JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يستخدم هذا البروتوكول الببتيدات المختلطة G6PI لبناء نماذج التهاب المفاصل الروماتويدي التي هي أقرب إلى أن من التهاب المفاصل الروماتويدي الإنسان في CD4+ الخلايا التائية وسيتوكينات. تم الحصول على الخلايا التائية القاتلة الطبيعية عالية النقاء (iNKT2 بشكل رئيسي) مع أنماط ظاهرية ووظائف محددة عن طريق الاستقراء في الجسم الحي والتنقية المختبرية للعلاج المناعي بالتبني.

Abstract

التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض المناعة الذاتية الالتهابي المزمن المعقد. يرتبط الإمراض للمرض بخلايا T (iNKT) القاتلة الطبيعية الثابتة. المرضى الذين يعانون من RA النشطة تقديم عدد أقل من الخلايا iNKT, وظيفة الخلية المعيبة, والاستقطاب المفرط من Th1. في هذه الدراسة، تم إنشاء نموذج الحيوانات RA باستخدام خليط من hGPI325-339 وhGPI469-483 الببتيدات. تم الحصول على خلايا iNKT عن طريق الاستقراء في الجسم الحي وتنقية المختبر، تليها ضخ في الفئران RA للعلاج المناعي بالتبني. كشف نظام التصوير في الجسم الحي (IVIS) تتبع أن خلايا iNKT كانت موزعة بشكل رئيسي في الطحال والكبد. في اليوم 12 بعد العلاج بالخلايا ، تباطأ تطور المرض بشكل كبير ، وتم تخفيف الأعراض السريرية ، وزيادة وفرة خلايا iNKT في الغدة الصعترية ، وانخفضت نسبة iNKT1 في الغدة الصعترية ، وانخفضت مستويات TNF-α ، IFN-α ، وIL-6 في انخفض المصل. العلاج المناعي بالتبني من خلايا iNKT استعادة توازن الخلايا المناعية وتصحيح الالتهاب المفرط في الجسم.

Introduction

التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض المناعة الذاتية التي تتميز المزمنة، الغازية التدريجيمع 0.5-1% الإصابة1،2. ويعزى الإمراض الكامنة إلى الانتشار غير الطبيعي للخلايا CD4+ و CD8+ T ، التي تتجلى في زيادة في نسبة CD4+IFN- ο + وCD4+IL - 17A+ الخلايا التائية ، وانخفاض عدد CD4+IL - 4+ وCD4+CD25+FoxP3+ الخلايا التائية. لذلك ، يتم زيادة إفراز السيتوكينات الالتهابية ، ويدمر التفاعل الالتهابي المفرط التوازن الأصلي ووظيفة التسامح في الجهاز المناعي في الجسم. وعلاوة على ذلك، فإن الخلايا اللمفاوية T المساعد (Th) 1 الخلايا التي تخترق المفصل تفاقم الاستجابة الالتهابية وتلف المفاصل. لذلك ، فإن تثبيط الاستجابة الالتهابية المفرطة واستعادة التسامح المناعي والتوازن المناعي هي المفتاح لعلاج RA3،4.

تحتوي خلايا iNKT على كل من وظائف وخصائص الخلية NK وT. خلايا iNKT تأوي مستقبلات خلايا T (TCR) مميزة وثابتة (TCR) α-chain مع TCR α-chain محدود 5وتتعرف على مستضد الجليكوبيد الذي تقدمه الفئة الرئيسية من المعقدة الهيستونتيفية (MHC) I جزيء CD1d على سطح الخلايا التي تقدم المستضد. اكتشف ميتسو وآخرون6 عددًا كبيرًا من خلايا iNKT وعيوبوظيفية في العديد من أمراض المناعة الذاتية، بما في ذلك RA. Aurore وآخرون7 أظهرت أن خلايا iNKT لها تأثير إيجابي على الحفاظ على التسامح المناعة الذاتية وأنه عندما يتم استعادة عدد ووظيفة الخلايا iNKT، يتم تخفيف المرض. وبالإضافة إلى ذلك، وجد ميللوت - غاسو وآخرون8 أن خلايا iNKT لم تقم بإلغاء المرض فحسب، بل زادت أيضا ً من تطور المرض. تشير هذه النتائج المتناقضة إلى أن خلايا iNKT هي خلايا T غير متجانسة ، ويمكن عكس وظيفة المجموعات الفرعية المختلفة. في دراسة سريرية لجمهورية راك، تواتر خلايا iNKT ترتبط مع درجة نشاط المرض9. وأكدت النتائج أيضا أن تواتر iNKT انخفض في مرضى RA، وعدد CD4+IFN-ο+ مجموعات الخلايا T زاد، ومستويات إفراز السيتوكينات الالتهابية IFN-α وTNF-α زيادة10،11. بالإضافة إلى ذلك ، حقق شريف وآخرون12 في مرض السكري من النوع 1 (T1D) ووجدوا أن التسريب الانتقائي لخلايا iNKT أدى إلى زيادة تنظيم التعبير عن السيتوكين الالتهابي IL-4 ، وحافظ على التسامح المناعي ، ومنع تطور مرض السكري من النوع 1. ولذلك، ضخ بالتبني من خلايا iNKT محددة أو التنشيط المستهدف للخلايا iNKT يزيد من مستوى خلايا iNKT في مرضى RA، والتي يمكن أن تكون اختراقا في العلاج RA.

العلاج المناعي الخلوي حاليا من اهتمام كبير، وقد استخدمت على نطاق واسع في علاج السرطان. ومع ذلك، فإن خلايا iNKT هي خلايا نادرة وغير متجانسة للمناعة (فقط 0.3٪ من العدد الإجمالي لمركبات ثنائي الفينيل متعدد البروم)13، مما يحد من التطبيقات السريرية المحتملة. وتنقسم هذه الخلايا أساسا إلى ثلاث مجموعات فرعية: 1) خلايا iNKT1، التي لديها تعبير عال من بروتين البلعوم الببروني بالإصبع الزنك (PLZF) وعامل النسخ T-box (T-bet)؛ 2) خلايا iNKT2 مع التعبير المتوسط من PLZF وجاتا البروتين ملزمة 3 (GATA3)؛ 3) iNKT17 الخلايا مع انخفاض التعبير عن PLZF والرتينويد ذات الصلة مستقبلات نووية يتيمة (ROR) - αt التي تفرز IFN-ο، IL-4، وIL-1714. خلايا iNKT المنشطة تفرز Th1 و Th2 و Th17 مثل السيتوكينات ، والتي تحدد الآثار المناعية المختلفة لخلايا iNKT15. تختلف الآثار المناعية والعلاجالمناعي للتنشيط المحدد لمختلف الفئات السكانية الفرعية لخلايا iNKT. لذلك ، فإن اختيار الأنماط الظاهرية المحددة لخلايا iNKT (بشكل رئيسي iNKT2) مع وظائف مضادة للالتهابات لتنظيم الاستجابة المناعية للجسم يمكن أن يصحح عدم التوازن المناعي والاضطرابات المناعية في RA.

إنشاء نموذج مثالي للحيوانات ذات أهمية كبيرة لعلاج ودراسة الإمراض RA. في الوقت الحاضر ، تشمل النماذج الحيوانية الأكثر استخدامًا ونضجًا التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين ، والتهاب المفاصل المعقّد ، والتهاب المفاصل الناجم عن الزيموسان ، والتهاب المفاصل الناجم عن البوليسكاريد16-17. ومع ذلك ، لا يوجد نموذج يمكن أن يحاكي بشكل كامل جميع ميزات RA الإنسان. النوع الثاني من التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) هو نموذج التهاب المفاصل الكلاسيكي. وكالة المخابرات المركزية هو الناجم عن تحصين الفئران مع النوع الثاني الكولاجين محددة الأجسام المضادة أحادية النسيلة، مما يعكس الاعتماد على الأجسام المضادة لهذا النموذج المرض. وصف Benurs وآخرون نموذجًا مع استجابة مناعية جهازية لـ glucose-6-phosphate isomerase (G6PI) ، والذي يحفز التهاب المفاصل المتماثل المحيطي في سلالات الماوس الحساسة18،19. في هذا النموذج ، يعتمد تطور التهاب المفاصل على الخلايا التائية والخلايا B والمناعة الفطرية18و19و20. وجد Horikoshi21 أن نماذج RA الناتجة عن تحصين فئران DBA/1 بشظايا البولي ببتيد G6PI هي أكثر تشابهًا مع RA البشري من حيث خلايا CD4+ T والسيتوكينات (أي IL-6 و TNF-α) من نماذج وكالة الاستخبارات المركزية. من أجل زيادة التأثير المحفز على موقع التعرف على TCR ، تم استخدام شظايا البولي ببتيد المختلطة من G6PI (hGPI325-339 و hGPI469-483) لتحصين فئران DBA/1 لبناء نموذج الماوس RA. يمكن أن يكون معدل نجاح هذا النهج مرتفعًا لأن hGPI325-339 و hGPI469-483 هما مناعيان مهيمنان لاستجابات الخلايا التُوتية المقيدة I-A. لذلك ، يمكن لهذا النموذج محاكاة الانتشار المفرط لخلايا CD4+ T وعيوب خلايا iNKT في مرضى RA22. وضعت الأبحاث الأساسية لعلم الأمراض المناعية RA الأساس لمزيد من التحقيق المتعمق.

Protocol

كانت جميع الفئران التجريبية (150 في المجموع) من الذكور الأصحاء DBA/1 الفئران، 6-8 أسابيع من العمر (20.0 ± 1.5 غرام)، تربى في بيئة محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF). لا توجد معاملة خاصة قبل النمذجة. تم تقسيم التجربة إلى مجموعة تحكم صحية (15 فأرًا) ومجموعة تحكم نموذجية (15 فأرًا) ومجموعة علاج بالخلايا (55 فأرًا). تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية الحيوان والأخلاق في جامعة خبى.

1- بناء نموذج المرض

  1. تكرار نموذج الحيوانات RA
    1. تزن 1.75 ملغ من كل من hG6PI 325-339 وhG6PI 469-483 شظايا وتذوب لهم في 5.25 مل من 4 درجة مئوية الماء المقطر الثلاثي.
    2. حل الكامل Fdjuvant Freund (CFA) في حمام مائي 50 درجة مئوية، ورسم 5.25 مل في آخر 10 مل أنبوب الطرد المركزي، وتبريده للاستخدام.
    3. وضع خليط من حل hG6PI وحل CFA في وحدة مستحلب اصطناعية مع اثنين من محاقن الزجاج متصلة.
    4. ادفع الحقنة بسرعة ووتيرة ثابتة من 10-20 x في دقيقة واحدة لاستحلاب محلول الببتيد المختلط وحل CFA تمامًا. قم بإجراء العملية في حمام جليدي ، والحفاظ على قطرات المستحلب في الماء لمدة 10 دقيقة بعد الانتهاء من الاستحلاب دون تشتيت.
    5. حقن 150 ميكرولتر من hG6PIs مستحلب في جذر ذيل الماوس تحت الجلد.
    6. حقن 200 ملغ من السم Pertussis في داخل بيت التسوى في 0 ساعة و 48 ساعة بعد حقن hG6PI.
  2. التحقق التجريبي من نموذج RA
    1. قياس سمك مخلب الماوس مع الفرجار فيرنييه (2x في اليوم).
    2. مراقبة وتمييز درجة احمرار وتورم القدم. استخدام معايير التهديف التالية: 1) أُبُل القدم ينتبّأ عليها تورم خفيف؛ 2) pedis دورسوم ووسادة القدم مع تورم أحمر واضح؛ 3) الكاحل مع تورم أحمر.
    3. القتل الرحيم الفئران تحت التخدير العميق عن طريق الحقن داخل البرابيتون من 1٪ بنتوباربيتال الصوديوم (50 ملغ / كغ وزن الجسم) 14 يوما بعد النمذجة وإزالة الكفوف لتلطيخ HE.
    4. تحديد مستويات إفراز المصل IL-2، IL-4، IL-6، IL-10، IL-17A، TNF-α، وIFN-α باستخدام مجموعة من الخلايا التجارية (CBA) تحليل وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.

2. الحصول على خلايا iNKT مع العلاج الخلوي بالتبني

  1. الحث الاتجاهي لخلايا iNKT
    1. حقن الفئران العادية داخل النُقَل مع α-GalCer (0.1 ملغم/كغ من وزن الجسم).
  2. عزل خلايا iNKT
    1. بعد ثلاثة أيام من النمذجة، حقن الفئران داخل بيت سليطانلي مع 1٪ بنتوباربيتال الصوديوم (50 ملغ /كجم من وزن الجسم) للحُسان. الفئران المنهوبة بشكل كاف لا تظهر استجابة انسحاب مخلب هند لقرصة إصبع القدم.
    2. عزل الطحال من الماوس DBA/1 بعد حقنه داخل الانضد مع α-GalCer. إعداد تعليق خلية واحدة عن طريق قطع وطحن الطحال في منخل شبكة 200.
    3. غسل تعليق الخلية مع برنامج تلفزيوني، والطرد المركزي في 200 × ز لمدة 5 دقيقة، وتجاهل supernatant. كرر.
    4. إعادة تعليق الخلايا مع 1 مل من محلول تخفيف الدم والأنسجة الكاملة. إضافة 3 مل من الماوس وسط فصل اللمفاوية، ومن ثم طرد مركزي الخلايا لمدة 20 دقيقة في 300 × ز في درجة حرارة الغرفة.
    5. جمع طبقة من الخلايا الليمفاوية البيضاء حليبي (أي، الطبقة الثانية من أعلى)، وغسلها 2x مع برنامج تلفزيوني، والعد مع عداد الخلية الآلي.
  3. المغناطيسي فرز الخلايا المنشط (MACS) استراتيجية اختيار إيجابية لتنقية خلايا iNKT
    ملاحظة: بالنسبة للمعالجة المسبقة لرباعيات CD1d، تم تخفيف 1 ملغم/مل من α-Galcer إلى 200 ميكروغرام/مل مع 0.5٪ من Tween-20 و 0.9٪ من NaCl، وأضيف 5 μL من المحلول الناتج إلى 100 ميكرولتر من محلول رباعي الترايمر CD1d. تم احتضان الخليط لمدة 12 ساعة في درجة حرارة الغرفة ووضعها في 4 درجة مئوية للاستخدام. تم تخفيف TCR α 80x مع الماء المنزوع الأيونات. تم استخدام جميع الأجسام المضادة الأخرى كحل للمخزون.
    1. إعادة تعليق 107 خلايا مع 100 ميكرولتر من 4 درجة مئوية PBS، إضافة 10 ميكرولتر من α-GalCer تحميل CD1d Tetramer-PE، واحتضانها في 4 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة في الظلام.
    2. غسل الخلايا 2x مع برنامج تلفزيوني وإعادة تعليقها في 80 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني.
    3. أضف 20 ميكرولتر من الميكروبات المضادة للPE واحتضانها عند 4 درجات مئوية لمدة 20 دقيقة في الظلام.
    4. غسلها 2x مع برنامج تلفزيوني وإعادة تعليق الخلايا مع 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني.
    5. ضع عمود الفرز في المجال المغناطيسي لماكينة فرز MACS وشطفه بـ 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني.
    6. إضافة تعليق الخلية من الخطوة 2.3.4 إلى عمود الفرز، وجمع flowthrough، وشطف 3x مع المخزن المؤقت PBS.
    7. قم بإزالة المجال المغناطيسي واجمع الخلايا من عمود الفرز. عند هذه النقطة، إضافة 1 مل من PBS المخزن المؤقت إلى عمود الفرز، ودفع بسرعة المكبس في ضغط مستمر لدفع الخلايا المسماة إلى أنبوب جمع والحصول على خلايا iNKT تنقية. العد مع عداد الخلية الآلي.
  4. تعريف النمط الظاهري لخلية iNKT
    1. اتخاذ 1 × 106 خلايا من الخطوات 2.2.5 و 2.3.7 ، على التوالي ، وإعادة تعليقها في 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني.
    2. حضانة الأجسام المضادة: لا تضيف الجسم المضاد إلى أنبوب التحكم السلبي، أضف 0.5 ميكرولتر من α-GalCer-PE-CD1d Tetramer أو 10 ميكرولتر من FITC-TCR α في أنبوب التحكم الإيجابي الوحيد. أضف 0.5 ميكرولتر من رباعي ة α-GalCer-PE-CD1d و10 ميكرولتر من FITC-TCR α في أنبوب العينة. احتضان لهم في 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة في الظلام.
    3. غسل الخلايا في برنامج تلفزيوني ومن ثم الطرد المركزي في 200 × ز لمدة 5 دقيقة.
    4. تجاهل supernatant، إضافة 1 مل من Foxp3 Foxp3 Foxp/Permeabilization حل العمل، واحتضان الخلايا لمدة 45 دقيقة في 4 درجة مئوية في الظلام.
    5. إضافة 1 مل من 1x Permeabilization حل العمل المخزن المؤقت والطرد المركزي الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 500 × ز في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقيقة.
    6. تجاهل السوبرناستانت. أضف 1 ميكرولتر من أليكسا فلور 647 فأر مضاد لـ PLZF و 1 ميكرولتر من PerCP-Cy 5.5 الماوس المضاد ة T-bet (أو 1 ميكرولتر من PerCP-Cy 5.5 الماوس المضاد ة RORАt) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
    7. إضافة إلى 2 مل من Permeabilization حل العمل المخزن المؤقت للتنظيف.
    8. تجاهل supernatant، resuspend الخلايا في 500 ميكرولتر من PBS، وقياس عن طريق تدفق القياس الخلوي.
  5. التعرف الوظيفي لخلايا iNKT
    1. خذ 3 × 106 خلايا iNKT من الخطوة 2.3.7 وإعادة تعليقها في 12 لوحة بئر مع 1.5 مل من RPMI-1640 متوسطة غير مكتملة (أي بدون مصل).
    2. إضافة phorbol استر (PMA, 50 نانوغرام/مل) والكالسيوم الأيونومين (IO, 1 ميكروغرام/مل) ووضعها في حاضنة CO2 لمدة 24 ساعة.
    3. جمع supernatant الخلية والكشف عن مستويات إفراز IL-2، IL-17A، TNF-α، IL-6، IL-4، IFN-ο، وIL-10 باستخدام إجراء CBA التجارية وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.
  6. دراسة تجريبية حول مسار هجرة خلايا iNKT في فئران RA
    1. حل صبغة DiR (2.5 ملغم/مل) في DMSO.
    2. Resuspend خلايا iNKT في 6 لوحات جيدا مع RPMI-1640 متوسطة غير مكتملة. الكثافة هي 1 × 106 خلايا / مل.
    3. إضافة DiR (5 ميكروغرام / مل) الحل واحتضان في حاضنة CO2 لمدة 25 دقيقة.
    4. غسل مع PBS وإعادة تعليق الخلايا (3 × 106/ 300 μL) للحصول على DiR المسمى خلايا iNKT (DiR-iNKT).
    5. حقن 1٪ بنتوباربيتال الصوديوم (50 ملغ / كغ وزن الجسم) داخل البابينتين لحقن الفئران. الفئران المنهوبة بشكل كاف لا تظهر انسحاب مخلب هند لقرصة إصبع القدم. تطبيق مرهم البيطرية على عيون الماوس لمنع جفاف بينما تحت التخدير للتصوير.
    6. حقن خلايا DiR-iNKT 3 × 106 لكل فأرة في الوريد الذيل مع نموذج RA لمدة 8 أيام. مراقبة خلايا iNKT في الفئران بعد الحقن لمدة 0 دقيقة و 10 دقيقة و 30 دقيقة و 60 دقيقة ويوم 0 (بعد 3 ح) و 1 و 3 و 6 و 12 و 26 و 34 و 38 و 42 يومًا باستخدام الحيوان الصغير في نظام التصوير الحي (IVIS). وكان الطول الموجي للإثارة المستخدم748 نانومتر، وكان الطول الموجي للانبعاثات 780 نانومتر، وكان وقت التعرض تلقائيًا.
    7. وضع كل ماوس في قفص منفصل بعد كل ملاحظة والحفاظ على recumbency القص. لاحظ حتى الشفاء من التخدير.

3. تقييم العلاج المناعي بالتبني من الفئران RA مع خلايا iNKT

  1. iNKT خلية العلاج المناعي بالتبني للفئران RA
    1. حقن 3 × 10خلايا خلايا iNKT لكل فأرة من خلال الوريد الذيل. حدد عشوائيا 15 الفئران التي تم على غرار 8 أيام قبل والحصول على خلايا iNKT دون وضع العلامات DiR من الخطوة 2.3.7 عن طريق ضخ الوريد الذيل.
  2. تقييم فعالية العلاج المناعي بالتبني لخلايا iNKT.
    1. قياس سمك مخلب الماوس، وتحديد حجم تورم مفصل الكاحل، ويسجل بشكل منهجي بعد ضخ خلايا iNKT كما هو موضح في الخطوات 1.2.1-1.2.2.
    2. مراقبة تسلل الخلايا الالتهابية والتغيرات المشتركة للمفاصل الماوس كما هو موضح في الخطوة 1.2.3.
    3. تحديد مستويات إفراز IL-2، IL-4، IL-6، IL-10، IL-17A، TNF-α، وIFN-α كما هو موضح في الخطوة 1.2.4.
  3. تحديد تكرار الخلايا والمجموعات الفرعية iNKT.
    1. عزل الغدة الصعترية الماوس وإعداد تعليق خلية واحدة.
    2. فصل الخلايا اللمفاوية مع سائل فصل الخلايا الليمفاوية.
    3. تحديد تردد الخلية iNKT وتردد المجموعة الفرعية كما هو موضح في الخطوة 2.4.
  4. التحليل الإحصائي
    ملاحظة: يتم تقديم جميع البيانات على أنها متوسط ± SD. تم اعتبار قيم P < 0.05 ذات دلالة إحصائية.
    1. استخدم تحليل عامل واحد للتباين (ANOVA). إذا كان التباين مستوفياً، استخدم اختبار LSD لمزيد من المقارنة.
    2. إذا لم يكن التباين موحدًا، فاستخدم الاختبار غير البارامتري. استخدام اختبار Kruskal-Wallis H لمزيد من المقارنة31.

النتائج

درجة مؤشر التهاب المفاصل وسمك مخلب زاد بعد النمذجة. بالمقارنة مع مجموعة التحكم ، بدأت أقدام مجموعة نموذج RA تظهر تورمًا أحمر في 6 أيام بعد النمذجة ، مع تفاقم تدريجي. في 14 يوما، بلغ التورم الأحمر في مفصل الكاحل ذروته، يليه تخفيف تدريجي. سمك مخلب تغيرت بالمثل(P < 0.05)(الشكل 1).<...

Discussion

خلايا iNKT هي خلايا T خاصة تسد المناعة الفطرية والتكيفية ويتم تطويرها بشكل رئيسي من CD4++/ CD8+ thymocytes. خلايا iNKT لديها وظائف متنوعة المناعة التنظيمية وتتفاعل مع الخلايا المناعية الأخرى عن طريق الاتصال المباشر وإفراز السيتوكينات المختلفة23، مما يؤثر على الخلا...

Disclosures

ولا يعلن أصحاب البلاغ عن أي تمويل أو تضارب في المصالح.

Acknowledgements

تم دعم دراستنا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC) (81771755) ، والكليات والجامعة العلمية والتكنولوجية مشروع البحوث الرئيسية في مقاطعة خبى (ZD2017009) ومختبر الحيوان من مركز التجارب الطبية ، جامعة خبى. ونحن ممتنون لدعمهم.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZFBD563490America
Anti-PE MicroBeadsMiltenyi130-048-801Germany
ColumnsMiltenyiMSGermany
Cryogenic CentrifugeBeckmanAllegra® X-15RAmerica
DiRThermo Fisher ScientificD12731America
Embedding CenterTianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.BMJ-1China
FITC Hamster Anti-Mouse TCR β ChainBD553170America
Flow cytometerBDAccuri C6America
Freund's complete adjuvantSigmaF5881America
hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)Karebay Biochem18062202China
hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)Karebay Biochem18062203China
In Vivo Imaging SystemPerkinElmercaliper IVIS lumina IIAmerica
Ionomycin CalciumCayman10004974America
KRN7000AdipoGenAG-CN2-0013America
Mouse CD1d Tetramer-PEMBLTS-MCD-1Japan
Mouse percollSolarbioP8620China
Optical MicroscopeOlympusOlympus-IIJapan
PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-ϒtBD562683America
PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-betBD561316America
Pertussis toxinSigmaP7208America
phorbol estersCayman10008014America
Red Blood Cell Lysis BufferBD555899America
RPMI-1640Biological Industries01-100-1ACSIsrael
Th1/Th2/Th17 cytokines kitBD560485America
UltramicrotomeLeicaLeica EM UC6Germany

References

  1. Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0 (2010).
  2. Cross, M., et al. The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study. Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).
  3. Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queiróz Cunha, F. D., Ulloa, L. From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis. Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).
  4. Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions. Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).
  5. Bianca, B. S. Unraveling Natural Killer T-Cells Development. Frontiers in Immunology. 8, 1950 (2018).
  6. Mitsuo, A., et al. Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases. Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).
  7. Miellot, A., et al. Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway. European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).
  8. Miellot-Gafsou, A., et al. Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment. Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).
  9. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  10. Ming, M., et al. Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b. Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).
  11. Ming, M., et al. Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-γ/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis. Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).
  12. Sharif, S., et al. Activation of natural killer T cells by α-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes. Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).
  13. Gapin, L. Development of invariant natural killer T cells. Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).
  14. Kwon, D. I., Lee, Y. J. Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells. Immune Network. 17 (6), (2017).
  15. Thapa, P., et al. The differentiation of ROR-γt expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1. Scientific Reports. 7 (1), 7018 (2017).
  16. Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-γ. Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).
  17. Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis. Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).
  18. Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice. Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).
  19. Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase. Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).
  20. Kamradt, T., Schubert, D. The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis. Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).
  21. Horikoshi, M., et al. Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand α-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis. PlosOne. 7 (12), 51215 (2012).
  22. Zhang, X. J., et al. Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice. Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).
  23. Motohashi, S., Nakayama, T. Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer. Immunotherapy. 1 (1), 73 (2017).
  24. Jung, S., et al. The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis. Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).
  25. Luc, V. K., Lan, W. Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity. Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).
  26. Chiba, A., et al. Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of α-galactosylceramide. Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).
  27. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  28. Bruns, L., et al. Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice. Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).
  29. Parietti, V., et al. Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis. Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).
  30. Yoshida, Y., et al. Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model. Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).
  31. Chen, D., et al. Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells. International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

155 iNKT 6 isomerase G6PI IVIS

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved