باستخدام مجهر متحد البؤر وهدف 40X ، قم بإنشاء ملف تعريف مسح باستخدام قنوات الفلورسنت المناسبة لعلامة الدهون المستخدمة. بعد إعداد وضع الاستحواذ والقنوات ، قم بتحسين استراتيجية التركيز من خلال النقر على التركيز البؤري التلقائي للبرنامج. ثم اضبط نطاق Z Stack على 20 ميكرون.
بعد ذلك ، قم بتحسين البلاط وافتح العارض لتحديد مواضع البلاط. بعد ذلك ، باستخدام طريقة معالجة الصور المجمعة ، قم بإنشاء أقصى إسقاطات لكل Z Stack باستخدام طريقة عمق التركيز الممتد. قبل تصدير الصور ، اضبط الضغط على لا شيء وتأكد من فحص البيانات الأصلية.
الصورة الناتجة هي الحد الأقصى للإسقاط الرمادي TIFF لقناة التألق فقط ، معبرا عن علامة الدهون. حدد صور TIFF التي تمثل إما أحمر النيل أو BODIPY أو APOE وانقلها إلى مجلد الصور داخل دليل باسم إما Nile Red أو BODIPY أو APOE، اعتمادا على الطريقة المستخدمة. افتح برنامج وحدة الدهون.
في علامة التبويب توقع ، حدد الدليل ذي الصلة بالنقر فوق علامة القطع والانتقال إلى الدليل المسمى. تأكد من أن وحدة الدهون قد حددت الصور بشكل صحيح عن طريق التحقق من إدخال الفئة. انقر فوق توقع لمراقبة تقدم المهمة، ثم باستخدام أداة تحليل القناع، كرر من خلال الأقنعة التي تم إنشاؤها وقم بتوفير عدد كمي لرواسب الدهون العتبة من صور القناع.
أظهر التمايز والنضج الناجح ل RPE طبقة أحادية متقاربة مع تصبغ ومورفولوجيا متعددة الأضلاع. في المقابل ، أظهر التمايز غير الناجح مجموعات من الخلايا الميتة. في الصور الفلورية ، ظهرت رواسب النيل الأحمر و BODIPY كنقاط دائرية صغيرة ومشرقة.
تظهر النتيجة السلبية تجزئة غير صحيحة للصورة عن طريق الخلط بين مضان الخلفية كرواسب ، إما بسبب تلطيخ ضعيف أو كثافة خلفية عالية. يتم عرض رواسب APOE متفاوتة في الحجم والشكل وشدة الإشارة والتي تتطلب تحسين طرق التلوين والتصوير لتقليل التباين.
