للبدء، قم باستيراد كافة ملفات الفاكس إلى لوحة معلومات التحليل. افتح أحد الملفات لعرض مخطط التشتت الجانبي المبعثر الأمامي. قم ببناء بوابة مضلعة لعزل الخلايا السليمة ، وتجنب الحطام في الزاوية اليسرى السفلية من قطعة الأرض.
قم بتسمية المحتوى الفرعي كخلايا سليمة واسحب هذه البوابة إلى شريط كافة العينات. تحقق من بوابة كل عينة باستخدام زر العينة التالي. انقر نقرا مزدوجا فوق الخلايا الفرعية السليمة لعينة التحكم السلبية لإظهار مؤامرة جديدة.
اضبط محور الرسم على FL1-H على المحور X لتمثيل GFP وFL2-H على المحور Y الذي يمثل mCherry. بعد ذلك ، حدد أداة البوابات الرباعية وانقر على الطرف العلوي الأيمن من عدد الخلايا السالبة. اسحب البوابات الأربعة المستطيلة إلى شريط الخلايا السليمة.
افحص كل عينة من عناصر التحكم أحادية اللون GFP أو mCherry للحصول على بوابات صحيحة باستخدام زر العينة التالي. انتقل إلى محرر التخطيط. هنا ، حدد المؤامرات التمثيلية واختر نسخ إلى محرر التخطيط.
حدد جميع المؤامرات التمثيلية ثم انقر نقرا مزدوجا لفتح تعريف الرسم البياني. اسم تسمية المحور X ك GFP وتسمية المحور Y ك mCherry. حدد الكفاءة النسبية لإصلاح الحمض النووي من خلال مقارنة عدد الخلايا الموجبة ل GFP بعدد الخلايا الموجبة mCherry داخل نفس المخطط.
تم تنفيذ تعديل مناسب للتعويضات واستراتيجية البوابات لضمان دقة تحليل NHEJ والموارد البشرية. وضعت هذه الإستراتيجية الخلايا الإيجابية GFP في الربع الأيمن السفلي والخلايا الإيجابية mCherry في الربع الأيسر العلوي. أشارت النسبة المئوية للخلايا الإيجابية GFP إلى إصلاح الحمض النووي DSB وكفاءة النقل.
على العكس من ذلك ، فإن النسبة المئوية للخلايا الإيجابية mCherry تعكس فقط كفاءة النقل. تم حساب كفاءة إصلاح الحمض النووي DSB كنسبة من GFP إيجابية إلى الخلايا الإيجابية mChere. بالإضافة إلى ذلك ، تم إثبات دور بروتين متلازمة Wiskott-Aldrich و SCAR Humalog أو بروتين WASH في إصلاح الحمض النووي باستخدام مقايسة NHEJ على خلايا shCONTROL و shWASH.
أدى فقدان المياه والصرف الصحي والنظافة الصحية إلى تقليل كفاءة NHEJ ، مما يؤكد دورها في تعزيز NHEJ.
