للبدء ، ضع Biochips Model BC002 في طبق زجاجي بتري واغسل جميع التجاويف بإيثانول معقم بنسبة 70٪ لمدة 45 دقيقة. ثم اغسل التجاويف مرتين بالماء المقطر المزدوج المعقم. باستخدام ماصة 1،000 ميكرولتر مع أطراف زرقاء ، قم بتغطية غشاء الرقاقة الحيوية للتجويف العلوي بمحلول الكولاجين الرابع المعقم.
احتضان الشريحة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد الحضانة ، اغسل الغرف السفلية والعلوية مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني معقم يحتوي على المغنيسيوم والكالسيوم. املأ الغرفة العلوية لكل تجويف ب 250 ميكرولتر من الخلايا البطانية أو وسط EC الذي يحتوي على البنسلين الستربتومايسين ، والغرفة السفلية ب 150 ميكرولتر.
اغسل مزرعة الخلايا البطانية للوريد السري البشري المتلاقى في قارورة T25 مع خمسة ملليلتر من DPBS بدون المغنيسيوم والكالسيوم PBS. أضف ملليلتر واحد من 0.25 تربسين وواحد مليمول EDTA في PBS. واحتضان لمدة ثلاث دقائق عند 37 درجة مئوية.
بعد الحضانة ، أضف خمسة ملليلتر من PBS و 5٪ FCS لوقف نشاط التربسين. في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر ، أجهزة الطرد المركزي التعليق عند 350G لمدة خمس دقائق. وأعد تعليق الحبيبات في ملليلتر واحد من وسط EC.
أضف 10 ميكرولتر من معلق الخلية المخفف من واحد إلى 10 إلى أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على 10 ميكرولتر من صبغة تريبان الزرقاء. عد الخلايا يدويا باستخدام غرفة نيوباور. بعد العد ، استبدل وسط الخلية البطانية في الغرفة العلوية للرقاقة الحيوية ب 200 ميكرولتر من وسط EC يحتوي على 0.4 مرة 10 إلى قوة ستة مزارع خلايا بطانة الوريد السري البشري.
ضع طبق بتري الزجاجي مع الرقائق الحيوية عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. قم بإجراء تبادل متوسط يومي مع 300 ميكرولتر من وسط EC للغرفة العلوية ، و 200 ميكرولتر من RPMI + وسيط للغرفة السفلية. بعد غسل الخلايا الوحيدة بملليلتر واحد من PBS ، قم باحتضانها في برنامج تلفزيوني تم تسخينه مسبقا يحتوي على يدوكائين و EDTA عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة سبع دقائق.
جمع وطرد مركزي الخلايا في 350G لمدة سبع دقائق. بعد إعادة التعليق في ملليلتر واحد من RPMI + عد الخلايا كما هو موضح سابقا. البذور 0.1 في 10 أس ست حيدات معلقة في 200 ميكرولتر من RPMI + في الغرفة السفلية.
ضع منافذ الرقاقة الحيوية متجهة لأسفل بحيث تلتصق الخلايا بالغشاء.
