عزل الأرومات العضلية للفأر على حبات كونكانافالين-أ المنشطة

للبدء ، أضف 30 ميكرولترا من حبات Concanavalin-A في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر. ماصة 300 ميكرولتر من العازلة ملزمة للخرز. اقلب الأنبوب عدة مرات ليختلط جيدا ، ثم ضع الأنبوب على رف مغناطيسي.

بمجرد توضيح الحل ، ماصة خارج طاف . ماصة 300 ميكرولتر من المخزن المؤقت للربط بالأنبوب بعد إزالته من الرف. اقلب مرة أخرى لخلط محتويات الأنبوب.

قم بتوزيع محتويات الأنبوب بالتساوي في ثلاثة أنابيب من شريط أنبوب PCR ثمانية ، ثم ضع شريط الأنبوب على الرف المغناطيسي حتى يتم توضيح المحلول. بعد إزالة المادة الطافية ، ماصة 10 ميكرولتر من العازلة ملزمة في الأنابيب وتخلط. ضع الخرزات المحضرة على الجليد حتى مزيد من التجارب.

بعد ذلك ، التربسين الخلايا العضلية للفأر المستزرع من اللوحات. بعد الطرد المركزي للخلايا ، استخدم الفراغ لإزالة الطافية بالفراغ. ثم أعد تعليق الحبيبات في برنامج تلفزيوني.

قم بطرد الخلايا بعد إجراء عدد خلايا التعليق ، ثم أعد تعليق الحبيبات في حجم مناسب من المخزن المؤقت للغسيل لتوليد كثافة خلية تبلغ 700،000 خلية لكل ملليلتر. ماصة 100 ميكرولتر من تعليق الخلية هذا في كل أنبوب من شريط أنبوب PCR وتخلط جيدا ، ثم ضع شريط الأنبوب على شاكر حركة المنشار لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة للسماح لخرز Concanavalin-A بالتقاط الخلايا. قم بتوضيح محتويات الأنابيب مرة أخرى على رف مغناطيسي قبل سحب المادة الطافية.

أخيرا ، راقب المادة الطافية تحت المجهر لتقييم فعالية ارتباط حبة Concanavalin-A بالخلايا.