الجمعية الأميركية للسرطان (MRSG - 08 - 108 - 01) ، فنسنت J. Sgro / استئصال ورم من الدماغ والرابطة الأمريكية ، ومؤسسة الأسرة خان ناكانو أنا.

1. إعداد وسائل الاعلام <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد أعدت وسائل الإعلام باستخدام 10 ٪ FBS (16140-071 -- GIBCO) في DMEM/F-12 (1X) ، السائل 1:1 (10565-042 -- Invitrogen) مع 0.6 ٪ حل آجار منقى ، حبيبات (1.01614.1000 - EMD ). وبقيت ظروف معقمة في كافة مراحل التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعداد وسائل الاعلام من 5mL FBS (16140-071 -- GIBCO) تم إضافتها إلى 45mL من DMEM/F-12 (1X) ، السائل 1:1 (10565-042 -- Invitrogen) مما يجعل الحجم النهائي لل50mL. تم الإبقاء على وسائل الإعلام على استعداد في حمام الماء عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد أعد الحل آغار طريقة استخدام الحرارة الميكروويف. تم حله 0.3 غرام في 50mL آغار حبيبات الماء المقطر باستخدام الميكروويف. كان الحل آغار تبرد إلى 37 درجة مئوية درجة الحرارة عن طريق الحفاظ عليه في حمام مائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدمنا حجم مساو من وسائل الإعلام من الخطوة 1.2 و 1.3 و أعد حل الأسهم. كانت نسبة 0.6 ٪ من أجار (0.5mL) و 10 ٪ FBS-D-MEM/F-12 سائل الإعلام (0.5mL) 01:01 ، مما يجعل مجموع حجم 1 مل في كل بئر من 6 لوحات جيدا. </li></ol> 2. معالجة الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد وردت ورم أرومي دبقي الأشكال (GBM) الأنسجة فورا بعد الجراحة من قسم علم الأمراض. وقد صنفت الأنسجة والخليج للحاسبات الآلية من قسم علم الأمراض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم نقل الأنسجة لباتري لوحة باستخدام الملقط بعناية وغسلها 1XPBS 5mL الجليد الباردة لمدة 3 مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقطعت أجزاء التسلسلي للعينات من عينات تشريح لإنشاء كتل الورم (تقريبا 10 مليمتر في القطر) بشفرة الجراحية (الريشة - 2976 # 10) وforcep (فيشر العلمية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم نقل كتل في لوحة 6 جيدا. كل 1mL جيدا والتي تحتوي على وسائل الإعلام ذكر في الخطوة 1.4. وكان النسيج التعرض للهواء بما فيه الكفاية للحفاظ على النسيج قابلة للحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم تم حقن الورم إما مع كتل DMSO (5 ٪) أو زد (2.5 نانومتر) وحضنت لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية في الهواء مرطب يحتوي على 5 ٪ CO2. تم حقن 0.1mL من DMSO (5 ٪) أو زد 3 مرات في كتل الأورام في أماكن مختلفة للعلاج متسقة. تم حقن الدواء باستخدام الحقنة 1mL الأنسولين 0.37X12.7mm 28G1 / 2 (الراحة 26027 نقطة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 16 ساعة تم غسلها مع كتل 5 1XPBS مل لمدة 3 مرات. بعد غسل كتل كانت ثابتة مع 10ML 10 ٪ V / V الفورمالين لمدة 24 ساعة (Ricca الشركة الكيميائية) في أنابيب مل 50 (BASIX - 5539802) ، والمجهزة للالبارافين 4μm جزءا لا يتجزأ من المقاطع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضعت المقطع الفورمالين ثابتة في الدورق على لوحة مع تحريك &quot;لا حرارة&quot; ، ومعالجتها من خلال الحلول التالية لمدة 30 دقيقة في كل حل. 30 ٪ من الإيثانول ، والايثانول 50 ٪ ، 75 ٪ من الإيثانول ، والايثانول 80 ٪ ، 95 ٪ من الإيثانول ، والإيثانول بنسبة 100 ٪ ، والزايلين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد نشف النسيج على مناشف ورقية وضعت في البارافين ذاب (58 إلى 60 درجة مئوية والبارافين Paraplast فيشر) لمدة 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وكان جزءا لا يتجزأ من النسيج في قوالب باستخدام Surgipath البارافين الشريط الأزرق ، جزءا لا يتجزأ من نسيج تبريده إلى درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد اتخذت جزءا لا يتجزأ من البارافين أقسام الأنسجة 4μm ووضعها على الشرائح بلس فيشر. </li></ol> 3. المناعية تم تنفيذ المناعية كما هو موضح سابقا. 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Deparaffinization ومكان الإماهة الشرائح في رفوف وتنفيذ الخطوات التالية. الزيلين ل3x5 دقيقة (3 مرات لمدة 5 دقائق) ، والإيثانول بنسبة 100 ٪ لمدة 3x5 ، والإيثانول 95 ٪ لمدة 1x5 ، والإيثانول 70 ٪ لمدة 1x5 ، شطف في ادارة مياه الصنبور لمدة 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استرجاع المستضد مع الشرائح بفعل الحرارة حاتمة تزج في استرجاع العازلة سيترات 1X (الحرارية العلمي AP9003 - 500) المخفف في الماء المقطر في الكأس الزجاجي. يغلي لمدة 15 دقيقة على طبق ساخن (تأكد من المقاطع ارتداء &quot;ر تسقط الشريحة). برد حل لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اشطف الشرائح مع 1X PBS ل3x5 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تثبيط بيروكسيد الداخلية تزج الشرائح في الميثانول (فيشر العلمية - A - 452 - 4) مع بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 0.3 ٪ (فيشر العلمية - BP2633 - 500 - المخفف في الماء المقطر) في كوب من الزجاج لمدة 15 دقيقة. شطف في برنامج تلفزيوني عن 1X 3x5 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حظر غطاء من الأنسجة مع 10 ٪ مصل الماعز العادية. نقل الشرائح في مربع الرطبة واحتضان لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. تغسل الشرائح مع 1X PBS ل3x5 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وحضنت الأقسام الضد الأولية بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية بتركيزات التالية : 3 كاسباس محددة الإنسان (1:1،000 ، R &amp; D أنظمة ، AF835) ، Ki67 (1:1 ، داكو ، 15626) المخفف مع 1X PBS. شطف الشرائح في برنامج تلفزيوني 1X 3x10 دقيقة في اليوم التالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الثانوية تفاعل الأجسام المضادة مع غطاء للأنسجة 2-3 قطرات من الأجسام المضادة المسماة HRP الثانوي (تصور الأنظمة). وضع الشرائح في مربع الرطبة واحتضان لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. يغسل مع برنامج تلفزيوني عن 1X 3x10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكشف عن وضع عدة DAB مولد اللون (ناقلات المختبرات - SK - 4100) للكشف عن الأجسام المضادة الأولية التالية بروتوكول الشركة المصنعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تلطيخ مكافحة تزج الشرائح مع الهيماتوكسيلين (10-15 ق<html> econds ، تأكد من ارتداء &quot;ر تجاوز إشارة DAB). شطف مع ادارة مياه الصنبور لمدة 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزج الجفاف الشرائح في الترتيب التالي ، والإيثانول 70 ٪ لمدة 5 دقائق ، والإيثانول 95 ٪ لمدة 5 دقائق ، والإيثانول بنسبة 100 ٪ لمدة 3x5 ، 3x5 الزيلين لدقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زلة تغطية الشرائح مع permount كاشف تركيب (فيشر العلمية - SP - 15 - 100). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذت الصور باستخدام المجهر مضان أوليمبوس (DP - 72).3.11). في جميع التجارب ، وأكد وضع العلامات المحددة التي تحكم سلبي دون الضد الابتدائي. </li></ol> 4. ممثل النتائج : جمعنا عينات الجراحية للورم أرومي دبقي الأشكال (GBM). وخضع المرضى لأول عملية جراحية من دون الكيميائي قبل بما في ذلك temozolomide (TMZ). أظهرت صورة T1 المرجحة من التصوير بالرنين المغناطيسي مع تعزيز الجادولينيوم في الشكل - 1A ورم المعززة في الفص الجبهي الأيمن قبل الجراحة. وأكد صورة بعد العملية الجراحية (الشكل - 1B) المجموع الفرعي إزالة الآفة بعد الجراحة. أرسلت الأنسجة جراحية لقسم علم الأمراض لغرض التشخيص السريري ، وتمت معالجة العينات المتبقية لشراء الأنسجة تحت وافق مجلس المراجعة المؤسساتي (IRB) البروتوكول في ولاية أوهايو المركز الطبي لجامعة. وأظهرت الهيماتوكسيلين يوزين (H &amp; E) تلطيخ وجود نخر ، وخلايا pseudopallisading والاوعية الدموية الدقيقة الانتشار (الشكل 1 ج). وبالتالي ، تم تشخيص هذه الأورام وhistopathologically GBM. من المذكرة ، حافظت explants الورم التالية الحضانة دون TMZ تصل إلى 48 ساعة في التهندس الخلوي من الخليج للحاسبات الآلية ، وفي المقابل ، مع الحضانة لمدة 72 ساعة أو أكثر ، لاحظنا زيادة عدد النوى مكثف في العينات ، مما يشير إلى بعض الخلايا السرطانية بدأت الخضوع لموت الخلايا المبرمج. نتيجة لذلك ، أنسجة الورم التالية الواردة يعد حضانة المناطق العشوائية التي فقدت الخلايا السرطانية ، والتي لوحظت بشكل تفضيلي في وحول مناطق نخرية (لا تظهر البيانات). نحن اختبار من أجل التحقيق إذا موثوق هذه العينات يزدرع الورم ستستخدم لغرض اختبار نجاعة الأدوية ، وتأثير العلاج TMZ. الرقم 2 يمثل تدفق التجارب في هذه الدراسة. وأشارت دراسة حديثة أن حقن intratumoral من TMZ له تأثير أكثر فعالية في مجال مكافحة نمو دبقي الخبيثة من أن الإدارة الشاملة لهذا الدواء 2. بعد حضانة لمدة 16 ساعة ، وكانت جزءا لا يتجزأ من هذه explants مع البارافين وأعدت المقاطع التسلسلي للتلوين. تظاهر المناعية للأنسجة GBM TMZ المعالجة إجراء تخفيض كبير في الخلايا السرطانية كي - 67 - إيجابية مقارنة مع عينات السيطرة. في المقابل ، لم المناعية مع علامة موت الخلايا المبرمج ، كاسباس 3 ، لم تسفر عن أي اختلاف كبير بين عينات دبقي TMZ المعالجة ومراقبة العينات (الشكل 3). وتميزت كذلك تأثير العلاج مع TMZ عن طريق الجمع بين هذا الاختبار مع يزدرع سواء في الثقافة أو المختبر التدفق الخلوي. على وجه التحديد ، سعينا إلى تحديد تأثير على خلايا تشبه الخلايا الجذعية السرطانية (SCLTC). لذا ، وبعد العلاج مع intratumoral TMZ ، أجرينا فحص مجال التشكيل والتدفق الخلوي لهذه explants الورم. وكانت العينات TMZ المعاملة نأت إلى خلايا فردية واحدة وكانت هذه الخلايا المصنف واحد في كثافة منخفضة (1 في الخلية ميكروليتر أو أقل) في لوحات 96 - جيدا في المصل خالية المتوسطة وتستكمل مع bFGF EGF. في السيطرة على المجموعة ، لوحظ تشكيل الورم من المجالات explants الورم بعد حضانة لمدة 7 أيام. نظرا إلى أن تشكيل المجال هو خاصية من SCLTC 3 4 ، وتعديلات في عدد من المجالات الورم قبل العلاج من تعاطي المخدرات يشير إلى التأثير على SCLTC. وبالمثل ، لم يتم القيام التدفق الخلوي من ورم explants فصلها مع خلية علامة السطح ، CD133 ، للتحقق من تأثير على SCLTC. إذا تم القضاء على SCLTC انتقائي في الخلايا السرطانية غير متجانسة في الخليج للحاسبات الآلية عن طريق العلاج من تعاطي المخدرات ، يمكن للمرء أن يتنبأ بأن التدفق الخلوي ينبغي أن يكشف عن انخفاض في نسبة CD133 إيجابية من العلاج (لا تظهر البيانات). <img src="/files/ftp_upload/2846/2846fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> Figure.1 صور الرنين المغناطيسي (MRI) من الخليج للحاسبات الآلية المريض. شخصيات ممثل عملية ما قبل الشكل ، وآخر عملية 1A - 1B - الشكل. الرقم - 1C هو H &amp; E تلطيخ العذبة GBM عينة الأنسجة. التكبير الأصلي ، 40X. <img src="/files/ftp_upload/2846/2846fig2.jpg" alt="الشكل 2"/> الرقم. 2 تدفق التجريبي لتجربة الثقافة كتلة الشكل - 2A. تلقى صورة GBM جراحية جديدة من قسم علم الأمراض. الرقم - 2B يظهر تشريح كتلة الورم إلى أجزاء صغيرة مع 10MM مساعدة شفرة جراحية. الرقم - 2C هو الدواء (TMZ) معاملة كتل الورم باستخدام حقنة الانسولين. ه 3 &quot;/&gt; الرقم. 3 المناعية. المناعية من كتل الأنسجة GBM حقنوا DMSO أو TMZ مع 3 - Caspase المنشط وKi67. كان يستخدم لتلوين الهيماتوكسيلين النووية. التكبير الأصلي ، 40X.

<ol>
	<li>Hemmati, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancerous+stem+cells+can+arise+from+pediatric+brain+tumors.">Cancerous stem cells can arise from pediatric brain tumors.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 15178-15183 (2003).</li><li>Heimberger, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temozolomide+delivered+by+intracerebral+microinfusion+is+safe+and+efficacious+against+malignant+gliomas+in+rats.">Temozolomide delivered by intracerebral microinfusion is safe and efficacious against malignant gliomas in rats.</a> Clin Cancer Res. 6, 4148-4153 (2000).</li><li>Nakano, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+embryonic+leucine+zipper+kinase+is+a+key+regulator+of+the+proliferation+of+malignant+brain+tumors,+including+brain+tumor+stem+cells.">Maternal embryonic leucine zipper kinase is a key regulator of the proliferation of malignant brain tumors, including brain tumor stem cells.</a> J Neurosci Res. 86, 48-60 (2008).</li><li>Laks, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosphere+formation+is+an+independent+predictor+of+clinical+outcome+in+malignant+glioma.">Neurosphere formation is an independent predictor of clinical outcome in malignant glioma.</a> Stem Cells. 27, 980-987 (2009).</li><li>Phillips, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+subclasses+of+high-grade+glioma+predict+prognosis,+delineate+a+pattern+of+disease+progression,+and+resemble+stages+in+neurogenesis.">Molecular subclasses of high-grade glioma predict prognosis, delineate a pattern of disease progression, and resemble stages in neurogenesis.</a> Cancer Cell. 9, 157-173 (2006).</li><li>He, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycoproteomic+Analysis+of+Glioblastoma+Stem+Cell+Differentiation.">Glycoproteomic Analysis of Glioblastoma Stem Cell Differentiation.</a> J Proteome Res. , (2010).</li><li>Ma, Y. H., Xu, Q. S., Zheng, J. S., Zhou, Y. Q., Zhan, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+stem+cell+markers+and+proliferative+labeling+on+glioma+cell+lines].">Expression of stem cell markers and proliferative labeling on glioma cell lines].</a> Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi. 37, 333-334 (2008).</li><li>Vik-Mo, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+stem+cells+maintain+overall+phenotype+and+tumorigenicity+after+in+vitro+culturing+in+serum-free+conditions.">Brain tumor stem cells maintain overall phenotype and tumorigenicity after in vitro culturing in serum-free conditions.</a> Neuro Oncol. 12, 1220-1230 (2010).</li><li>Hovinga, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+notch+signaling+in+glioblastoma+targets+cancer+stem+cells+via+an+endothelial+cell+intermediate.+Stem+Cells.">Inhibition of notch signaling in glioblastoma targets cancer stem cells via an endothelial cell intermediate. Stem Cells.</a> 28, 1019-1029 (2010).</li><li>de Groot, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+invasion+after+treatment+of+glioblastoma+with+bevacizumab:+radiographic+and+pathologic+correlation+in+humans+and+mice.">Tumor invasion after treatment of glioblastoma with bevacizumab: radiographic and pathologic correlation in humans and mice.</a> Neuro Oncol. 12, 233-242 (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

هناك فجوة بين نجاعة الأدوية في نماذج ما قبل السريرية التجريبية الحالية وفعالية في المرضى. بشكل أكثر تحديدا ، في مجال البحوث السرطانية في الدماغ ، هناك حاجة أساليب جديدة وموثوق بها من شأنها أن تساعد سد الفجوة القائمة بين التقييم والمخدرات مع الطرق الحالية وفعالية في المرضى. المقايسة الموصوفة في هذه الدراسة هو ميزة إضافية ، إن لم يكن حلا ، لتسهيل ملء التناقض في البيانات التجريبية ونتائج المرضى المتضررين. في ثقافات الخلية المختبر توسيع تفضيلي بعض أنواع الخلايا السرطانية بغض النظر عن الظروف والثقافة ، وتمثل سوى subpopulation الورم بأكمله. 5 وبالإضافة إلى ذلك ، والتحول الجيني والمظهري للتوسع الخلية الاصطناعية ويحدث أمر لا مفر منه مع ثقافات الخلية على المدى الطويل . واحدة من العقبات الرئيسية لعلاج دبقي الخبيثة هو عدم التجانس من الخلايا السرطانية ، سواء داخل الورم واحد وبين عينات الورم 6 ، 7. لذلك ، تخصيب انتقائية لبعض السكان من الخلايا السرطانية ، وبغض النظر عن نوع واحد أو لآخر ، قد لا تكون وسيلة مناسبة لتحديد فعالية العلاج الكيميائي وكلاء أي على خلايا الورم غير المتجانسة. 8 9 فأي نموذج حيواني من أورام المخ مستمدة من subpopulation من تسليط الأضواء على الخلايا السرطانية على نجاعة الأدوية subpopulation ، ولكن ليس الورم بأكمله. العديد من القيود ، من ناحية أخرى ، لا تزال هذه الطريقة في يزدرع الورم. واحد مثل هذا التقييد هو فترة قصيرة نسبيا من العلاج. منذ تعتبر خلايا الورم الخبيث لاكتساب المقاومة لمعظم ، إن لم يكن كلها ، والعلاجات مع مرور الوقت ، قد لا تستطيع السيطرة الأولي للنمو على المدى القصير الخلية السرطانية التي تنعكس على المريض التشخيص على المدى الطويل ، كما ذكرت مؤخرا مع مكافحة وكيل عائية ، 10 بيفاسيزوماب. وبالتالي ، يتعين تحسين بروتوكول لهذا الاختبار ازدراع للحفاظ على الأنسجة لفترة أطول مع مزيد من التحقيقات. سؤال آخر هو الأثر المحدد للدواء اختباره على SCLTC في الورم. بالنظر إلى أن SCLTC مقاومة نسبيا للالعلاجات الحالية لدبقي الخبيثة ، وتحديد من الأدوية المضادة للسرطان أكثر قدرة القضاء على الرواية التي لها ما يبررها SCLTC. في هذا الصدد ، ونحن نسعى حاليا إلى الجمع بين هذا الاختبار يزدرع مع اللاحقة في التجارب المختبرية ، مثل مقايسة تشكيل neurosphere (لا تظهر البيانات). نتوقع لمعرفة المزيد عن آثار ، إن وجدت ، لمرشح على المخدرات من خلال هذه المقايسات SCLTC مجتمعة. أخيرا ، قد تستخدم كتل صغيرة من عينات الورم لا تعكس خلية الورم بأكمله السكان ، كما هو الحال مع خطوط الخلايا السرطانية أو الثقافات التقليدية الأولية من عينات جراحية. هذه القضايا جانبا ، والحفاظ على سدى الورم ، بما في ذلك مكانة الأوعية الدموية ، ومفيد في تشخيص العوامل البيئية لخلايا الورم. لذا ، قد يكون هذا الفحص لديها القدرة على تقييم أي استراتيجيات علاجية تحت شرط أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية. هنا أنشأنا مقايسة لاختبار نجاعة الدواء مع explants العينات الجراحية في الخليج للحاسبات الآلية. في الواقع ، مع العينات الجراحية اختبار ، وجدنا أن الحقن المباشر للTMZ يقلل من انتشار الأسلحة النووية في عينات الخليج للحاسبات الآلية. هذا الأسلوب ينطبق يزدرع الأنسجة نظريا السرطانات الصلبة الأخرى ، ويوفر الأصول لتحديد فعالية الدواء في ورم المريض ، الأمر الذي سيساعد على أمل تفادي فشل آخر لنا في التجارب السريرية لأمراض السرطان.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> الجنين البقري ، المؤهلة المصل ، الحرارة المعطل </td><td> GIBCO </td><td> 16140-071 </td></tr><tr><td> D-MEM/F-12 (1X) السائلة 01:01 </td><td> Invitrogen </td><td> 10565-042 </td></tr><tr><td> أجار أجار منقى ، حبيبات </td><td> EMD </td><td> 1.01614.1000 </td></tr><tr><td> DPBS للتلوين </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td></tr><tr><td> Hematoxyllin </td><td> Richalrd ألان الخيال العلمي </td><td> 7211 </td></tr><tr><td> 10 ٪ ث / ت 3 كاسباس الفورمالين </td><td> Ricca الشركة الكيميائية </td><td> 3810 </td></tr><tr><td> كاسباس 3 </td><td> R &amp; D نظم </td><td> AF835 </td></tr><tr><td> Ki67 </td><td> داكو </td><td> 15626 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> سيغما </td><td> D2650 </td></tr><tr><td> تصور نظام مكافحة الفأر </td><td> داكو </td><td> 2012-07 </td></tr><tr><td> تصور منظومة مضادة للأرنب </td><td> داكو </td><td> 2011-12 </td></tr><tr><td> DAB - طقم </td><td> ناقلات مختبر. </td><td> SK - 4100 </td></tr></table> الجدول 1. المواد. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم المعدات </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> 6 بليت حسنا </td><td> غرينر الحيوي one </td><td> 657160 </td></tr><tr><td> طبق بتري </td><td> VWR </td><td> 25384-302 </td></tr><tr><td> المصلية ماصة </td><td> Axygen </td><td></td></tr><tr><td> تصفية نصائح </td><td> الولايات المتحدة الأمريكية العلمي </td><td></td></tr><tr><td> 500 ميكرومتر البوليستر شبكة Netwell إدراج </td><td> Costar </td><td> 3480 </td></tr><tr><td> Matrigel ماتريكس </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 354230 </td></tr><tr><td> BD 10 مل حقنة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 309604 </td></tr><tr><td> المحور إبرة تحت الجلد الألومنيوم. </td><td> تايكو للرعاية الصحية </td><td> 2000029 </td></tr><tr><td> نسيج الثقافة القارورة </td><td> كورنينج </td><td></td></tr><tr><td> أنابيب الطرد المركزي </td><td> BASIX </td><td> 5539800 </td></tr><tr><td> أنابيب رقيقة الجدار </td><td> إيتون </td><td> 1107A </td></tr><tr><td> بليد الجراحية الفولاذ المقاوم للصدأ </td><td> ريشة </td><td> # 10 2976 </td></tr><tr><td> الأنسولين المحاقن </td><td> الراحة نقطة </td><td> 26027 </td></tr><tr><td> 50mL شقة سقف أعلى أنبوب المسمار </td><td> BASIX </td><td> 5539802 </td></tr><tr><td> تشريح المجهر </td><td> Tritech </td><td></td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> اوليمبوس </td><td> DP - 72 </td></tr><tr><td> Forcep </td><td> فيشر الكيمياء </td><td></td></tr></table> الجدول 2. تجهيزات.

method for novel anti-cancer drug development using tumor explants of surgical specimens

العلاجات الحالية للدبقي الخبيثة لها تأثير سوى المسكنات. من أجل التنمية العلاجية ، واحدة عقبة تتمثل في التفاوت في فعالية الحالية التي تحددها اختبارات كفاءة وفعالية الدواء على المرضى. وبالتالي ، هناك ما يبرر أساليب جديدة وموثوق بها لتقييم نجاعة الأدوية في مرحلة ما قبل السريرية. المختبر في الثقافة من الأنسجة السرطانية ، بما في ذلك خطوط الخلية ، وإجراء تعديلات جوهرية المظهرية والوراثية ، وجينية من خلايا السرطان الناجمة عن بيئة اصطناعية للثقافة الخلية ، والتي قد لا تعكس بيولوجيا الأورام في الموقع الأصلي. نماذج طعم أجنبي مع الفئران العوز المناعي أيضا قيود ، أي عدم وجود نظام المناعة ، والتناقضات بين الأنواع الجينية وجينية في المكروية. هنا ، ونحن يبرهن على وجود طريقة جديدة باستخدام العينات الجراحية للدبقي ورم خبيث وكتل لتقييم آثار undissociated العلاج. للتحقق من صحة هذه الطريقة ، يتم وصف البيانات مع وكيل أول السطر الحالي العلاج الكيميائي ، temozolomide (TMZ). استخدمنا عينة طازجة إزالة الجراحية للدبقي الخبيثة لتجاربنا. أجرينا حقن intratumoral من المرشحين TMZ أو المخدرات الأخرى ، تليها الحضانة والتحليل على عينات الجراحية. هنا ، سعينا إلى إقامة نسيج الورم يزدرع الأسلوب كمنصة لتحديد فعالية العلاجات المضادة للسرطان الرواية بحيث أننا قد تكون قادرة على التغلب عليها ، على الأقل ، بعض القيود الحالية وملء الفجوة القائمة بين التجريبية الحالية البيانات وفعالية على الورم الفعلية للمريض. هذا الأسلوب قد لديها القدرة على تسريع تحديد عوامل العلاج الكيميائي لمعالجة سرطان رواية الصلبة.

Watch this Scientific Journal Video about Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens at JoVE.com

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

هنا أنشأنا وسيلة لاختبار نجاعة الدواء مع العينات الجراحية للأورام الدماغ ، ويسمى &quot;طريقة يزدرع ورم سرطاني&quot;. مع هذا الأسلوب ، يمكننا تقييم نجاعة الأدوية دون كسر المكروية من الأورام الصلبة. للتحقق من مصداقية هذه الطريقة ، ونحن تصف بيانات عينة ممثلة مع دبقي لدينا تعامل مع وكيل أول السطر الحالي العلاج الكيميائي ، temozolomide.

أسلوب الرواية تطوير أدوية لمكافحة السرطان باستخدام Explants ورم العينات الجراحية


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

method-for-novel-anti-cancer-drug-development-using-tumor-explants

Research

JoVE Journal

Medicine

16.5K Views.  The Ohio State University Medical Center. هنا أنشأنا وسيلة لاختبار نجاعة الدواء مع العينات الجراحية للأورام الدماغ ، ويسمى "طريقة يزدرع ورم سرطاني". مع هذا الأسلوب ، يمكننا تقييم نجاعة الأدوية دون كسر المكروية من الأورام الصلبة. للتحقق من مصداقية هذه الطريقة ، ونحن تصف بيانات عينة ممثلة مع دبقي لدي...

Video: Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected cells can be used for a variety of investigations, such as transcriptomic or proteomic studies, DNA assessment or chromosomal analysis 2,3. An especially challenging application of LMD is transcriptome analysis, which, due to the lability of RNA 4, can be particularly prominent when cells are dissected from tissues that are rich of RNases, such as the pancreas. A microdissection protocol that enables fast identification and collection of target cells is essential in this setting in order to shorten the tissue handling time and, consequently, to ensure RNA preservation. 
Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic beta cells from surgical specimens to be used for transcriptomic studies 5. Small pieces of pancreas of about 0.5-1 cm3 were cut from the healthy appearing margins of resected pancreas specimens, embedded in Tissue-Tek O.C.T. Compound, immediately frozen in chilled 2-Methylbutane, and stored at -80 &deg;C until sectioning. Forty serial sections of 10 &mu;m thickness were cut on a cryostat under a -20 &deg;C setting, transferred individually to glass slides, dried inside the cryostat for 1-2 min, and stored at -80 &deg;C. 
Immediately before the laser microdissection procedure, sections were fixed in ice cold, freshly prepared 70% ethanol for 30 sec, washed by 5-6 dips in ice cold DEPC-treated water, and dehydrated by two one-minute incubations in ice cold 100% ethanol followed by xylene (which is used for tissue dehydration) for 4 min; tissue sections were then air-dried afterwards for 3-5 min. Importantly, all steps, except the incubation in xylene, were performed using ice-cold reagents - a modification over a previously described protocol 6. utilization of ice cold reagents resulted in a pronounced increase of the intrinsic autofluorescence of beta cells, and facilitated their recognition. For microdissection, four sections were dehydrated each time: two were placed into a foil-wrapped 50 ml tube, to protect the tissue from moisture and bleaching; the remaining two were immediately microdissected. This procedure was performed using a PALM MicroBeam instrument (Zeiss) employing the Auto Laser Pressure Catapulting (AutoLPC) mode. The completion of beta cell/islet dissection from four cryosections required no longer than 40-60 min. Cells were collected into one AdhesiveCap and lysed with 10 &mu;l lysis buffer. Each single RNA specimen for transcriptomic analysis was obtained by combining 10 cell microdissected samples, followed by RNA extraction using the Pico Pure RNA Isolation Kit (Arcturus). This protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their rapid and accurate recognition and collection. Further improvement of this procedure could enable the dissection of phenotypically different beta cells, with possible implications for better understanding the changes associated with type 2 diabetes.

Laser microdissection is a technique that allows the recovery of selected cells from minute amounts of parenchyma. Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic islets from surgical specimens to be used for transcriptomic studies. Our protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their collection.

تحسين بروتوكول للتسليخ مجهري ليزر من الجزر البنكرياسية الإنسان من عينات جراحية

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

رواية عالية الدقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنية التصوير لدراسة الاستجابة الديناميكية للمنشآت داخل القحف لنمو الورم والتداوي

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Transcriptomic Analysis of Human Retinal Surgical Specimens Using jouRNAl

Retinal detachment (RD) describes a separation of the neurosensory retina from the retinal pigmented epithelium (RPE). The RPE is essential for normal function of the light sensitive neurons, the photoreceptors. Detachment of the retina from the RPE creates a physical gap that is filled with extracellular fluid. RD initiates cellular and molecular adverse events that affect both the neurosensory retina and the RPE since the physiological exchange of ions and metabolites is severely perturbed. The consequence for vision is related to the duration of the detachment since a rapid reapposition of the two tissues results in the restoration of vision 1. The treatment of RD is exclusively surgical. Removal of vitreous gel (vitrectomy) is followed by the removal non essential part of the retina around the detached area to favor retinal detachment. The removed retinal specimens are res nullius (nothing) and consequently normally discarded. To recover RNA from these surgical specimens, we developed the procedure jouRNAl that allows RNA conservation during the transfer from the surgical block to the laboratory. We also standardized a protocol to purify RNA by cesium chloride ultracentrifugation to assure that the purified RNAs are suitable for global gene expression analysis. The quality of the RNA was validated both by RT-PCR and microarray analysis. Analysis of the data shows a simultaneous involvement of inflammation and photoreceptor degeneration during RD.

We used retinal samples from retinectomy for a transcriptomic analysis of retinal detachment. We developed a procedure that allows RNA conservation between the surgical blocks and the laboratory. We standardized a protocol to purify RNA by cesium chloride ultracentrifugation to assure that the purified RNAs are suitable for microarray analysis.

تحليل Transcriptomic من العينات الجراحية الإنسان الشبكية عن طريق مجلة

Retinal detachment (RD) describes a separation of the neurosensory retina  from the retinal pigmented epithelium (RPE). The RPE is essential for normal  ...

An Affordable HIV-1 Drug Resistance Monitoring Method for Resource Limited Settings

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in sub-Saharan Africa continue to expand, individuals on ART should be closely monitored for the emergence of drug resistance. Surveillance of transmitted drug resistance to track transmission of viral strains already resistant to ART is also critical. Unfortunately, drug resistance testing is still not readily accessible in resource limited settings, because genotyping is expensive and requires sophisticated laboratory and data management infrastructure. An open access genotypic drug resistance monitoring method to manage individuals and assess transmitted drug resistance is described. The method uses free open source software for the interpretation of drug resistance patterns and the generation of individual patient reports. The genotyping protocol has an amplification rate of greater than 95% for plasma samples with a viral load &#62;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The sensitivity decreases significantly for viral loads &#60;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The method described here was validated against a method of HIV-1 drug resistance testing approved by the United States Food and Drug Administration (FDA), the Viroseq genotyping method. Limitations of the method described here include the fact that it is not automated and that it also failed to amplify the circulating recombinant form CRF02_AG from a validation panel of samples, although it amplified subtypes A and B from the same panel.

Drug resistance testing for HIV-1 infected individuals failing antiretroviral therapy (ART) can guide future therapies and improve treatment outcomes. Optimizing individual and population health outcomes in high HIV prevalence but resource-limited settings will ultimately require affordable and accessible drug resistance genotyping and interpretation methods.

على طريقة الرصد بأسعار معقولة HIV-1 المقاومة للمخدرات المناطق ذات الموارد المحدودة

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in ...

A Mouse Tumor Model of Surgical Stress to Explore the Mechanisms of Postoperative Immunosuppression and Evaluate Novel Perioperative Immunotherapies

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to the development of metastatic disease in animal models and in cancer patients. Preclinical work from our group and others has demonstrated a profound suppression of innate immune function, specifically NK cells in the postoperative period and this plays a major role in the enhanced development of metastases following surgery. Relatively few animal studies and clinical trials have focused on characterizing and reversing the detrimental effects of cancer surgery. Using a rigorous animal model of spontaneously metastasizing tumors and surgical stress, the enhancement of cancer surgery on the development of lung metastases was demonstrated. In this model, 4T1 breast cancer cells are implanted in the mouse mammary fat pad. At day 14 post tumor implantation, a complete resection of the primary mammary tumor is performed in all animals. A subset of animals receives additional surgical stress in the form of an abdominal nephrectomy. At day 28, lung tumor nodules are quantified. When immunotherapy was given immediately preoperatively, a profound activation of immune cells which prevented the development of metastases following surgery was detected. While the 4T1 breast tumor surgery model allows for the simulation of the effects of abdominal surgical stress on tumor metastases, its applicability to other tumor types needs to be tested. The current challenge is to identify safe and promising immunotherapies in preclinical mouse models and to translate them into viable perioperative therapies to be given to cancer surgery patients to prevent the recurrence of metastatic disease.

A mouse tumor model of surgical stress is used to explore how postoperative immune suppression promotes metastatic disease and to evaluate immunostimulatory perioperative therapies.

نموذج الفأر ورم من الإجهاد الجراحية لاستكشاف آليات ما بعد الجراحة المناعة وتقييم رواية المحيطة بالجراحة المناعية

Surgical resection is an essential treatment for most cancer patients, but surgery induces dysfunction in the immune system and this has been linked to ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

طريقة الحصول على خلايا سرطان المبيض الابتدائية من العينات الصلبة

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United States. Tacrolimus is a narrow therapeutic index drug and as such requires therapeutic drug monitoring and dose adjustment based on its whole blood trough concentrations. To facilitate home therapeutic drug and adherence monitoring, the collection of dried blood spots is an attractive concept. After a finger stick, the patient collects a blood drop on filter paper at home. After the blood is dried, it is mailed to the analytical laboratory where tacrolimus is quantified using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) in combination with a simple manual protein precipitation step and online column extraction.
For tacrolimus analysis, a 6-mm disc is punched from the saturated center of the blood spot. The blood spot is homogenized using a bullet blender and then proteins are precipitated with methanol/0.2 M ZnSO4 containing the internal standard D2,13C-tacrolimus. After vortexing and centrifugation, 100 &#181;l of supernatant is injected into an online extraction column and washed with 5 ml/min of 0.1 formic acid/acetonitrile (7:3, v:v) for 1 min. Hereafter, the switching valve is activated and the analytes are back-flushed onto the analytical column (and separated using a 0.1% formic acid/acetonitrile gradient). Tacrolimus is quantified in the positive multi reaction mode (MRM) using a tandem mass spectrometer.
The assay is linear from 1 to 50 ng/ml. Inter-assay variability (3.6%-6.1%) and accuracy (91.7%-101.6%) as assessed over 20 days meet acceptance criteria. Average extraction recovery is 95.5%. There are no relevant carry-over, matrix interferences and matrix effects. Tacrolimus is stable in dried blood spots at RT and at +4 &#176;C for 1 week. Extracted samples in the autosampler are stable at +4 &#176;C for at least 72 hr.

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

الكمي للمناعة tacrolimus على وبقع الدم الجافة عن طريق LC-MS / MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

رواية فأري موديل الفشل شرياني الناسور: العملية الجراحية في التفاصيل

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these tumors are not easily grown in standard culture conditions. Neurosphere cultures under serum-free conditions and orthotopic xenografts have expanded the range of tumors that can be maintained. However, many types of brain tumors remain difficult to propagate or study. This is particularly true for pediatric brain tumors such as pilocytic astrocytomas and medulloblastomas. This protocol describes a system that allows primary human brain tumors to be grown in culture. This quantitative assay can be used to investigate the effect of microenvironment on tumor growth, and to test new drug therapies. This protocol describes a system where fluorescently labeled brain tumor cells are grown on an organotypic brain slice from a juvenile mouse. The response of tumor cells to drug treatments can be studied in this assay, by analyzing changes in the number of cells on the slice over time. In addition, this system can address the nature of the microenvironment that normally fosters growth of brain tumors. This brain tumor organotypic slice co-culture assay provides a propitious system for testing new drugs on human tumor cells within a brain microenvironment.

Many types of human brain tumors are localized to specific regions within the brain and are difficult to grow in culture. This protocol addresses the role of tumor microenvironment and investigates new drug treatments by analyzing fluorescent primary brain tumor cells growing in an organotypic mouse brain slice. &#160;

ورم في المخ / شريحة عضوي النمط المشارك ثقافة النظام لدراسة ورم المكروية والمستهدفة المخدرات العلاجات

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...

Intravital Microscopy of Tumor-associated Vasculature Using Advanced Dorsal Skinfold Window Chambers on Transgenic Fluorescent Mice

Tumor and tumor vessel development, as well as tumor response to therapeutics, are highly dynamic biological processes. Histology provides static information and is often not sufficient for a correct interpretation. Intravital evaluation, in which a process is followed in time, provides extra and often unexpected information. With the creation of transgenic animals expressing cell-specific markers and live cell tracers, improvements to imaging equipment, and the development of several imaging chambers, intravital microscopy has become an important tool to better understand biological processes. This paper describes an experimental design for the investigation of tumor vessel development and of therapeutic effects in a spatial and temporal manner. Using this setup, the stage of vessel development, tip cell and lumen formation, blood flow, extravasation, an established vascular bed, and vascular destruction can be visualized and followed. Furthermore, therapeutic effects, intratumoral fate, and the localization of chemotherapeutic compounds can also be followed.

This protocol describes the intravital imaging of transgenic mice expressing cell-specific fluorescent markers. Intravital imaging provides a non-invasive method for high-resolution observations in living animals using implantable windows through which the microscopic visualization of processes is possible. This method is especially useful to study longitudinal processes.