In This Article

Summary

Этот протокол использует G6PI смешанные пептиды для построения ревматоидных моделей артрита, которые ближе к модели человеческого ревматоидного артрита в CD4и Т-клеток и цитокинов. Высокая чистота инвариантных естественных киллеров Т-клеток (главным образом iNKT2) со специфическими фенотипами и функциями были получены путем индукции in vivo и в пробирке для очищения для приемной иммунотерапии.

Abstract

Ревматоидный артрит (РА) является сложным хроническим воспалительным аутоиммунным заболеванием. Патогенез заболевания связан с инвариантными естественными клетками-убийцами Т (iNKT). Пациенты с активной РА представляют меньше iNKT клеток, дефектной функции клеток, и чрезмерная поляризация Th1. В этом исследовании, модель РА животных была создана с использованием смеси gpI325-339 и hGPI469-483 пептидов. Клетки iNKT были получены индукцией in vivo и очисткой in vitro, а затем настой в мышей РА для приемной иммунотерапии. Система обработки in vivo (IVIS) показала, что клетки iNKT в основном распределяются в селезенке и печени. На 12 день после клеточной терапии прогрессирование заболевания значительно замедлилось, клинические симптомы были смягчены, обилие клеток iNKT в тимусе увеличилось, доля iNKT1 в тимусе снизилась, а уровни ТНФ-З, IfN-Q и IL-6 в сыворотка уменьшилась. Приемная иммунотерапия клеток iNKT восстановила баланс иммунных клеток и исправила чрезмерное воспаление организма.

Introduction

Ревматоидный артрит (РА) является аутоиммунным заболеванием, характеризующимся хронической, прогрессирующей инвазивностью с частотой 0,5-1%1,2. Основной патогенез связан с аномальным распространением аутореактивныхCD4 иCD8 - Т-клеток, проявляющихся в увеличении доли CD4иIFN-Q иCD4- IL-17A- Т-клеток, а также уменьшенного числа CD4-ИЛ-4 и CD4 -CD25-FoxP3- Т-клеток. Поэтому секреция воспалительных цитокинов усиливается, а чрезмерная воспалительная реакция разрушает родной баланс и функцию толерантности иммунной системы организма. Кроме того, помощник Т-лимфоцитов (Т) 1 клетки, которые проникают в сустав, усугубляют воспалительные реакции и повреждения суставов. Таким образом, ингибирование чрезмерной воспалительной реакции и восстановление иммунной толерантности и иммунного баланса являются ключевыми для лечения РА3,4.

Ячейки iNKT имеют функции и характеристики НК-клеток и Т-клеток. Клетки iNKT питают различный, инвариантный Т-клеточный рецептор (TCR) - цепь с ограниченным репертуаром TCR и цепи5 и распознают гликолипидный антиген, представленный основным комплексом гистосовместимости (MHC) молекулы CD1d класса CD1d на поверхности антиген-представляя клеток. Mitsuo et al.6 обнаружили большое количество клеток iNKT и функциональные дефекты во многих аутоиммунных заболеваниях, включая РА. Aurore et al.7 продемонстрировали, что клетки iNKT оказывают положительное влияние на поддержание аутоиммунной толерантности и что при восстановлении количества и функции клеток iNKT болезнь облегчается. Кроме того, Miellot-Gafsou et al.8 обнаружили, что клетки iNKT не только анонсировали болезнь, но и увеличили прогрессирование заболевания. Эти противоречивые результаты свидетельствуют о том, что iNKT-клетки являются неоднородными Т-клетками, и функция различных подмножеств может быть обращена вспять. В клиническом исследовании РА частота клеток iNKT коррелирует со счетом активности заболевания9. Результаты также подтвердили, что частота iNKT была снижена у пациентов РА, количество CD4иIFN-я Т-клеток подмножества увеличились, и секреторные уровни воспалительных цитокинов IFN-я и TNF-я увеличилось10,11. Кроме того, Шариф и др.12 исследовали диабет типа 1 (T1D) и обнаружили, что селективный вливание клеток iNKT upregulated выражение воспалительного цитокина IL-4, поддерживаетиммунную толерантность, и предотвратить развитие диабета типа 1. Таким образом, приемная инфузия специфических клеток iNKT или целевая активация клеток iNKT повышает уровень клеток iNKT у пациентов РА, что может стать прорывом в лечении РА.

Клеточная иммунотерапия в настоящее время представляет большой интерес и широко используется в терапии рака. Тем не менее, iNKT клетки редки, неоднородные иммунорегуляторные клетки (только 0,3% от общего числа ПБМК)13, что ограничивает потенциальное клиническое применение. Эти клетки в основном делятся на три субпопуляции: 1) клетки iNKT1, которые имеют высокое выражение промиелоцитарного белка цинка-пальца (ПЛЗФ) и коэффициент акрипции Т-бокса (T-bet); 2) iNKT2 клетки с промежуточным выражением ПЛЗФ и связывающего белка GATA 3 (GATA3); 3) iNKT17 клетки с низкой экспрессией ПЛЗФ и ретиноидных связанных сирот ядерных рецепторов (ROR)-Зт, которые выделяют IFN-Я, IL-4, и IL-1714. Активированные клетки iNKT выделяют Th1, Th2 и Th17-подобные цитокины, которые определяют различные иммуномодулирующие эффекты клеток iNKT15. Иммуномодулирующие и иммунотерапевтические эффекты специфической активации различных субпопуляций клеток iNKT различны. Поэтому выбор специфических фенотипов клеток iNKT (главным образом iNKT2) с противовоспалительными функциями для регулирования иммунного ответа организма может исправить иммунный дисбаланс и иммунные расстройства в РА.

Создание идеальной модели животного имеет большое значение для лечения и изучения патогенеза РА. В настоящее время наиболее часто используемые и зрелые модели животных включают коллагена индуцированного артрита, адъювантного артрита, zymosan-индуцированного артрита, и полисахарид индуцированный артрит16-17. Тем не менее, нет модели, которая может полностью имитировать все особенности человека РА. Тип II коллагена индуцированного артрита (ЦРУ) является классической моделью артрита. ЦРУ индуцируется иммунизации мышей с типом II коллагена конкретных моноклональных антител, отражающих зависимость антител этой модели заболевания. Бенус и др. описал модель с системным иммунным ответом на глюкозу-6-фосфат изомеразу (G6PI), которая вызывает периферический симметричный полиартрит в восприимчивых штаммов мыши18,19. В этой модели развитие артрита зависит от Т-клеток, В-клеток и врожденного иммунитета18,19,20. Horikoshi21 обнаружил, что модели РА в результате иммунизации мышей DBA/1 с фрагментами полипептида G6PI больше похожи на человеческие РА с точки зрения CD4и Т-клеток и цитокинов (т.е. IL-6 и TNF-я), чем модели ЦРУ. Для усиления стимулирующего эффекта на сайте распознавания TCR смешанные полипептидные фрагменты G6PI (hGPI325-339 и hGPI469-483) были использованы для иммунизации мышей DBA/1 для построения модели мыши РА. Уровень успеха этого подхода может быть высоким, потому что hGPI325-339 и hGPI469-483 являются иммунодоминирующими для I-A q-ограниченных Т-клеток ответов. Таким образом, эта модель может имитировать чрезмерное распространение CD4и Т-клеток и дефектов клеток iNKT у пациентов РА22. Фундаментальные исследования иммунопатологии РА заложили основу для нашего дальнейшего углубленного исследования.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

Все экспериментальные мыши (всего 150) были здоровыми мышами DBA/1, 6-8 недель (20,0 и 1,5 г), выращенных в специфической среде, свободной от патогенов (SPF). Существует нет специального лечения до моделирования. Эксперимент был разделен на здоровую контрольную группу (15 мышей), модельную контрольную группу (15 мышей) и группу клеточной терапии (55 мышей). Это исследование было одобрено Комитетом по защите животных и этике Университета Хэвэя.

1. Построение модели болезни

  1. Дублирование модели животных РА
    1. Взвесьте 1,75 мг обоих hG6PI 325-339 и hG6PI 469-483 фрагментов и растворите их в 5,25 мл 4 градуса Цельсия тройной дистиллированной воды.
    2. Растворите полный адъювант Фрейнда (CFA) в водяной бане 50 градусов по Цельсию, нарисуйте 5,25 мл в еще одну центрифугу мощностью 10 мл и охладите ее для использования.
    3. Поместите смесь раствора hG6PI и раствора CFA в искусственный эмульсионный блок с двумя стеклянными шприцев.
    4. Нажмите шприц с постоянной скоростью и частотой 10-20x на мин, чтобы полностью эмульгировать смешанный пептидный раствор и cfA раствор. Выполните операцию в ледяной ванне, и держать эмульсии капель в воде в течение 10 минут после завершения эмульгации без разгона.
    5. Введите 150 л эмульгированных hG6PIs в хвостовой корень мыши подкожно.
    6. Впрысните 200 мг токсина котуса в мышь интраперитонена на 0 ч и 48 ч после инъекции hG6PI.
  2. Экспериментальная проверка модели РА
    1. Измерьте толщину лапы мыши с помощью калипера Вернье (2 раз в день).
    2. Наблюдайте и отмечайте степень покраснения и отеки стопы. Используйте следующие критерии оценки: 1) носы с легким отеком; 2) дисс и подножка для ног с прозрачным красным отеком; 3) лодыжка с красным отеком.
    3. Эвтаназия мышей под глубокой анестезией путем интраперитонеальной инъекции 1% пентобарбитала натрия (50 мг/кг массы тела) через 14 дней после моделирования и удалить лапы для окрашивания HE.
    4. Определите уровни секреции сыворотки IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-я и IFN-з с помощью коммерческого цитометрического массива бисера (CBA) в соответствии с протоколом производителя.

2. Получение iNKT клеток с приемной клеточной терапии

  1. Направленная индукция iNKT-клеток
    1. Вводят нормальных мышей интраперитонеально с помощью q-GalCer (0,1 мг/кг массы тела).
  2. Изоляция iNKT-клеток
    1. Через три дня после моделирования, вводят мышей интраперитоневом с 1% пентобарбитала натрия (50 мг/кг массы тела) для анестезии. Адекватно обезвлечимых мышей не показывают заднюю лапу вывода ответ на нос щепотку.
    2. Изолировать селезенку мыши DBA/1 после введения ее интраперитонеально с помощью q-GalCer. Подготовка одной подвески ячейки путем резки и шлифования селезенки в 200 сетки сито.
    3. Вымойте суспензию клетки с PBS, центрифуга на 200 х г в течение 5 мин, и отказаться от супернатанта. Повторите.
    4. Приостановите работу клеток с 1 мл цельной крови и раствором разбавления тканей. Добавьте 3 мл мышиной среды разделения лимфоцитов, а затем центрифугите клетки в течение 20 мин при температуре 300 х при комнатной температуре.
    5. Соберите слой молочно-белых лимфоцитов (т.е. второго слоя сверху), промойте его в 2 x с помощью PBS и посчитайте с помощью автоматизированного счетчика клеток.
  3. Магнитная активированная сортировка клеток (MACS)положительная стратегия отбора для очистки клеток iNKT
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для предварительной обработки тетрамеров CD1d, 1 мг/мл из к-Galcer был разбавлен до 200 мкг/мл с 0,5% Tween-20 и 0,9% NaCl, и 5 qL результирующего раствора был добавлен в 100 л раствора тетрамер CD1d. Смесь была инкубирована в течение 12 ч при комнатной температуре и помещена при 4 градусах Цельсия для использования. ТКР был разбавлен в 80раз деионизированной водой. Все остальные антитела были использованы в качестве акционерного раствора.
    1. Отрептить 107 ячеек с 100 qL 4 C PBS, добавить 10 qL из q-GalCer-загруженных CD1d Tetramer-PE, и инкубировать их при 4 кС в течение 15 минут в темноте.
    2. Вымойте клетки 2x с PBS и повторно их в 80 Зл Л PBS.
    3. Добавьте 20 qL анти-PE-MicroBeads и инкубировать их при 4 градусах по Цельсию в течение 20 минут в темноте.
    4. Вымойте их 2x с PBS и resuspend клетки с 500 Зл Л PBS.
    5. Поместите сортировочную колонку в магнитное поле сортировки MACS и промыть 500 зл и сортировки PBS.
    6. Добавьте суспензию ячейки со ступени 2.3.4 к столбце сортировки, соберите проходной и прополните 3x буфером PBS.
    7. Удалите магнитное поле и соберите ячейки из сортировочных столбцов. В этот момент добавьте 1 мл буфера PBS в столбец сортировки и быстро надавите поршень при постоянном давлении, чтобы загнать маркированные ячейки в трубку для сбора и получить очищенные iNKT-клетки. Рассчитывайте с помощью автоматического счетчика ячейки.
  4. Идентификация фенотипа клеток iNKT
    1. Возьмите 1 х 106 ячеек из шагов 2.2.5 и 2.3.7, соответственно, и повторно их в 50 Л PBS.
    2. Инкубация антител: Не добавляйте антитела в отрицательную контрольную трубку, добавляйте 0,5 л из й-GalCer-PE-CD1d Tetramer или 10 л FITC-TCR в одной положительной контрольной трубке. Добавьте в образец трубки 0,5 л тетрамера и 10 зл FITC-TCR. Инкубировать их при 4 градусах по Цельсию в течение 30 минут в темноте.
    3. Вымойте клетки в PBS, а затем центрифуга на 200 х г в течение 5 мин.
    4. Откажитесь от супернатанта, добавьте 1 мл рабочего раствора Foxp3 Foxation/Permeabilization и инкубация клеток в течение 45 минут при 4 градусах Цельсия в темноте.
    5. Добавьте 1 мл 1x пермякового буферного рабочего раствора и центрифугите клетки при комнатной температуре 500 х г при комнатной температуре в течение 5 мин.
    6. Отбросьте супернатант. Добавьте 1 qL Alexa Fluor 647 мышь Anti-PL-F и 1 зл и 1 л PerCP-Cy 5.5 мышь анти-T-bet (или 1 Зл PerCP-Cy 5.5 мышь анти-ROR) в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте.
    7. Добавьте к 2 мл рабочего решения Permeabilization Buffer для очистки.
    8. Откажитесь от супернатанта, отрепримите клетки в 500 Л PBS и измерьте цитометрией потока.
  5. Функциональная идентификация клеток iNKT
    1. Возьмите 3 х 106 iNKT-ялки со ступени 2.3.7 и повторно применяйте их в 12 колодцах с 1,5 мл неполной среды RPMI-1640 (т.е. без сыворотки).
    2. Добавьте форбол эстер (PMA, 50 нг/мл) и иономицин кальций (IO, 1 мкг/мл) и поместите в инкубатор CO2 на 24 ч.
    3. Соберите супернатант ячейки и обнаружите уровни секреции ИЛ-2, Ил-17А, ТНФ-З, Ил-6, Ил-4, ИФН-З и Ил-10 с помощью коммерческого асссеа ЦБА в соответствии с протоколом производителя.
  6. Экспериментальное исследование пути миграции клеток iNKT у мышей РА
    1. Растворите краситель DiR (2,5 мг/мл) в DMSO.
    2. Resuspend iNKT-клетки в 6 скважинных пластинах с неполной средой RPMI-1640. Плотность составляет 1 х 106 ячеек/мл.
    3. Добавить раствор DiR (5 мг/мл) и инкубировать в инкубатор CO2 в течение 25 минут.
    4. Вымойте с PBS и повторной приостановки клеток (3 х 106/300 Л) для получения DiR-маркированных iNKT ячеек (DiR-iNKT).
    5. Вводят 1% пентобарбитала натрия (50 мг/кг массы тела) интраперитонеально для обезболиливания мышей. Адекватно обезвлечимых мышей не показывают заднюю лапу вывода на нос ущипнуть. Нанесите ветеринарную мазь на глаза мыши, чтобы предотвратить сухость в то время как под наркозом для визуализации.
    6. Впрысните клетки DiR-iNKT 3 x 106 на мышь в хвостовую вену с моделью RA в течение 8 дней. Мониторинг iNKT клеток у мышей после инъекции в течение 0 мин, 10 мин, 30 мин, 60 мин, и день 0 (после 3 ч), 1, 3, 6, 12, 26, 34, 38, и 42 дней с помощью небольшого животного in vivo системы визуализации (IVIS). Используемая длина волн возбуждения составила 748 нм, длина волны эмиссии - 780 нм, а время экспозиции было автоматическим.
    7. Поместите каждую мышь в отдельную клетку после каждого наблюдения и поддерживать строгое recumbency. Наблюдайте до выздоровления после наркоза.

3. Оценка приемной иммунотерапии мышей РА с клетками iNKT

  1. iNKT клеточная приемная иммунотерапия для мышей РА
    1. Впрысните 3 x 106 ячеек iNKT на мышь через хвостовую вену. Случайно выберите 15 мышей, которые были смоделированы за 8 дней до этого, и получите iNKT-клетки без маркировки DiR с шага 2.3.7 настой хвостовой вена.
  2. Оцените эффективность приемной иммунотерапии для клеток iNKT.
    1. Измерьте толщину лапы мыши, количественно очеловечить голеностопный сустав и систематически оценка после вливания клеток iNKT, как описано в шагах 1.2.1-1.2.2.
    2. Наблюдайте за инфильтрацией воспалительных клеток и изменениями суставов суставов суставов мыши, как описано в шаге 1.2.3.
    3. Определите уровни секреции Ил-2, Ил-4, Ил-6, Ил-10, Ил-17А, ТНФ-З и ИФН-З, как описано в шаге 1.2.4.
  3. Определите частоту iNKT-клеток и подмножеств.
    1. Изолировать тимус мыши и подготовить одну ячейку подвески.
    2. Отделите лимфоциты с жидкостью разделения лимфоцитов.
    3. Определите частоту и частоту клеток iNKT, описанную в шаге 2.4.
  4. Статистический анализ
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все данные представлены в виде средних значений SD. Значения P qlt; 0,05 были сочтены статистически значимыми.
    1. Используйте однофакторный анализ дисперсии (ANOVA). Если отклонение удовлетворено, используйте тест ЛСД для дальнейшего сравнения.
    2. Если дисперсия не однородна, используйте непараметрический тест. Используйте тест Kruskal-Wallis H для дальнейшего сравнения31.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Оценка индекса артрита и толщина лапы увеличились после моделирования. По сравнению с контрольной группой, на лицах группы моделей РА начал проявляться красный отек через 6 дней после моделирования, с постепенным обострением. В 14 дней, красный отек в голеностопном суставе достиг своего...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

iNKT-клетки представляют собой специальные Т-клетки, которые преодолевают врожденный и адаптивный иммунитет и в основном развиваются из CD4,CD8и тимоцитов. клетки iNKT обладают разнообразными иммунорегуляторными функциями и взаимодействуют с другими иммунными клетками путем пр...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Авторы не заявляют об отсутствии финансирования или конфликтах интересов.

Acknowledgements

Наше исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (NSFC) (81771755), колледжами и ключевым исследовательским проектом науки и техники университета провинции Хэбей (D2017009) и Центром медицинских экспериментов Animal Lab of Medical Experiment, Университетом Хэвэя. Мы благодарны за их поддержку.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZFBD563490America
Anti-PE MicroBeadsMiltenyi130-048-801Germany
ColumnsMiltenyiMSGermany
Cryogenic CentrifugeBeckmanAllegra® X-15RAmerica
DiRThermo Fisher ScientificD12731America
Embedding CenterTianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.BMJ-1China
FITC Hamster Anti-Mouse TCR β ChainBD553170America
Flow cytometerBDAccuri C6America
Freund's complete adjuvantSigmaF5881America
hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)Karebay Biochem18062202China
hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)Karebay Biochem18062203China
In Vivo Imaging SystemPerkinElmercaliper IVIS lumina IIAmerica
Ionomycin CalciumCayman10004974America
KRN7000AdipoGenAG-CN2-0013America
Mouse CD1d Tetramer-PEMBLTS-MCD-1Japan
Mouse percollSolarbioP8620China
Optical MicroscopeOlympusOlympus-IIJapan
PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-ϒtBD562683America
PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-betBD561316America
Pertussis toxinSigmaP7208America
phorbol estersCayman10008014America
Red Blood Cell Lysis BufferBD555899America
RPMI-1640Biological Industries01-100-1ACSIsrael
Th1/Th2/Th17 cytokines kitBD560485America
UltramicrotomeLeicaLeica EM UC6Germany

References

  1. Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).
  2. Cross, M., et al. The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study. Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).
  3. Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queiróz Cunha, F. D., Ulloa, L. From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis. Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).
  4. Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions. Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).
  5. Bianca, B. S. Unraveling Natural Killer T-Cells Development. Frontiers in Immunology. 8, 1950(2018).
  6. Mitsuo, A., et al. Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases. Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).
  7. Miellot, A., et al. Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway. European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).
  8. Miellot-Gafsou, A., et al. Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment. Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).
  9. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  10. Ming, M., et al. Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b. Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).
  11. Ming, M., et al. Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-γ/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis. Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).
  12. Sharif, S., et al. Activation of natural killer T cells by α-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes. Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).
  13. Gapin, L. Development of invariant natural killer T cells. Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).
  14. Kwon, D. I., Lee, Y. J. Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells. Immune Network. 17 (6), (2017).
  15. Thapa, P., et al. The differentiation of ROR-γt expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1. Scientific Reports. 7 (1), 7018(2017).
  16. Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-γ. Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).
  17. Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis. Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).
  18. Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice. Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).
  19. Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase. Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).
  20. Kamradt, T., Schubert, D. The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis. Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).
  21. Horikoshi, M., et al. Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand α-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis. PlosOne. 7 (12), 51215(2012).
  22. Zhang, X. J., et al. Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice. Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).
  23. Motohashi, S., Nakayama, T. Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer. Immunotherapy. 1 (1), 73(2017).
  24. Jung, S., et al. The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis. Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).
  25. Luc, V. K., Lan, W. Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity. Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).
  26. Chiba, A., et al. Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of α-galactosylceramide. Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).
  27. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  28. Bruns, L., et al. Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice. Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).
  29. Parietti, V., et al. Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis. Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).
  30. Yoshida, Y., et al. Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model. Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).
  31. Chen, D., et al. Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells. International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

155iNKT6 G6PIin vivo IVIS