للبدء ، قم بإزالة لوحة الثقافة التي تحتوي على ديدان أنثى خنثى بالغة من الحاضنة. بعد مزامنة الديدان 5 ، اغسل الديدان خمس مرات باستخدام المخزن المؤقت M9. انقل الذكور البالغين البالغين من العمر يوما واحدا من الصفيحة المصنفة إلى أنبوب يحتوي على مخزن مؤقت M9.
ضع الديدان على صفيحة NGM غير مصنفة للقضاء على البكتيريا المتبقية ومنع التداخل من الطعام أثناء الفحص. قم بإعداد لوحة فحص الجذب الكيميائي مع 1.5٪ مثقاب ، و 25 مللي مولار كلوريد الصوديوم ، و 1.5 مللي مولار قاعدة تريس ، و 3.5 مللي مولار تريس هيدروكلوريد. سخني المثقاب في محلول الجذب الكيميائي في الميكروويف حتى يذوب تماما.
بعد التبريد ، استخدم ماصة لتوزيع محلول مثقاب الجذب الكيميائي بالتساوي في أطباق بتري. اترك الأغطية مفتوحة في مكان نظيف للسماح لسطح المثقاب بالجفاف قليلا. بمجرد أن يجف السطح بشكل مناسب ، أغلق الأغطية.
لإجراء اختبار الجذب الكيميائي ، ضع علامة على ثلاث نقاط مميزة على الغطاء والجانب السفلي من طبق بتري. ضع ميكرولترين من أزيد الصوديوم المولي على كل بقعة تجريبية وتحكم على اللوحة. اختر 20 ديدة ذكور صحية وحركة بحرية باستخدام منتقي الديدان.
تحت مجهر تشريح ، حرر الدودة عند نقطة البداية. أضف بسرعة ميكرولترين من المخزن المؤقت M9 إلى مكان التحكم وميكرولترين من الفرمون الجنسي إلى البقعة التجريبية على الغطاء. أغلق الغطاء برفق وضع الطبق في مكان هادئ ومستقر في درجة الحرارة.
بعد 30 دقيقة ، قم بتسجيل الاختبار عن طريق حساب عدد الديدان في كل نقطة. للحصول على تقييم محسن للانجذاب الكيميائي ، سجل مسارات الديدان باستخدام الكاميرا. كان مؤشر الانجذاب الكيميائي ل 5 ذكور أعلى باستمرار من 0.5 ، مما يشير إلى انجذاب قوي لمصدر الفرمون الجنسي ، بينما كان مؤشر الانجذاب الكيميائي للذكور SRD-1 حوالي الصفر.
أظهرت فحوصات الجذب الكيميائي الناجحة أن 5 ذكور يقتربون من مصدر الفرمون بمرور الوقت ، مع مسارات مرمزة بالألوان تشير إلى الوقت والمسافة والسرعة والاستقامة وصحة الاتجاه.
