لبدء تحضير شبكات الفحص المجهري الإلكتروني للتصوير بالتبريد الخلوي ، ضع الشبكة المحملة بغشاء دعم الكربون المثقوب في جهاز تفريغ متوهج مع توجيه جانب الكربون من الشبكة لأعلى. بعد ذلك ، يتوهج تفريغ الشبكة عند 15 مللي أمبير ، تحت ضغط جوي 0.39 مليبار لمدة 45 ثانية. بمجرد الانتهاء من ذلك ، ضع الشبكة في وعاء نظيف ، مبطن بورق الترشيح.
بعد ذلك ، انقل الشبكة مع الفبرونيكتين أو محلول ملحي مخزن للفوسفات أو PBS وألواح وملاقط إلى خزانة السلامة الحيوية. باستخدام ماصة صغيرة ، قم بصب نقطتين كبيرتين من الفبرونيكتين البقري على سطح معقم مثل غطاء ستة ألواح جيدة. تأكد من أن النقاط كبيرة بما يكفي لتغليف الشبكة بأكملها.
بعد ذلك ، احصل على ملاقط خمسة × 15 وعالج جانبي الشبكة بمحلول التصاق الفبرونيكتين. بمجرد معالجتها بالفبرونيكتين البقري ، ستصبح الشبكة لزجة. المس برفق السطح غير الكربوني للشبكة إلى قاع بئر فارغ في لوحة ستة آبار وحرر الملقط لربط الشبكة بالسطح الجديد.
بعد ذلك ، احتضان الشبكة لمدة 30 دقيقة في محلول التصاق الفبرونيكتين. لمنع جفاف الشبكات ، أضف قطرة أو قطرتين من محلول الالتصاق أعلى الشبكات ، باستخدام ماصة صغيرة كل 15 دقيقة. بعد الحضانة ، قم بإزالة محلول الالتصاق الزائد باستخدام ماصة صغيرة.
اغسل الشبكات عن طريق إضافة قطرات من PBS مباشرة أعلى الشبكات ، باستخدام الماصة الدقيقة مرتين إلى ثلاث مرات. تعقيم الشبكات تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية في خزانة السلامة البيولوجية لمدة ساعة واحدة. ضع الشبكات بالقرب من الأشعة فوق البنفسجية قدر الإمكان لتحقيق أقصى قدر من التعقيم.
امنع الشبكات من الجفاف أثناء التعقيم عن طريق سحب قطرة أو قطرتين من PBS أعلى الشبكة كل 10 دقائق.
