الإنتاج والفحص المجهري للتصوير مدى الحياة للخلايا الحية متعدد المعلمات (FLIM) للكرويات متعددة الخلايا

في هذا العمل ، نقدم ونقارن طرق تكوين كروية يمكن استخدامها لتحليل استقلاب الخلية وتوزيع الأكسجين باستخدام المجهر الخلوي الحي. في السنوات الأخيرة ، تم استخدام الفحص المجهري للتصوير مدى الحياة على نطاق واسع للتحقيق في المؤشرات الحيوية الأيضية مثل NADPH و FAD في الخلايا الحية ، وتم تطوير العديد من الجسيمات النانوية الفلورية لتعدد هذه القياسات مع تصوير أكسجة الخلايا والأنسجة. يمكن للكرويات متعددة الخلايا ، والمواد العضوية ، والأعضاء على رقاقة تكرار بيئة دقيقة معقدة تشبه الجسم الحي ، مما يقلل من الحاجة إلى الأبحاث الحيوانية.

بالنسبة لإنتاج الكرة الأرضية ، نعرض طرق تشكيل مختلفة ، يمكن أن تمتد من إنتاجية منخفضة إلى عالية. كما أنها تسلط الضوء على إمكانية الوصول البصري ، والتوافق مع مجهر التصوير مدى الحياة الفلوري ، وإمكانية تضمين مكونات مصفوفة خارج الخلية. لذلك ، على الرغم من أن نماذج 3D في المختبر توفر سياقا أفضل مقارنة بثقافات 2D ، إلا أن تقلبها العالي ، وقابلية التكاثر المنخفضة ، والتقارير التجريبية غير المكتملة لا تزال تمثل مشكلة.

يمكن أن تؤدي معلمات مثل حجم الكرة ، وتكوين المغذيات ، واللزوجة خارج الخلية ، وحتى طرق تكوين الكرة إلى زيادة عدم التجانس الخلوي. من خلال هذا البروتوكول ، نهدف إلى تنسيق وتوحيد طرق إنتاج الكرة ، وتسليط الضوء على الجوانب الرئيسية المهمة للتحليل المستمر للحياة ومتعدد المعلمات للكرويات باستخدام مجهر FLIM.