توليد عالي الإنتاجية من الكرات متعددة الخلايا من خط الخلايا السرطانية البشرية للتصوير المباشر 3D

لإلقاء أطباق 3D Petri ، شطف micromolds في الماء المقطر ووضعها في حاوية autoclavable للتعقيم. أضف 0.9٪ محلول ملحي معقم إلى مسحوق الأوتوكلاف أغاروز في زجاجة زجاجية سعة 200 ملليلتر. قم بربط الغطاء بشكل غير محكم لتجنب تراكم الضغط وقم بتدوير الزجاجة لخلط مسحوق الأغاروز.

غلي مسحوق الأغاروز في فرن ميكروويف مع اهتزاز متقطع. بمجرد أن يبرد محلول الأغاروز ، ماصة الأغاروز المنصهر في القالب الصغير وانتظر حتى يصلب. بعد ذلك ، قم بثني القالب الصغير بعناية لإزالة طبق 3D Petri ونقله إلى لوحة زراعة الأنسجة المكونة من 12 بئرا.

لموازنة طبق 3D Petri ، أضف 2.5 ملليلتر من وسط McCoy's 5A لكل بئر ، واحتضانه لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد التوازن النهائي ، قم بإزالة جميع وسائط الاستزراع المحيطة بطبق 3D Petri وداخل الطبق تماما. بالتنقيط ، قم بزرع 190 ميكرولترا من تعليق الخلية يحتوي على 40،500 خلية في غرفة البذر والسماح للخلايا بالاستقرار لمدة 10 دقائق.

أضف ملليلتر من وسط McCoy's 5A إلى الخارج من طبق 3D Petri ، واحتضانه عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. بعد أربعة أيام ، تكون الأجسام الكروية مضغوطة بما يكفي للفحص المجهري. أضف 200 ميكرولتر من محلول الطلاء إلى كل بئر من صفيحة استزراع قاع U ذات 96 بئرا ، واحتضانها لمدة دقيقة واحدة.

قم بإزالة محلول الطلاء الزائد واترك اللوحة تجف لمدة ساعة واحدة. انظر 200 ميكرولتر من تعليق الخلية تحتوي على 500 خلية لكل بئر واحتضانها عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة أربعة أيام على الأقل.