بعد تصوير خلايا Hep-3B المعالجة بالدواء ، افتح الصور متحدة البؤر في الصورة J باستخدام المكون الإضافي colocalization. افتح ملف ND في خادم الصورة J وحدد خيار تقسيم القنوات في مربع الحوار. العمل مع الصور الخضراء والحمراء.
قم بإنشاء نسخ مكررة من هذه الصور للحفاظ على الصورة الأصلية دون تغيير عن طريق النقر فوق الصورة وتحديد تكرار أو استخدام اختصار لوحة المفاتيح بالإضافة إلى D.To تقليل الخلفية ، وإنشاء صورة أخرى مكررة ، وطرح الخلفية بنصف قطر متداول يبلغ 100 ، وحدد خيار إنشاء خلفية لإنشاء صورة بخلفية الصور المحددة. ثم انتقل إلى العملية. انقر فوق حاسبة الصور واطرح أول صورة مكررة من الصورة المكررة الثانية.
استخدم الصور الناتجة لتحليل التوطين المشترك. لاستخدام المكون الإضافي colocalization ، قم بتحويل صور القناة الخضراء والحمراء إلى 8 بت بالنقر فوق الصورة ، وتحديد النوع ، متبوعا ب 8 بت. بعد ذلك ، انقر فوق المكونات الإضافية وحدد colocalization.
لقياس التمركز المشترك لإشارات الميتوكوندريا والليزوزوم ، اضبط النسبة على 75٪ القناة الحمراء للعتبة إلى 80.0 ، والقناة الخضراء العتبة إلى 50.0. سيتم إنشاء صورة ثنائية 8 بت تحتوي على نقطية مترجمة وتجمع بين الصور الثلاث 8 بت في صورة RGB. تحويل هذه الصور إلى صور 8 بت.
للحصول على منطقة اهتمام الخلايا ، قم بإنشاء صورة تبرز منطقة الخلايا عن طريق تحديد صورة نقطة متمركزة. لتحديد منطقة الخلية بأكملها ، حدد صورة النقاط المترجمة الناتجة وانقر فوق الصورة ، واضبط العتبة ، واضبط العتبة لضمان تمييز كل منطقة الخلية. لتحليل مساحة الخلية، حدد تحليل، وانقر فوق تحليل الجسيمات، وقم بقياس كل الجسيمات في الصورة من صفر إلى ما لا نهاية، وهو الإعداد الافتراضي لتحليل الجسيمات.
لتحليل مساحة الميتوكوندريا والليزوزومات المترجمة ، حدد الصورة 8 بت المشتركة. ثم حدد تحليل. انقر فوق تحليل الجسيمات وقياس مجموع النقاط بين 0.1625 ميكرومتر مربع وأربعة ميكرومتر مربع.
اقسم مساحة الميتوكوندريا والليزوزومات الموضعية على إجمالي مساحة الخلية لقياس النقاط الموضعية المشتركة. أظهرت الصور متحدة البؤر لخلايا Hep-3B التمركز المشترك للميتوكوندريا والليزوزومات. تسبب VL 850 و FCCP في حدوث انقسام كبير في خلايا Hep-3B.
