح أن كانت تلتئم الجرح على نحو كاف. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الرقم 6 . إنتاج الحليب اليومي قبل وبعد الخزعة الغدة الثديية البقري (n = 3 الأبقار)- نموذج خطي يقدر أن 10 أيام قبل الخزعة الحيوانات المنتجة 23.35 كجم من الحليب في اليوم الواحد. إنتاج الحليب ولم تتغير كثيرا (P > 0.05) من قبل عشرة أيام إلى 10 أيام بعد الخزعة على الرغم من حدوث زيادة طفيفة في إنتاج الحليب ولوحظ (زيادة 0.0005 كجم/د من الحليب لكل يوم من 10 أيام قبل الخزعة). واستخدمت ثلاثة من الحيوانات في هذا البروتوكول؛ الحيوان واحد كان فحص مرتين (الحيوان 1: الأساسية خزعة في الجانب الأيسر من ضرع وابرة خزعة على الجانب الأيمن ضرع) واثنين من الحيوانات تم فحص مرة واحدة (الحيوان 2 و 3: فقط على الجانب الأيمن من ضرع استخدام الإجراء الأساسية أو إبرة). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 7 . صور الممثل للثقافة الأولية الخلايا الظهارية الثديية البقري. شريط الحجم هو 100 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Discussion

وقد وصف الطرق خزعة الأساسية وابرة في هذا البروتوكول^9،16. تقييم مفصل للصحة الحيوانية والإصابة بالتهاب الضرع¹⁴ قبل الخزعة مطلوب لكلا الإجراءين. لأغراض البحث، وينبغي تجنب أداء التقنية في الحيوانات مع علامات واضحة من الالتهابات أو الأمراض المعدية. هذا سوف يقلل من خطر حدوث مضاعفات أثناء وبعد خزعة. ينبغي أن تكون جميع الصكوك خزعة وأجهزة نظيفة وتطهير وتعقيم لتجنب تلوث الموقع خزعة. قبل الإجراء، من الضروري تقليل الإصابات الجراحية الموقع (مباحث أمن الدولة). وبصفة عامة، يرتبط مباحث أمن الدولة مع الأمراض الحيوانية والأداء المفقودة، وارتفاع تكاليف الإنتاج في الأبقار الحلوب. وأفادت الدراسات سابقا أساليب لمنع مباحث أمن الدولة بسبب خزعة بما في ذلك قطع الشعر حول موقع شق، غسل منطقة خزعة لإزالة تلوث^9،14، واستخدام وكلاء مطهر (الكحول 70%، اليود الجراحية فرك⁹، 2% الكلورهيكسيدين خلات الحل¹⁴، 10% بوفيدون⁸) لإعداد الجلد. في بعض الدراسات، اعتمدت الإدارة من المضادات الحيوية خلال⁷ أو فورا بعد خزعة⁹؛ ومع ذلك، الاتقاء بالمضادات الحيوية لم تستخدم في العمل الحالي، ولم يلاحظ أي عدوى لموقع خزعة. لمنع تلوث خزعة الجرح، ينبغي تأمين الذيل لمنع الاتصال مع موقع خزعة حتى تم تطبيق ضمادة الهباء الجوي. في هذا البروتوكول، تتم إزالة المواد الغذائية حوالي 10 إلى 14 د بعد الخزعة.

قبل خزعة أساسية، فمن المهم بشكل صحيح إعداد الأداة وإرفاقه بالحفر؛ اختر سرعة دوران بطيئة وحدد التناوب إلى الأمام، ولا تستخدم وضع عكس الحفر. أثناء الإجراء، من المهم استخدام ضغط رقمي على كلا الجانبين من الشق للحفاظ على حواف الجلد عن بعضها وشق طويل بما يكفي للسماح بإدخال أداة دون الاتصال بالجلد أو النسيج الضام. إذا لم يتم هذا الإجراء، قد تحدث عبئا على حواف الشق أثناء التناوب الصك خزعة الأساسية وتسبب الصدمات الأنسجة الجلد إضافية التي سوف تزيد من خطر العدوى وقد يؤدي إلى تأخير التئام الجروح. أجريت خزعة هذه الإجراءات الموصوفة في هذا البروتوكول بجراح مؤهل في حيوانات كبيرة. الإجراءات التي تم تنفيذها بنجاح (الشكل 5). كلا التقنيات نسبيا سهلة وسريعة لإجراء مقارنة بإجراء الاستئصال الجراحي.

شائعة النزيف من موقع خزعة بعد مغ خزعة في الأبقار الحلوب^8،9،،من¹⁰¹⁴. في هذا البروتوكول، والنزيف ولاحظ كان الحد الأدنى (الشكل 4)، الذي قد يكون بسبب تطبيق كاف (ضغط) على الجرح مباشرة بعد الإجراء. مطلوب ضغط قوي لمدة 20 دقيقة على الأقل، وأنه قد يكون مطلوباً لأكثر من 30 دقيقة في بعض الحالات. إذا كان من الملاحظ معتدلة إلى نزيف حاد بعد تطبيق الضغط على الموقع خزعة، يوصي بمواصلة الضغط، والاتصال فورا بطبيب بيطري.

كما الأرقاء عامل مهم للحد من الاعتلال البقر، دراسة واحدة معبأة منصات مرقئ في الموقع خزعة لمراقبة النزيف⁹. ومع ذلك، قد استخدام منصات مرقئ بهذه طريقة مخاطر محتملة عالية للتلوث الميكروبيولوجي في بيئة مزرعة الألبان. آخر دراسة¹⁴ تطبيق الضغط اليدوي للموقع خزعة بين الخزعات المتكررة، وبعد إغلاق خزعة والجلد، والجليد على الموقع على الأقل 2 ح عقب الخزعة. في هذا البروتوكول، قوي الضغط المطبقة على الموقع خزعة لمدة 20 إلى 25 دقيقة كانت كافية للتحكم في النزيف.

تقنية خزعة ناجحة ينبغي أن يسفر عن الحد الأدنى من الدم في الحليب التي استمرت لفترة قصيرة من الوقت بعد هذا الإجراء. لتجنب انقطاع لإفراز الحليب خلال العدوى خيبة أمل والتهاب الضرع اللبن، يجب إزالة الجلطات الدموية إينتراماماري يد تجريد من الربع فحص^10،14. ولوحظ في هذا البروتوكول، الدم في الحليب تصل إلى 48 ساعة بعد الخزعة. بيد في دراسة التي تستخدم عددا أكبر من الحيوانات، لوحظ الدم في اللبن في معظم الأبقار لمدة تقل عن 6 أيام. وأظهر عدد قليل من الحيوانات الدم في اللبن بعد 6 أيام⁸. ولهذا السبب، المراقبة اليومية لظهور الحليب اللازمة لمد 6 بعد هذا الإجراء. الحيوانات لا يحمل أية علامات على الإصابة بالتهاب الضرع عند عينة كبيرة من أنسجة وحصل على¹⁴. بيد أن البحوث السابقة التي يؤديها خزعات متكررة على نفس الحيوان باستخدام إبرة وجد أن حالات الإصابة بالتهاب الضرع وكان ما يقرب من 12% بعد إجراء⁸. في هذا البروتوكول، قد لا الحيوان علامات مرئية من الإصابة بالتهاب الضرع السريري بعد الإجراء. وهناك أيضا طفيف فرصة أن الموقع شق قد يصاب بعد الخزعة.

تولازوليني هيدروكلوريد، دواء الذي عكس آثار التخدير، ينبغي أن تكون متاحة في حالة جرعة زائدة من إكسيلازيني. جرعة مفرطة من إكسيلازيني قد يسبب وذمة الرئة. وتشمل الأعراض الإكلينيكية لذمة رئوية الضائقة التنفسية وضيق التنفس الحاد وصعوبات في التنفس، وسعال والبلغم بروذرز. إذا لوحظت علامات على ذمة رئوية، من المستحسن استخدام تولازيني (من 2 إلى 4 مغ/كغ وزن الجسم) لعكس آثار إكسيلازيني.

ويصف هذا البروتوكول تقنية لإجراء خزعة الإبرة وخزعة الأساسية على حد سواء. بشكل عام، هو الاستفادة من خزعة الأساسية مقارنة بإبرة خزعة عينة (0.75 إلى 1 ز) الأنسجة أكبر⁹ مع الحد الأدنى من تأثير سلبي على الصحة ضرع. خزعة الإبرة أسلوب أقل الغازية من صك خزعة الأساسية. غير أن محاولات متعددة خزعة للحصول على كمية أكبر من الأنسجة باستخدام إجراء خزعة إبرة قد تزيد من خطر النزيف الرئيسية بعد الإجراء، فضلا عن تجلط الدم في الحليب. كلتا الطريقتين تسبب الاعتلال البقر الحد الأدنى وتحققت بسهولة مع قدر ضئيل من التدريب لموظفي العمليات الجراحية. من المتوقع تغيير قصيرة الأجل في إنتاج الحليب اليومي (انخفاض نسبة 8 إلى 10 في المائة) وتكوين⁹ و تخفيض كمية العلف¹⁴ بعد الخزعات الأساسية وابرة، على التوالي. القيود المفروضة على الإجراء خزعة الإبرة هي صغر حجم الأنسجة إزالة مع الإبرة. الصك الذي يحتاج إلى تفعيلها فقط عند الإبرة داخل الأنسجة يتم فحص ومحاولات متعددة غالباً ما تكون ضرورية للحصول على كميات كافية من الأنسجة، مما يزيد من الخطر الدم في الحليب والتهاب الضرع بعد الإجراء. القيود المفروضة على خزعة الأساسية تشمل ارتفاع خطر الإصابة بنزيف بعد هذا الإجراء إذا كانت كمية كبيرة من الأنسجة (> 200 ملغ) يتم الحصول عليها. وبالإضافة إلى ذلك، الأداة خزعة من الصعب تجميع تتطلب التدريب الكافي قبل الاستخدام.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
70% Isopropyl alcohol	Walmart	565106257	1 L
Aerosol spray to kill and repel flies	MWI	14339	1 bottle (if necessary)
Biopsy needles, 12 G × 16 cm	C. R. Bard	MN1216	2
Butterfly infusion set (18 G needle)	Fisher	22-258087	1
Cell culture dishes	Fisher	08-772E	4
Cordless drill (low speed)	Hitachi	DS10DFL	1
Core biopsy instrument, Farr et al. (1996)			2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors.
Cows			cattle healthy
Flunixin meglumine	MWI/VetOne	501018	1.1 to 2.2 mg/kg of body weight
Folding table	Amazon		1
Forceps	Fisher	09-753-50	1
Gloves non-sterile	Fisher	17-200-845	9, size dependent
Hard brush	Sullivan Supply	18270	1, to wash the cows
Head gate			1, customized for dairy cows
Lidocaine hydrochloride 2% injectable	MWI/VetOne	510212	6 mL was used,  from 3 to 8 mL
Livestock body wash	eZall Technologies	39384	1, to wash the cows
Needle 18 G  (1 to 1/5“)	Fisher	14-821-15A	6
Needle 20 G (1 to 1/5“)	Fisher	14-815-526	6
Phosphate buffered saline (0.9%)	Fisher	20-012-043	1 L
Povidone Iodine ointment	Jeffers	#VED1A	500 g (if necessary)
Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine)	MWI/VetOne	510094	1 L
Reusable biopsy instrument	C. R. Bard	MG1522	1
Rope halter	Nasco farm and ranch	C10852	2, cow size
Scalpel blades (#10)	MWI	033870	2
Scalpel holders (#3)	MWI	602008	1
Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in.	Fisher	19-130-0038	1 case of 800
Sterile cotton gauze sponges	Fisher	22-037-986	4
Sterile gauze pads	Fisher	19-090-735	4
Sterile surgical gloves	Surgical gloves	19-166-679	3,  size dependent
Sterile surgical towels	Fisher	50-118-0339	6
Stethoscope	Littmann Master Classic II	1392	1
Surgical clipper	Oster A5	078005-010-003	1, preparation of the animal for biopsy
Surgical clipper blades (#40 )	Oster	78919-016	1, preparation of the animal for biopsy
Surgical staple remover	MWI	541	1
Surgical stapler pre-loaded	MWI	17713	5
Syringes of 10 mL	Fisher	14-823-224	3
Syringes of 2 mL	Fisher	22-028854	3
Syringes of 20 mL	Fisher	22-034507	3
Syringes of 5 mL	Fisher	22-028855	3
Thermometer	Agri-Pro Enterprises Inc	72000	1
Tolazine hydrochloride	Akorn Animal Health	61311-486-10	2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary)
Tweezer	Fisher	14-955-025	1, for handle the tissue sample
Water hose	Miracle-Gro, Walmart	554990501	1, to wash the cows
Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg)	MWI	010728	1 bottle
Xylazine hydrochloride	MWI/VetOne	510650	0.01 to 0.05 mg/kg of body weight