mOrange-Nano Recruitment to disiLID Functional Supported Lipid Bilayers (SLBs) لتوليد أنماط البروتين

للبدء ، خذ غرفة سفلية زجاجية صغيرة ذات 18 بئرا ، وأضف 150 ميكرولترا من هيدروكسيد الصوديوم في كل بئر من الغرفة واحتضانها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بإزالة محلول هيدروكسيد الصوديوم وغسل الآبار ثلاث إلى خمس مرات بالماء منزوع الأيونات ، تليها ثلاث غسلات مع مخزن مؤقت يحتوي على 10 مليمول كلوريد الكالسيوم. بعد ذلك ، أضف 15 ميكرولترا من سيارات الدفع الرباعي الطازجة إلى الآبار التي تحتوي على 150 ميكرولتر عازلة مع 10 مليمول كلوريد الكالسيوم.

بعد 30 دقيقة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة ، اغسل SLBs سبع مرات على الأقل بمخزن مؤقت لا يحتوي على كلوريد الكالسيوم. لتشغيل SLBs البيوتينيل مع الستربتافيدين ، أضف محلول الستربتافيدين. ثم اغسل SLBs خمس مرات على الأقل باستخدام المخزن المؤقت لإزالة الستربتافيدين الزائد.

بعد ذلك ، أضف b-disiLID إلى تركيز نهائي من ميكرومولار واحد إلى البئر. بعد 30 دقيقة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة ، اغسل البروتين الزائد بمحلول مؤقت خمس مرات على الأقل. ثم أضف mOrange-Nano إلى تركيز نهائي قدره 200 نانو مولار.

غطي العينة بورق الألمنيوم واحفظيها في الظلام. بعد ذلك ، ضع الشريحة الدقيقة تحت المجهر الفلوري. اضبط ليزر 552 نانومتر لتصور mOrange-Nano.

كشف الفحص المجهري الفلوري عن mOrange-Nano منقوش على SLBs يعمل مع b-disiLID. بعد تنشيط الصورة ، هناك زيادة سريعة في إشارة التألق في القناة البرتقالية داخل منطقة الاهتمام. يزداد مضان mOrange-Nano بعد تشبع كل تنشيط للصورة في 120 ثانية ثم ينخفض إلى مستويات الخلفية في ال 120 ثانية التالية.