A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
* These authors contributed equally
يصف هذا البروتوكول جهاز اختبار الاحتكاك الذي يطبق الانزلاق المتبادل المتزامن والحمل العادي على وجهين بيولوجيين متلامسين.
في هشاشة العظام الأولية (OA) ، يمنع "البلى والتمزق" الطبيعي المرتبط بالشيخوخة قدرة الغضروف على الحفاظ على وظائفه الحاملة والتزييت ، مما يعزز بيئة مادية ضارة. قد تؤثر التفاعلات الاحتكاكية للغضروف المفصلي والغشاء الزليلي على توازن المفاصل من خلال تآكل مستوى الأنسجة والنقل الميكانيكي الخلوي. لدراسة هذه العمليات الميكانيكية والميكانيكية البيولوجية ، يتم وصف جهاز قادر على تكرار حركة المفصل. يتحكم جهاز اختبار الاحتكاك في توصيل حركة الترجمة المتبادلة والحمل العادي إلى وجهين بيولوجيين متلامسين. تعتمد هذه الدراسة تكوين الغشاء الزليلي على الغضروف ، ويتم تقديم قياسات معامل الاحتكاك للاختبارات التي يتم إجراؤها في حمام ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) أو السائل الزليلي (SF). تم إجراء الاختبار لمجموعة من ضغوط التلامس ، مما يسلط الضوء على خصائص التشحيم ل SF تحت الأحمال العالية. يمكن استخدام جهاز اختبار الاحتكاك هذا كمفاعل حيوي للمحاكاة الحيوية لدراسة التنظيم الفيزيائي لأنسجة المفاصل الحية استجابة للتحميل الفسيولوجي التطبيقي المرتبط بمفصل المفصل ثنائي المفصل.
هشاشة العظام (OA) هو مرض المفاصل التنكسية الموهنة التي تؤثر على أكثر من 32 مليون بالغ أمريكي ، مع الرعاية الصحية والتكلفة الاجتماعية والاقتصادية لأكثر من 16.5 مليار دولار1. وقد تميز المرض بشكل كلاسيكي بتدهور الغضروف المفصلي والعظام تحت الغضروفية. ومع ذلك ، فقد اكتسبت التغييرات في الغشاء الزليلي مؤخرا تقديرا حيث تم ربط التهاب الغشاء الزليلي بأعراض OA والتقدم2،3،4. في OA الأولي (مجهول السبب) ، يمنع "البلى والتمزق" الطبيعي المرتبط بالشيخوخة قدرة الغضروف على الحفاظ على وظائفه الحاملة والتزييت. وقد ثبت أن الضغوط الناتجة عن التلامس المنزلق لفترات طويلة لطبقات الغضروف المفصلي أو التلامس المنزلق للغضروف ضد المواد المزروعة تسهل تآكل التفكيك من خلال فشل التعب تحت السطح 5,6. نظرا لوجود بيئة ميكانيكية ديناميكية داخل المفصل 7,8 ، فإن التفاعلات الاحتكاكية للغضروف المفصلي والغشاء الزليلي قد تؤثر على توازن المفاصل من خلال تآكل مستوى الأنسجة والنقل الميكانيكي الخلوي. لدراسة هذه العمليات الميكانيكية والميكانيكية البيولوجية ، تم تصميم جهاز لتكرار حركة المفصل مع تحكم محكم في التحميل الانضغاطي والاحتكاكي5،6،9،10،11،12،13.
يصف هذا البروتوكول جهاز اختبار الاحتكاك الذي يوفر حركة متبادلة ومترجمة وحمل ضاغط إلى ملامسة أسطح الأنسجة الحية. يسمح الجهاز الذي يتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر للمستخدم بالتحكم في مدة كل اختبار ، والحمل المطبق ، ونطاق حركة مرحلة الترجمة ، وسرعة الترجمة. الجهاز معياري ، مما يسمح باختبار الوجوه المضادة المختلفة ، مثل الأنسجة على الأنسجة (الغضروف على الغضروف والغشاء الزليلي على الغضروف) والأنسجة على الزجاج. بالإضافة إلى القياسات الوظيفية التي حصل عليها المختبر ، يمكن تقييم مكونات حمام التشحيم والأنسجة قبل الاختبار وبعده لتقييم التغيرات البيولوجية التي ينقلها نظام تجريبي معين.
تم إجراء دراسات لثلاثية الغضاريف منذ عقود ، وتم تطوير العديد من التقنيات لقياس معاملات الاحتكاك بين الغضروف والزجاج والغضروف على الغضروف14,15. يتم تحفيز النهج المختلفة من خلال المفصل و / أو آلية التشحيم ذات الاهتمام. غالبا ما تكون هناك مفاضلة بين التحكم في المتغيرات التجريبية وتلخيص المعلمات الفسيولوجية. تستخدم الأجهزة على غرار البندول المفاصل السليمة كنقطة ارتكاز للبندول البسيط حيث يترجم سطح مفصل واحد بحرية على السطح الثاني14،16،17،18. بدلا من استخدام المفاصل السليمة ، يمكن الحصول على قياسات الاحتكاك عن طريق تحريك الغضروف على الأسطح المطلوبة14،19،20،21،22،23،24،25. وقد تفاوتت معاملات الاحتكاك المبلغ عنها للغضروف المفصلي على نطاق واسع (من 0.002 إلى 0.5) اعتمادا على ظروف التشغيل14,26. تم إنشاء أجهزة لتكرار الحركة الدوارة23،27،28. طور Gleghorn et al.26 مقياس ثلاثي مخصص متعدد الآبار لمراقبة ملامح تشحيم الغضروف باستخدام تحليل منحنى Stribeck ، وتم تطبيق حركة انزلاق متذبذبة خطية بين الغضروف مقابل وجه زجاجي مسطح.
يهدف هذا الجهاز إلى عزل الاستجابات الاحتكاكية واستكشاف البيولوجيا الميكانيكية للأنسجة الحية في ظل ظروف التحميل المختلفة. يستخدم الجهاز إعداد اختبار مبسط يحاكي مفصل المفاصل من خلال الانزلاق الانضغاطي ، والذي يمكن أن يقرب كل من حركة التدحرج والانزلاق مع فهم أن المقاومة في حركة التدحرج النقية لا تذكر بالنسبة لمعامل الاحتكاك المقاس للغضروف المفصلي29. تم تصميم المختبر في الأصل لدراسة آثار ضغط السائل الخلالي على الاستجابة الاحتكاكية للغضروف المفصلي9 ، ومنذ ذلك الحين تم استخدام الاختبار لاستكشاف مواضيع مثل التأثيرات الاحتكاكية لإزالة المنطقة السطحية من الغضروف 10 ، وتأثيرات التشحيم للسائل الزليلي11 ، وفرضيات ارتداء الغضروف5،6،30 ، وقياسات الاحتكاك الغليلي على الأنسجة13 . يمكن للمفاعل الحيوي لاختبار الاحتكاك إجراء تجارب الاحتكاك في ظل ظروف معقمة ، مما يوفر آلية جديدة لاستكشاف كيفية تأثير قوى الاحتكاك على الاستجابات الميكانيكية البيولوجية للغضروف الحي والغشاء الزليلي. يمكن استخدام هذا التصميم كمفاعل حيوي للمحاكاة الحيوية لدراسة التنظيم الفيزيائي لأنسجة المفاصل الحية استجابة للتحميل الفسيولوجي التطبيقي المرتبط بمفصل المفصل ثنائي المفصل.
تقدم هذه الدراسة تكوينا لاختبار احتكاك الغشاء الزليلي على الغضروف عبر مجموعة من ضغوط التلامس وفي حمامات التشحيم المختلفة. مساحة السطح المفصلية لمعظم المفاصل هي ، إلى حد كبير ، الأنسجة الزلالية31. في حين أن انزلاق الغشاء الزليلي على الغضروف لا يحدث على الأسطح الحاملة الأولية ، إلا أن التفاعلات الاحتكاكية بين النسيجين قد لا تزال لها آثار مهمة على إصلاح مستوى الأنسجة والنقل الميكانيكي للخلايا. وقد تبين سابقا أن الخلايا الزليلي الشبيهة بالخلايا الليفية (FLS) الموجودة على الطبقة الداخلية من الغشاء الزليلي حساسة ميكانيكيا ، وتستجيب لإجهاد القص الناجم عن السوائل32. وقد ثبت أيضا أن تمدد33,34 وإجهاد القص الناجم عن السوائل35 يعدل إنتاج زيوت التشحيم FLS. على هذا النحو ، قد يوفر الاتصال المنزلق المباشر بين الغشاء الزليلي والغضروف حافزا ميكانيكيا آخر للخلايا المقيمة في الغشاء الزليلي.
تم نشر عدد قليل فقط من التقارير حول معاملات احتكاك الغشاء الزليلي31,36. وسعى Estell et al.13 إلى التوسع في التوصيف السابق باستخدام الوجوه المضادة ذات الصلة بيولوجيا. مع قدرة جهاز اختبار الاحتكاك على اختبار الأنسجة الحية ، من الممكن محاكاة تفاعلات الأنسجة الفسيولوجية أثناء مفصل المفصل لتوضيح دور إجهاد القص على الاتصال على وظيفة الخلايا الزليلي ومساهمته في التداخل بين الغشاء الزليلي والغضروف. وقد تورط هذا الأخير في التوسط في التهاب المفاصل الزليلي في التهاب المفاصل وما بعد الإصابة. نظرا للقرب المادي للغضروف من الغضروف الزليلي والسائل الزليلي ، الذي يحتوي على خلايا زليلية تظهر قدرة متعددة القدرات ، بما في ذلك تكوين الغضروف ، فمن المفترض أن الخلايا الزليلي تلعب دورا في توازن الغضروف وإصلاحه عن طريق الالتفاف على السطح المفصلي. في هذا السياق ، قد يؤدي الاتصال الجسدي والقص المتبادل للغضروف - الغشاء الزليلي و synovium إلى زيادة إمكانية وصول الخلايا الزلالية إلى مناطق تلف الغضروف37،38،39،40. لن توفر الدراسات التي تستخدم تكوينات الغشاء الزليلي على الغضروف رؤى ثاقبة حول ميكانيكا الأنسجة الإجمالية المشتركة وعلم التريبولوجيا فحسب ، بل قد تؤدي أيضا إلى استراتيجيات جديدة للحفاظ على صحة المفاصل.
تم استخدام مفاصل الركبة البقرية اليافعة ، التي تم الحصول عليها من مسلخ محلي ، لهذه الدراسة. يتم إعفاء الدراسات التي أجريت على عينات العينات البقرية هذه من لجنة كولومبيا المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC).
1. تصميم جهاز اختبار الاحتكاك
ملاحظة: يظهر تمثيل تخطيطي لجهاز اختبار الاحتكاك في الشكل 1. تم بناء الجهاز على لوحة قاعدة صلبة (غير معروضة) ، والتي تعمل كمنصة للدعم الهيكلي.
2. إعداد العينات وتركيبها
3. اختبار الاحتكاك
ملاحظة: يتم استخدام برنامج LabVIEW مخصص والأجهزة المرتبطة به (راجع ملفات الترميز التكميلية) لهذه الاختبارات. يرجى ملاحظة أن الرمز المخصص تم إنشاؤه على LabVIEW 2010 وتم الاحتفاظ به على نفس الإصدار القديم. ونتيجة لذلك، قد لا تكون التعليمة البرمجية متوافقة مع أحدث إصدار من البرنامج. ستكون ضربات الأزرار التالية ومراجع واجهة المستخدم ذات صلة فقط بالتعليمات البرمجية المخصصة. إذا كنت تعمل مع إصدار برنامج مختلف ، فيمكن كتابة برنامج مخصص مماثل عن طريق تعديل الرمز.
4. معالجة البيانات
ملاحظة: يتم استخدام برنامج MATLAB مخصص لمعالجة البيانات (راجع ملفات الترميز التكميلية). تستدعي التعليمة البرمجية ملفات الإخراج المحددة بواسطة التعليمة البرمجية LabVIEW المخصصة.
تم استخدام تكوين الغشاء الزليلي على الغضروف لاختبار الاحتكاك للنبتات البقرية اليافعة. تم تركيب الغشاء الزليلي على صفيحة تحميل أكريليك قطرها 10 مم بحيث تكون الطبقة الداخلية على اتصال بالغضروف الأساسي. تم استخدام شريط الظنبوب كوجه مضاد للغضروف (الشكل 6A). تم قطع شرائط الظنبوب...
توجد بيئة ميكانيكية ديناميكية داخل المفصل حيث يتعرض الغضروف لقوى الضغط والشد والقص ، والضغوط الهيدروستاتيكية والتناضحية44,45. على الرغم من أن الغضروف هو النسيج الحامل الرئيسي للمفصل ، إلا أن الغشاء الزليلي يخضع أيضا لتفاعلات احتكاكية مع سطح الغضروف ومع نفس?...
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة البحث العلمي لجراحة العظام ، NIH 5R01 AR068133 ، NIH TERC 5P41EB027062 ، و NIGMS R01 692 GM083925 (معرف الممول: 10.13039 / 100000057).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Aluminum foil | Reynolds Group Holdings | Reynolds Wrap | Sterile tissue harvest |
Aluminum-framed acrylic enclosure | Custom made | Friction tester component | |
Autoclavable instant sealing sterilization pouches | Fisherbrand | 01-812-54 | Sterilization of tools |
Autoclave | Buxton | Sterilization of tools | |
Beaker (250 mL) | Pyrex Vista | 70000 | Tissue harvest |
Betadine (Povidone Iodine Prep Solution) | Medline Industries, LP | MDS093906 | Sterile tissue harvest |
Biological safety cabinet | Labconco | Purifier Logic+ Class II, Type A2 BSC | Sterile tissue harvest |
Biospy punch | Steritool Inc. | 50162 | Tissue harvest |
Box cutter | American Safety Razor Company | 94-120-71 | Tissue harvest |
Circular acrylic-sillicone post (synovium) | Custom made | Tissue mounting | |
Culture media | Custom made | DMEM (Cat No. 11-965-118; Gibco) supplemented with 50 μg/mL L-proline (Cat. No. P5607; Sigma), 100 μg/mL sodium pyruvate (Cat. No. S8636; Sigma), 1% ITS (Cat. No. 354350; Corning), and 1% antibiotic–antimycotic (Cat. No. 15-240-062, Gibco) | |
Cyanoacrylate (Loctite 420 Clear) | Henkel | 135455 | Tissue mounting |
Dead weights | OHAUS | Normal load | |
Ethanol 200 proof | Decon Labs, Inc. | 2701 | Dilute to 70 % |
Fixed base | ThorLabs, Inc. | SB1T | Friction tester component |
Forceps (synovium harvest) | Fine Science Tools | 11019-12 | Tissue harvest |
Forceps (synovium mounting) | Excelta | 3C-S-PI | Tissue mounting |
Horizontal linear encoder (for translating stage) | RSF Electronics, Inc. | MSA 670.63 | Friction tester component; system resolution of 1 µm |
Hot glue gun and glue | FPC Corporation | Surebonder Pro 4000A | Tissue mounting |
LabVIEW | National Instruments Corporation | LabVIEW 2010 | Friction testing program |
Load cell | JR3 Inc. | 20E12A-M25B | Friction tester component; 0.0019 lbs resolution in x&y, 0.0038 lbs resolution in z |
Loading platen | Custom made | Tissue mounting | |
O-ring | Parker | S1138AS568-009 | Tissue mounting |
Petri dish (60 mm) | Falcon | 351007 | Tissue mounting |
PivotLok Work Positioner (tibia holder) | Industry Depot, Pivot Lok | PL325 | Tissue harvest |
Removable base | ThorLabs, Inc. | SB1B | Friction tester component |
Ring stand | Tissue harvest | ||
Scalpel blades | Havel's Inc. | FSC22 | Tissue harvest |
Scalpel handle | FEATHER Safety Razor Co., Ltd. | No. 4 | Tissue harvest |
Screwdriver | Wera | 3334 | Tissue harvest |
Stage | JMAR | Friction tester component | |
Stepper motor | Oriental Motor Co., Ltd. | PK266-03B | Friction tester component |
Suction tool | Virtual Industries, Inc. | PEN-VAC Vacuum Pen | Tissue mounting |
Support rod | Custom made | Tissue mounting | |
Surgical scissors | Fine Science Tools | 14061-09 | Tissue mounting |
Synovial fluid (bovine) | Animal Technologies, Inc. | Friction testing bath | |
Testing bath | Custom made | Phosphate-Buffered Saline (PBS) with protease inhibitors: 0.04% isothiazolone-base biocide (Proclin 950 Cat. No. 46878-U; Sigma) and 0.1% protease inhibitor - 0.05 M ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA (Cat. No. 0369; Sigma) | |
Tissue culture incubator | Fisher Scientific | Isotemp | Sterile culture |
Vertical linear encoder (for loading stage) | Renishaw | T1031-30A | Friction tester component; 20 nm resolution |
Voice coil actuator | H2W Technologies | NCC20-15-027-1RC | Friction tester component |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved