التلوين المناعي للعضويات المشتقة من سرطان القولون والمستقيم في هيدروجيل الببتيد

للبدء ، ماصة 20 ميكرولتر قطرات من هيدروجيل الببتيد في لوحة 24 بئر. زرع 800 خلية من خط خلايا SW1222 في كل بئر لمدة أربعة أيام. في اليوم الرابع ، ماصة خارج المتوسط.

اغسل كل بئر مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني. ثم أضف 400 ميكرولتر من محلول الفورمالديهايد 4٪ في الآبار. بمجرد اكتمال الحضانة ، استخدم طرف ماصة P1000 لشفط محلول الفورمالديهايد.

ثم اغسل الآبار باستخدام برنامج تلفزيوني مرة أخرى. احتضان الخلايا في ملليلتر واحد من العازلة للنفاذية لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد سحب المخزن المؤقت وغسل الآبار باستخدام PBS ، أضف 0.5 ملليلتر من المخزن المؤقت للحظر.

الآن ، اغسل الآبار باستخدام PBS بعد إزالة المخزن المؤقت للحظر. ثم ، ماصة 200 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية المخففة في الآبار. احتضان اللوحة بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية.

باستخدام طرف ماصة P200 ، قم بإزالة المحلول. ثم اغسل الآبار بمحلول PBS. بعد ذلك ، أضف اقتران phalloidin إلى قارورة من الأجسام المضادة الثانوية المخففة بنسبة واحد إلى 40.

ماصة هذا الخليط في آبار اللوحة. ثم ، احتضان اللوحة في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاث ساعات في الظلام. بعد استنشاق المحلول وغسل الآبار باستخدام PBS ، ماصة 300 ميكرولتر من محلول DAPI في كل بئر.

بعد الحضانة ، اغسل الآبار باستخدام برنامج تلفزيوني مرة أخرى بعد سحب المحلول. قم بتخزين الطبق في أربع درجات مئوية لمدة تصل إلى سبعة أيام. أظهر التلوين المناعي أن المواد العضوية الموجودة في الببتيد P غير الوظيفي الحيوي ، والببتيد الوظيفي الحيوي P1 ، و Matrigel تم العثور عليها موضعية في الأغشية القمية والقاعدية.

الببتيد غير الوظيفي P المستحث تعبير تقاطع الخلية الخلوية في الغشاء القاعدي.