بعد إجراء اكتساب نقطة PLA لتوطين تفاعل البروتين ، افتح الصور من ظروف مختلفة لضبط معلمات التحليل في ImageJ. حدد هذه المعلمات وحددها جنبا إلى جنب مع البيانات الموجودة في برنامج الماكرو. لإزالة الخلفية، انقر فوق المعالجة وطرح الخلفية.
استخدم وظيفة المعاينة لاختبار أنصاف أقطار الكرة المتدحرجة المختلفة. لإزالة الضوضاء، انقر فوق المعالجة والضوضاء وإزالة العيوب. ثم انقر فوق عملية وسلس في قائمة النواة لتطبيق الوظيفة السلسة وتحسين التعبئة.
الآن ، انقر فوق صورة ، ثم اكتب ، وحدد 8 بت للتحويل إلى صورة 8 بت. بعد ذلك ، اضبط العتبة بالانتقال إلى الصورة ، والضبط ، وأخيرا ، العتبة. اضبط العتبة لتصور جميع النوى أو النقاط في الصورة ، مع تجنب التشبع المفرط وانهيار الهياكل.
لاحظ أيضا القيم واختبرها في صور مختلفة. للتحويل إلى قناع، انقر فوق معالجة وثنائي وتحويل إلى قناع. بالنسبة للنواة، انقر فوق عملية وثنائي وملء الثقوب، متبوعا بالعملية والثنائي ومستجمعات المياه.
بالنسبة لنقاط PLA، انقر فوق عملية وثنائي ومستجمعات المياه. لعد النوى ، قم بقياس مساحة أو طول النوى المختلفة لتقدير متوسط الحجم. استخدم قيمة تقريبية لتحليل الجسيمات بالنقر فوق تحليل الجسيمات وتحليلها.
اضبط الحجم على 15 ما لا نهاية وتحقق من الخيارات. إظهار القناع وعرض النتائج ومسح النتائج والإضافة إلى المدير والاستبعاد على الحواف. لحساب نقاط جيش التحرير الشعبى الصينى ، قم بقياس مساحتها أو نصف قطرها لتقدير متوسط حجمها.
لكل عائد استثمار على مدير عائد الاستثمار، انقر فوق تحليل الجسيمات وتحليلها. اضبط الحجم على 0.02 إلى 3. تحقق من الخيارات ، وإظهار القناع ، وعرض النتائج ، ومسح النتائج ، والتلخيص ، والاستبعاد على الحواف.
احفظ النتائج التي توضح عدد النقاط لكل نواة في كل نواة موجودة في الصورة. زاد تفاعل Nek4 Ku70 في النواة بعد تلف الحمض النووي بعد 20 دقيقة وساعة وثلاث ساعات من معالجة الإيتوبوسيد مقارنة بالخلايا الضابطة والخلايا المعالجة ب DMSO. زاد علاج إيتوبوسيد بشكل كبير من تفاعل Nek5 topoisomerase 2-beta مقارنة بالتحكم DMSO.
زاد تلطيخ Gamma-H2AX بعد 20 دقيقة من العلاج بالإيتوبوسيد وظل مرتفعا لمدة تصل إلى ثلاث ساعات ، مما يشير إلى استجابة مستمرة لتلف الحمض النووي.
