تنقية الخلايا البطانية اللمفاوية الفئران

لتنقية الخلايا البطانية اللمفاوية في البول ، استخدم الخلايا المعزولة من أدمة الفئران بعد أن تصل إلى حوالي 80 إلى 90٪ من الطلاقة المشتركة ، ابدأ بغسل الخرزات المغناطيسية المشفرة مسبقا في فاصل مغناطيسي باستخدام ملليلتر واحد من محلول طلاء الخرزة المغناطيسية. أعد تعليق الخرزات في 150 ميكرولتر من DMEM تحتوي على 0.1٪ BSA. بعد ذلك ، اغسل الخلايا في لوحة زراعة الأنسجة 60 ملم مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني.

امزج 50 ميكرولترا من الخرز المترافق بالأجسام المضادة مع ثلاثة ملليلتر من DMEM تحتوي على 0.1٪ BSA وأضفه إلى الخلايا. أغلق الطبق بغشاء حيوي ، ثم احتضن الطبق على شاكر يحرك عند 10 دورات في الدقيقة في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق بالضبط. تخلص من الوسط قبل غسل الخلايا مرة واحدة باستخدام برنامج تلفزيوني.

افحص الخلايا بسرعة للتحقق من وجود مستعمرات LEC على اللوحة. أضف ملليلتر واحد من tripsin EDTA إلى الخلايا واحتضانها لمدة ثلاث دقائق عند 37 درجة مئوية لتريبسين الخلايا. افحص الخلايا بحثا عن انفصال ناجح للخلايا.

بعد تحييد الحل مع ملليلتر من وسائط LEC الكاملة. انقل محلول الخلية إلى أنبوب بولي بروبيلين معقم سعة خمسة ملليلترات. باستخدام فاصل مغناطيسي ، اغسل الخلايا بثلاثة ملليلتر من DMEM تحتوي على 0.1٪ BSA لإزالة الخلايا غير المنضمة.

أعد تعليق الخلايا المتبقية المرتبطة بالخرز في وسائط LEC كاملة وقم بوضعها على ألواح زراعة الأنسجة المغلفة بالكولاجين مقاس 60 ملم. حدد التصوير الساطع والفلوري بسهولة الخلايا البطانية اللمفاوية الإيجابية LYVE1 بعد التنقية وأظهر العديد من الخرز المرتبط بها. أظهرت الخلايا التقاء منخفض بعد 24 ساعة من التنقية ، بينما كانت متقاربة للغاية ، بعد سبعة أيام من التنقية.