نشاط الفوسفاتيز القلوي ، ترسب الكالسيوم ، وقياسات معامل يونغ في السقالات المشتقة من التفاح منزوعة الخلية

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

107 Views

•

02:32 min

•

February 23rd, 2024

DOI :

10.3791/200425-v

February 23rd, 2024

•

Maxime Leblanc Latour¹, Maryam Tarar², Ryan J. Hickey¹, Charles M. Cuerrier¹, Isabelle Catelas³^,⁴^,⁵, Andrew E. Pelling¹^,²^,⁶^,⁷

¹Department of Physics, University of Ottawa, ²Department of Biology, University of Ottawa, ³Department of Mechanical Engineering, University of Ottawa, ⁴Department of Surgery, University of Ottawa, ⁵Department of Biochemistry, Microbiology and Immunology, University of Ottawa, ⁶Institute for Science, Society and Policy, University of Ottawa, ⁷SymbioticA, School of Human Sciences, University of Western Australia

Transcript

بالنسبة لمقايسة الفوسفاتيز القلوي ومقايسات ترسب الكالسيوم ، ابدأ بغسل السقالات المشتقة من التفاح المزروعة في الوسط المناسب ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني. ثبت السقالات باستخدام الفورمالين المخزن المحايد بنسبة 10٪ لمدة 30 دقيقة. لمقايسة الفوسفاتيز القلوية ، قم بإعداد محلول تلطيخ BCIP / NBT عن طريق إذابة قرص واحد من BCIP / NBT في 10 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات.

بعد ذلك ، اغسل السقالات الثابتة بمحلول TWEEN بنسبة 0.05٪ وصمة عار بمحلول BCIP / NBT لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اغسل سقالات البقع بمحلول 0.05٪ TWEEN وقم بتخزينها في برنامج تلفزيوني. ثم ، قم بتصوير السقالات الملطخة بكاميرا رقمية بدقة 12 ميجابكسل.

لمقايسة ترسب الكالسيوم ، قم بإعداد 2٪ من الوزن من حيث الحجم محلول تلطيخ Alizarin Red S. بعد ذلك ، اغسل السقالات الثابتة بالماء منزوع الأيونات وقم بتلطيخها بمحلول Alizarin Red S لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. اغسل السقالات الملطخة بالماء منزوع الأيونات وقم بتخزينها في برنامج تلفزيوني قبل التصوير.

صورة بكاميرا رقمية بدقة 12 ميجابكسل. لإجراء قياسات معامل يونغ ، قم بإزالة السقالات المصنفة بالخلايا من وسط الحضانة الخاص بها واختبر العينات على الفور باستخدام جهاز ضغط أحادي المحور مصمم خصيصا ومجهز بخلية تحميل 1.5 نيوتن. ضغط السقالات بمعدل ثابت يبلغ ثلاثة ملليمترات في الدقيقة إلى أقصى إجهاد ضاغط يبلغ 10٪ من ارتفاع السقالة.

حدد معامل يونغ من ميل الجزء الخطي من منحنيات الإجهاد / الانفعال. كشف تلطيخ BCIP / NBT عن زيادة كبيرة في نشاط الفوسفاتيز القلوي في السقالات المصنفة بالخلايا المستزرعة في وسط التمايز مقارنة بالسقالات الفارغة أو غير المتمايزة المزروعة بالخلايا. تم الحصول على نتائج مماثلة لتلطيخ Alizarin Red S ، مما يشير إلى زيادة تمعدن الكالسيوم في السقالات المصنفة بالخلايا المستزرعة في وسط التمايز.

كان معامل يونغ للسقالات المصنفة بالخلايا المستزرعة في وسط التمايز حوالي 192.0 كيلو باسكال ، وهو أعلى بكثير من السقالات الفارغة أو غير المستزرعة بالخلايا المتوسطة ، مما يشير إلى صلابة أعلى.

Explore More Videos

From the series

تحليل السقالات المشتقة من التفاح منزوعة الخلايا لهندسة أنسجة العظام