ابدأ في تبريد مطحنة القهوة التجارية عن طريق طحن ما يقرب من 30 إلى 50 جراما من الثلج الجاف مرتين ، لمدة 30 ثانية في كل مرة. تخلص من مسحوق الثلج الجاف واخلط ثلاثة جرامات من معكرونة خلايا الخميرة المجمدة مع ما يقرب من 30 إلى 50 جراما من الثلج الجاف في مطحنة القهوة المبردة مسبقا. أغلق التقاطع بين الغطاء والمطحنة باستخدام Parafilm.
امزج مزيج الثلج الجاف لخلايا الخميرة 10 مرات ، لمدة 30 ثانية لكل منها ، مما يتيح فواصل زمنية مدتها 30 ثانية بين كل جولة. انقل مسحوق الثلج الجاف الناتج عن خلايا الخميرة إلى دورق بلاستيكي باستخدام ملعقة نظيفة وجافة. بعد تبخر الثلج الجاف ، أضف 2.25 ملليلتر من الخرزة المغناطيسية ، أو MB buffer ، مع مثبطات الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز ، إلى مسحوق خلية الخميرة.
بعد سحب خليط المخزن المؤقت للخلية بقوة ، انقل تعليق الخلية إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر. بعد ذلك ، قم بتخزين 0.1٪ عينات من مستخلصات الخلايا الخام للحمض النووي ، و 0.05٪ عينات لتحليل البروتين ، عند 20 درجة مئوية تحت الصفر. انقل معلق الخلية المتبقي إلى أنابيب تفاعل منخفضة الارتباط بحجم 2 ملليلتر ، وافصل حطام الخلية عن طريق الطرد المركزي للأنابيب.
بمجرد الانتهاء من ذلك ، اسحب جميع المواد الطافية في أنبوب مخروطي واحد سعة 15 ملليلتر. مرة أخرى ، قم بتخزين 0.1٪ من المادة الطافية عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر للحمض النووي ، و 0.05٪ من المادة الطافية لتحليل البروتين. بعد ذلك ، اغسل 500 ميكرولتر من ملاط الخرزة المغناطيسية المقترنة بالغلوبولين المناعي G مع 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت البارد MB ، الذي يحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز ، مرتين ، لمدة خمس دقائق لكل منهما ، عند أربع درجات مئوية ، عند الدوران عند 20 دورة في الدقيقة.
احتضان الحبيبات المغناطيسية في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت MB البارد لمدة ساعة واحدة عند أربع درجات مئوية ، عند الدوران عند 20 دورة في الدقيقة ، قبل إزالة المادة الطافية من الخرز باستخدام رف مغناطيسي. امزج ملاط الخرزة المغناطيسية المتوازن مع محللة الخلية التي تم الحصول عليها مسبقا وسحبها إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر. بعد الحضانة لمدة ساعتين عند أربع درجات مئوية و 20 دورة في الدقيقة ، انقل معلق محللة خلية الخرزة المغناطيسية بالكامل إلى أنابيب تفاعل منخفضة الربط.
افصل الخرزات المغناطيسية التي تحمل حلقات الكروماتين ذات الأهمية عن الخلية المحللة ، باستخدام رف مغناطيسي. انقل التدفق المتبقي من كل أنبوب إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 15 ملليلتر ، قبل تخزين بعض العينات عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر لتحليل الحمض النووي والبروتين. بعد ذلك ، قم بتعليق الخرزة المغناطيسية من كل أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر في 300 ميكرولتر من المخزن المؤقت MB البارد ، وادمج الخرزات في أنبوب تفاعل واحد.
قم بإجراء خمس غسلات مدة كل منها 10 دقائق ، باستخدام 750 ميكرولتر من المخزن المؤقت البارد MB ، الذي يحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز ، عند أربع درجات مئوية ، مع الدوران عند 20 دورة في الدقيقة. بعد ذلك ، قم بإجراء الغسيل النهائي باستخدام 750 ميكرولتر من المخزن المؤقت MB البارد بدون مثبطات الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز. تعليق الخرز المحضر في 40 ميكرولتر من المخزن المؤقت MB البارد بدون مثبطات الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز.
