القياس الكمي الفلوري والتحليل الخلوي للمصائد خارج الخلية لعدلات الفئران (NETs)

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

73 Views

•

02:06 min

•

April 26th, 2024

DOI :

10.3791/200812-v

April 26th, 2024

•

Xiangfeng Gong*¹, Yutao Sun*¹, Xiaoxin Zhang²^,³, Zhenghua Xiao¹^,⁴, Li He¹^,⁴, Chaoyi Qin¹^,⁴

¹Department of Cardiovascular Surgery, West China Hospital, Sichuan University, ²Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Sichuan Provincial Pancreatitis Centre, West China Hospital, Sichuan University, ³West China-Liverpool Biomedical Research Centre, West China Hospital, Sichuan University, ⁴Cardiovascular Surgery Research Laboratory, West China Hospital, Sichuan University

* These authors contributed equally

Transcript

للبدء ، ماصة 50 ميكرولتر من عينات الفئران المعزولة NET إلى أنبوب مع 450 ميكرولتر من العازلة Tris-EDTA. الآن ماصة 100 ميكرولتر من معايير الحمض النووي والعينات في لوحة بئر 96. أضف حجما متساويا من كاشف الفحص إلى الآبار.

ثم احتضان اللوحة في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق ، وتجنب التعرض للضوء المباشر. ضع اللوحة في قارئ الصفائح الدقيقة الفلورية. اضبط طيف انبعاث يبلغ حوالي 530 نانومتر وطيف ماص يبلغ حوالي 480 نانومتر.

احتضان الخلايا في ميكرولتر واحد من وصمة عار النواة لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، احتضان الخلايا في ميكرولتر واحد من سلالة الحمض النووي الخالية من الخلايا لمدة 10 دقائق. امزج الأصباغ الفلورية برفق.

قم بتحميل لوحة العينة في مقياس الخلايا. قم بالتبديل إلى قناة SYTOX Green ، ثم حدد قناة HEXT. اضبط الإضاءة على Blue 377/447 ، واضبط وقت التعرض على 300،000 ميكروثانية.

انقر فوق الإعداد المركز ثم انقر فوق تسجيل تلقائي لضبط التركيز تلقائيا. حدد قناة SYTOX Green واضبط الإضاءة على Green 483/536. اضبط وقت التعرض ل SYTOX Green على 30،000 ميكروثانية.

انقر فوق بدء المسح لبدء عملية المسح. كانت الاستجابات المماثلة في إفراز NET واضحة بين العدلات المحيطية ونخاع العظم بغض النظر عن تحفيز PMA. كما أظهرت شبكات الفئران قدرات ربط متقاطعة محدودة مع بعضها البعض.

أدت الحضانة مع PMA إلى زيادة بنسبة 10٪ في محتوى الحمض النووي الخالي من الخلايا بعد أربع ساعات ، مما يشير إلى ميل أعلى لتحفيز تكوين NET.

Explore More Videos

Fluorometric Quantification

Cytometric Analysis

Rat Neutrophil Extracellular Traps NETs

Tris EDTA Buffer

DNA Standards

Assay Reagent

Fluorescence Microplate Reader

Nucleus Stain

Cell free DNA Stain

Cytometer