نود أن نشكر Astha Maltare لتوليد البيانات الزحف اليرقات. نود أن نشكر الدكتور نيكولاس Lanson الابن لإعطاء تعليقاته على المخطوطة. وأيد هذا العمل من قبل المركز باكارد روبرت لALS في جامعة جونز هوبكنز (لUBP) وتصلب جانبي ضموري جمعية (UBP)، وR01MH083689 من المعاهد الوطنية للصحة العقلية (كندي).

A. الفحص اليرقات الزحف 1. اليرقات مجموعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انشاء زجاجة اوقية (الاونصة) 8 من الذباب (10-15 ذكور + إناث 10-15). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسمحوا الذباب تضع بيضها لمدة 24 ساعة، ثم زجاجة واضح من الذباب. (نقل من البالغين في زجاجة جديدة، وكرر حسب الضرورة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان زجاجة لمدة 3-4 أيام، أو حتى 3 يرقات الطور مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 - في زجاجة مع يرقات 100 مل من السكروز بنسبة 20٪ والسماح للجلوس لمدة 20 دقيقة. واليرقات تطفو الى الاعلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع جمع اليرقات باستخدام ماصة 25 مل المصلية مع طرف باتجاه آخر، والمكان الى سلة شبكية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل اليرقات في سلة شبكة مرتين مع منزوع الأيونات O. 2 H اليرقات هي الآن جاهزة للتجارب. </li></ol> 2. لعلاج اليرقات مع المخدرات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام فرشاة لنقل العدد المرغوب فيه من اليرقات إلى دورق 5 مل تحتوي على السكروز حل 5٪ + المخدرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسمحوا تتغذى اليرقات على الأقل 15 دقيقة.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب المخدرات بمبيدات اليرقات في سلة شبكة والشطف. وهم الآن على استعداد لاستخدام. </li></ol> 3. (سافر قياس المسافة الإجمالية أو تقلصات جدار الجسم) الفحص الحركي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام فرشاة لنقل يرقة الفردية إلى: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 طبق بيتري سم تحتوي على الاغاروز 2٪ (صب سابقا وسمح لتتصلب) على ورقة الرسم البياني مع شبكة 0.2 2 سم. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد عدد من خطوط الشبكة عبرت في 1 دقيقة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كذلك من وعاء زجاجي يحتوي على تشريح عجينة الخميرة تمييع الحل. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد تقلصات التمعج (الأمامي الكامل لحركة الخلفي = 1 تقلص) في دقيقة واحدة مع مراعاة تشريح تحت المجهر. </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر حتى يتم احتساب الأرقام المرجوة من اليرقات. </li></ol> باء سريع متكررة انجذاب بالجاذبية السلبية (RING) البروتوكول وكان دي أصلا هذا الاختبارscribed بواسطة جارجانو وآخرون 5. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع ظهرت حديثا الذباب الذكور البالغين تحت تخدير خفيف CO 2 ومكان في المواد الغذائية التي تحتوي على قنينة معيار (أو الغذاء + المخدرات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الذباب في درجة حرارة الغرفة (على رأس مقاعد البدلاء. ~ 22 درجة مئوية) لمدة 2-3 أيام للسماح للانتعاش من CO 2 (وتراكم مستويات الدواء الحالة المستقرة إذا كان ذلك مناسبا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حوالي 25 الذباب دون التخدير إلى قارورة البوليسترين المعدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع قارورة مع الذباب في جهاز RING (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للذباب حتى يتأقلم مع البيئة، دون عائق، لمدة 15-20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال هذه الكاميرا الرقمية مكان وقت ~ 1 متر أمام جهاز (على منصة وإذا كان ذلك ضروريا لتحقيق المواءمة بين مركز العدسة في منتصف ارتفاع من قوارير)، تركيز وتكبير الكاميرا على الجهاز، وتحديد توقيت ل 3.0 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ بعناية عقد لجهاز خاتم مع يدك اليسرى، حتى لا حيURB الذباب، واجراء موقت مع يدك اليمنى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستفادة بشكل كبير من جهاز إلى أسفل على السطح من على مقاعد البدلاء ثلاث مرات، وضمان أن الحنفية ما يكفي من الصعب أن نهدم جميع الذباب على الجزء السفلي من قنينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بالتزامن مع الانتهاء من الصنبور الثالث، يبدأ العد التنازلي 3 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في ثلاث ثوان التقاط صورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة تعيين مؤقت لمدة 1 دقيقة وتبدأ. خلال هذا الوقت إعادة كاميرا، والتركيز على الجهاز، ووضع قناة أخرى من الموقت لمدة ثلاث ثوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 1 دقيقة، كرر الخطوات من 1،7-1،10 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ما مجموعه 5-6 المحاكمات، وتحميل الصور على جهاز كمبيوتر واستخدام المشاهد المفضلة لديك صورة لفتح، ويسجل ارتفاع متوسط ​​قفز عن كل قارورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل احصائى على مجموعات مختلفة الخاص مقارنة ارتفاع متوسط ​​ارتفع. </li></ol> جيم تودد والفحص التزاوج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أول شيء في الصباح، واضح تماما المنتجة للزجاجات FLIلاستخدامها وفاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على مدار اليوم (كل 3-4 ساعات)، وجمع ظهرت حديثا من الذكور والإناث ساذج عن طريق الاتصال الجنسي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الذكور على حدة في قوارير أو أنابيب مع المتوسط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5-6 تضع الإناث معا في قارورة / أنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الذباب التي تم جمعها في 25 درجة مئوية تحت ضوء الموارد البشرية 12 / مظلم لمدة 5 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل امرأة واحدة في غرفة من عجلة التزاوج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل واحد من الذكور في غرفة عجلة التزاوج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الزوج تحت المجهر لتشريح المشكلات التالية: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجه (وبتوجيه من الذكور نحو الإناث) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التنصت (من الذكور والإناث الصنابير) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجناح أغنية (من الذكور ويهتز يمتد جناح واحد) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لعق (ويلعق من الذكور والإناث الأعضاء التناسلية) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشباك (الذكر تجعيد الشعر البطن بموجب نفسه) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محاولة الجماع (الشباك النشاط أثناء محاولة تحميل والإناث) </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة لمدة 10 دقائق أو حتى الجماع ناجحة، مشيرا الى ان الوقت الذي كل السلوك (كمون)، وإجمالي الوقت تشارك في المغازلة حتى الجماع (لحساب مؤشر المغازلة)، فضلا عن عدد من أزواج التي تؤدي بنجاح سلوك معين ( تردد). وسوف 100٪ من أزواج نوع البرية تتزاوج عادة في غضون 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب أمضى مؤشر المغازلة (CI) من خلال تقسيم الوقت في التودد مقسوما على مجموع الوقت حتى الجماع. لأزواج النوع البري هذا يتراوح عادة بين 0،6-0،8. </li></ol> D. الممثل النتائج الزحف مقايسة وطبيعي يرقة نوع البرية يهيمون على وجوههم ~ 3 سم / دقيقة، ومعرض ~ 40-50 تقلصات جدار الجسم في دقيقة واحدة. وقد وضعنا مؤخرا نموذجا ذبابة الفاكهة من التصلب الفتح / TLS ذات الصلة الجانبي الذي يظهر اليرقات عيب الزحف، عمر مخفضة والكبار التسلق ضعف 6. نحن استهدفت التعبير سأداء و نوع البرية وأشكال متحولة من الفتح / TLS إلى الخلايا العصبية الحركية (OK-371-gal4 سائق) وفحص الزحف اليرقات. كما هو مبين أدناه، البرية يرقات نوع الزحف تصل إلى 12 سم، في حين أن التعبير عن الفتح نوع البرية انخفضت قدرة اليرقات الزحف إلى ما يقرب من 6 سم. الحيوانات معربا عن R521C تحور المرض تسبب في الفتح / TLS يبرهن على وجود ضعف شديد جدا في حركة الزحف على (الشكل 1)، والزحف نحو 1 سم فقط / دقيقة. سلبي فحص انجذاب بالجاذبية RING وينبغي أن الذباب الشباب البالغين من النوع البري لديها ارتفاع متوسط ​​التسلق من 4-5 سم ~ في فترة زمنية 3-2 (يمكن تعديلها في وقت من 3 ثوان لاستيعاب سلالات مختلفة أو مستويات النشاط لتحديد ارتفاع متوسط ​​نظرا لمعطى توتر / العلاج). يتم تعيين الذباب التي لا تزال في اسفل قيمة 0. لا ينصح باستخدام أكثر من 25 الذباب في قارورة لأنه عندئذ يصبح من الصعب تحديد موقع كل فرد ذبابة لقياس الارتفاع. N<html> وقد لوحظ س الحساسية في ما يصل الى 6 محاكمات متتالية متباعدة 1 دقيقة باستثناء أننا قد استخدمت. فمن الأهمية بمكان ليس لإعادة استخدام قوارير اختبار البوليسترين في هذا الاختبار بعد غروب الأولي للبيانات يتم جمعها بسبب الذباب الجديدة التي وضعت في قارورة استخدمت لن يصعد الى حد ذاته كما هو الحال في قوارير جديدة. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig1.jpg" /> الشكل 1. الإعداد لفحص RING. يتم وضع كاميرا رقمية ~ 1 متر في الجبهة من الأجهزة التي تحتوي على الذباب في قوارير البولي ستايرين، والتركيز، والتكبير الكاميرا على الجهاز، وتحديد توقيت إلى 3.0 ثانية. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3795/3795fig2.jpg" /> بيانات الممثل الشكل 2. من فحص الزحف يرقات الذباب باستخدام تعبير ectopically UAS-WT الفتح، وUAS-FUS R521C تحت سيطرة سائق الخلايا العصبية الحركية (OK371-gal4). الطبقة = &quot;jove_content&quot;&gt;

<ol>
	<li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Feany, M. B., Bender, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">A Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Nature Mar. 23 (6776), 394-398 (2000).</li><li>Auluck, P. K., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+prevention+of+Parkinson+disease+in+Drosophila.">Pharmacological prevention of Parkinson disease in Drosophila.</a> Nat. Med. 8 (11), 1185-1186 (2000).</li><li>Whitworth, A. J., Theodore, D. A., Greene, J. C., Benes, H., Wes, P. D., Pallanck, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glutathione+Stransferase+activity+rescues+dopaminergic+neuron+loss+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson's+disease.">Increased glutathione Stransferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (22), 8024-8029 (2005).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li><li>Lanson, N. A., Maltare, A., King, H., Smith, R., Kim, J. H., Taylor, J. P., Lloyd, T. E., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+FUS-related+neurodegeneration+reveals+genetic+interaction+between+FUS+and+TDP-43.">A Drosophila model of FUS-related neurodegeneration reveals genetic interaction between FUS and TDP-43.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (13), 2510-2523 (2011).</li><li>Batlevi, Y., Martin, D. N., Pandey, U. B., Simon, C. R., Powers, C. M., Taylor, J. P., Baehrecke, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynein+light+chain+1+is+required+for+autophagy,+protein+clearance,+and+cell+death+in+Drosophila.">Dynein light chain 1 is required for autophagy, protein clearance, and cell death in Drosophila.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (2), 742-747 (2010).</li><li>Sang, T. K., Chang, H. Y., Lawless, G. M., Ratnaparkhi, A., Mee, L., Ackerson, L. C., Maidment, N. T., Krantz, D. E., Jackson, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+mutant+human+parkin-induced+toxicity+demonstrates+selective+loss+of+dopaminergic+neurons+and+dependence+on+cellular+dopamine.">A Drosophila model of mutant human parkin-induced toxicity demonstrates selective loss of dopaminergic neurons and dependence on cellular dopamine.</a> J. Neurosci. 27 (5), 981-992 (2007).</li><li>Stacey, S. M., Muraro, N. I., Peco, E., Labb&#233;, A., Thomas, G. B., Baines, R. A., van Meyel, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+glial+glutamate+transporter+Eaat1+is+regulated+by+fringe-mediated+notch+signaling+and+is+essential+for+larval+locomotion.">Drosophila glial glutamate transporter Eaat1 is regulated by fringe-mediated notch signaling and is essential for larval locomotion.</a> J. Neurosci. 30 (43), 14446-14457 (2010).</li><li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila.">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li><li>Repnikova, E., Koles, K., Nakamura, M., Pitts, J., Li, H., Ambavane, A., Zoran, M. J., Panin, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sialyltransferase+regulates+nervous+system+function+in+Drosophila.">Sialyltransferase regulates nervous system function in Drosophila.</a> J. Neurosci. 30 (18), 6466-6476 (2010).</li><li>Nedelsky, N. B., Pennuto, M., Smith, R. B., Palazzolo, I., Moore, J., Nie, Z., Neale, G., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+functions+of+the+androgen+receptor+are+essential+to+pathogenesis+in+a+Drosophila+model+of+spinobulbar+muscular+atrophy.">Native functions of the androgen receptor are essential to pathogenesis in a Drosophila model of spinobulbar muscular atrophy.</a> Neuron. 67 (6), 936-952 (2010).</li><li>Lorenzo, D. N., Li, M. G., Mische, S. E., Armbrust, K. R., Ranum, L. P., Hays, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrin+mutations+that+cause+spinocerebellar+ataxia+type+5+impair+axonal+transport+and+induce+neurodegeneration+in+Drosophila.">Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 189 (1), 143-158 (2010).</li><li>Wang, J. W., Brent, J. R., Tomlinson, A., Shneider, N. A., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ALS-associated+proteins+FUS+and+TDP-43+function+together+to+affect+Drosophila+locomotion+and+life+span.">The ALS-associated proteins FUS and TDP-43 function together to affect Drosophila locomotion and life span.</a> J. Clin. Invest. , (2011).</li><li>Choi, J. K., Jeon, Y. C., Lee, D. W., Oh, J. M., Lee, H. P., Jeong, B. H., Carp, R. I., Koh, Y. H., Kim, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+GSS+syndrome+suggests+defects+in+active+zones+are+responsible+for+pathogenesis+of+GSS+syndrome.">A Drosophila model of GSS syndrome suggests defects in active zones are responsible for pathogenesis of GSS syndrome.</a> Hum. Mol. Genet. 19 (22), 4474-4489 (2010).</li><li>Ruan, H., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+interaction-mediated+lifespan+extension+of+Drosophila+Cu/Zn+superoxide+dismutase+mutants.">Social interaction-mediated lifespan extension of Drosophila Cu/Zn superoxide dismutase mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (21), (2008).</li><li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster.">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (24), (2009).</li><li>Becnel, J., Johnson, O., Luo, J., N&#228;ssel, D. R., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+serotonin+5-HT7+Dro+receptor+is+expressed+in+the+brain+of+Drosophila,+and+is+essential+for+normal+courtship+and+mating.">The serotonin 5-HT7 Dro receptor is expressed in the brain of Drosophila, and is essential for normal courtship and mating.</a> PLoS One. 6 (6), e20800 (2011).</li><li>Johnson, O., Becnel, J., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+5-HT(2)+and+5-HT(1A)-like+receptors+differentially+modulate+aggressive+behaviors+in+Drosophila+melanoga-+ster.">Serotonin 5-HT(2) and 5-HT(1A)-like receptors differentially modulate aggressive behaviors in Drosophila melanoga- ster.</a> Neuroscience. 158 (2), 1292-1300 (2009).</li><li>Bastock, M., Manning, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Courtship+of+Drosophila+Melanogaster.">The Courtship of Drosophila Melanogaster.</a> Behaviour. , 85-111 (1955).</li><li>Greenspan, R. J., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Courtship+in+Drosophila.">Courtship in Drosophila.</a> Annu. Rev. Genet. 34, 205-232 (2000).</li><li>Villella, A., Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenetics+of+courtship+and+mating+in+Drosophila.">Neurogenetics of courtship and mating in Drosophila.</a> Adv. Genet. 62, 67-184 (2008).</li></ol>

ليس لدينا ما يكشف.

وينظم بإحكام ذبابة الفاكهة السلوك بعوامل وراثية وبيئية. لقد كنا، وغيرها، وسبق للفحوصات وصفها هنا لجمع البيانات لدراسة الجينات المرتبطة بالطيران السلوكيات وأمراض الاعصاب على غرار الإنسان في ذبابة الفاكهة 5-19. لفحص الزحف، واختيار دقيق من 3 يرقات العمر ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> سكر القصب </td><td> فيشر العلمية </td><td> S5-500 </td></tr><tr><td> الاغاروز </td><td> إينفيتروجن </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> 6 زجاجة أوقية ذبابة الفاكهة </td><td> جينيسي العلمية </td><td> 32-130 </td></tr><tr><td> فرشاة الدهان (# 1) </td><td> تيد بيلا، شركة </td><td> 11859 </td></tr><tr><td> يطير المكونات الغذائية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> دقيق الذرة </td><td> فيشر العلمية </td><td> NC9109741 </td></tr><tr><td> أجار </td><td> جينيسي العلمية </td><td> 66-104 </td></tr><tr><td> دبس السكر </td><td> فيشر العلمية </td><td> NC9349176 </td></tr><tr><td> حامض البروبيونيك </td><td> Acros </td><td> 14930-0010 </td></tr><tr><td> Tegosept </td><td> قمة </td><td> 20-258 </td></tr><tr><td> الإيثانول </td><td> الصيادعلمي </td><td> BP2818-4 </td></tr><tr><td> خميرة </td><td> جينيسي العلمية </td><td> 62-107 </td></tr></tbody></table>

methods to assay drosophila behavior

وقد استخدمت ذبابة الفاكهة السوداء البطن، ذبابة الفاكهة، لدراسة الآليات الجزيئية لمجموعة واسعة من الأمراض التي تصيب الإنسان مثل السرطان وأمراض القلب والأوعية الدموية والأمراض العصبية المختلفة 1. وقد الأمثل نحن المقايسات سلوكية بسيطة وقوية لتحديد تنقل اليرقات، البالغ قدرة تسلق (فحص RING)، والسلوكيات التودد من ذبابة الفاكهة. هذه المقايسات سلوكية قابلة للتطبيق على نطاق واسع لدراسة دور العوامل الوراثية والبيئية على سلوك الذباب. ويمكن استخدام اليرقات القدرة الزحف موثوق بها لتحديد التغيرات في مرحلة مبكرة قدرات الزحف من يرقات ذبابة الفاكهة، وأيضا لدراسة تأثير الأدوية أو الجينات الأمراض التي تصيب البشر (في الذباب المعدلة وراثيا) في تحرك لهم. الفحص الزحف اليرقات ويصبح أكثر قابلية للتطبيق في حالة التعبير أو إلغاء الجين يسبب الفتك في مراحل العذراء أو الكبار، حيث أن هذه الذباب لا البقاء على قيد الحياة إلى سن البلوغ حيث أنها على خلاف ذلك يمكن تقييم. هذا الأساسية 1ويمكن أيضا ssay استخدامها جنبا إلى جنب مع الضوء الساطع أو الضغط لدراسة الاستجابات السلوكية إضافية في يرقات ذبابة الفاكهة. وقد المغازلة على نطاق واسع للتحقيق في الأساس الجيني للسلوك الجنسي، ويمكن أن تستخدم أيضا لدراسة نشاط والتنسيق، فضلا عن التعلم والذاكرة. ذبابة الفاكهة المغازلة ينطوي على تبادل للتنمية مداركه الحسية المختلفة بما في ذلك البصرية والسمعية، وإشارات حسي كيميائي بين الذكور والإناث التي تؤدي إلى سلسلة معقدة من التصرفات الحركية تتميز بشكل جيد وبلغت ذروتها في جماع ناجح. المقايسات الكبار التقليدية التسلق (انجذاب بالجاذبية السلبية) هي شاقة، تتطلب عمالة مكثفة، وتستغرق وقتا طويلا، مع تفاوت كبير بين التجارب المختلفة 2-4. السريع تكرارية انجذاب بالجاذبية السلبية (RING) فحص 5 مزايا كثيرة اكثر من البروتوكولات المستخدمة على نطاق واسع أكثر، وتوفير نهج الإنتاجية استنساخه، الحساسة، وارتفاع لتحديد الحركي الكبار والسلبية ب انجذاب بالجاذبيةehaviors. في مقايسة RING، ويمكن اختبار المورثات أو عدة أدوية في وقت واحد باستخدام عدد كبير من الحيوانات، مع اقتراب عالية الإنتاجية مما يجعلها أكثر قابلية للتجارب الفرز.

Watch this Scientific Journal Video about Methods to Assay Drosophila Behavior at JoVE.com

Methods to Assay Drosophila Behavior

ذبابة الفاكهة السوداء البطن هو وراثيا وسلوكيا نظام نموذج قابل للطرق التي استخدمت لفهم الأساس الجزيئي والخلوي من العديد من العمليات البيولوجية الهامة لأكثر من قرن 1. ذبابة الفاكهة قد تم استغلالها بشكل جيد للحصول على نظرة ثاقبة الأساس الجيني للسلوك الذباب.

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

42.5K Views.  Louisiana State University Health Sciences Center. ذبابة الفاكهة السوداء البطن هو وراثيا وسلوكيا نظام نموذج قابل للطرق التي استخدمت لفهم الأساس الجزيئي والخلوي من العديد من العمليات البيولوجية الهامة لأكثر من قرن 1. ذبابة الفاكهة قد تم استغلالها بشكل جيد للحصول على نظرة ثاقبة الأساس الجيني للسل?...

Video: Methods to Assay Drosophila Behavior

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

A growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive manipulation of the neural activity of specific neurons in Drosophila melanogaster1. Chief among these are optogenetic tools, which enable the activation or silencing of specific neurons in the intact and freely moving animal using bright light. Channelrhodopsin (ChR2) is a light-activated cation channel that, when activated by blue light, causes depolarization of neurons that express it. ChR2 has been effective for identifying neurons critical for specific behaviors, such as CO2 avoidance, proboscis extension and giant-fiber mediated startle response2-4. However, as the intense light sources used to stimulate ChR2 also stimulate photoreceptors, these optogenetic techniques have not previously been used in the visual system. Here, we combine an optogenetic approach with a mutation that impairs phototransduction to demonstrate that activation of a cluster of loom-sensitive neurons in the fly's optic lobe, Foma-1 neurons, can drive an escape behavior used to avoid collision. We used a null allele of a critical component of the phototransduction cascade, phospholipase C-&beta;, encoded by the norpA gene, to render the flies blind and also use the Gal4-UAS transcriptional activator system to drive expression of ChR2 in the Foma-1 neurons. Individual flies are placed on a small platform surrounded by blue LEDs. When the LEDs are illuminated, the flies quickly take-off into flight, in a manner similar to visually driven loom-escape behavior. We believe that this technique can be easily adapted to examine other behaviors in freely moving flies.

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Genetically encoded optogenetic tools enable noninvasive manipulation of specific neurons in the Drosophila brain. Such tools can identify neurons whose activation is sufficient to elicit or suppress particular behaviors. Here we present a method for activating Channelrhodopsin2 that is expressed in targeted neurons in freely walking flies.

Optogenetic تحفيز السلوك في الهروب<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat open surfaces is complex,&#160;including: pausing, turning, and meandering. This complexity in the repertoire of movement hinders detailed analysis of the events occurring during a single crawl stride cycle. To overcome this obstacle, linear agarose channels were made that constrain larval behavior to straight, sustained, rhythmic crawling. In principle, because agarose channels and the Drosophila larval body are both optically clear, the movement of larval structures labeled by genetically-encoded fluorescent probes can be monitored in intact, freely-moving larvae. In the past, larvae were placed in linear channels and crawling at the level of whole organism, segment, and muscle were analyzed1. In the future, larvae crawling in channels can be used for calcium imaging to monitor neuronal activity. Moreover, these methods can be used with larvae of any genotype and with any researcher-designed channel. Thus the protocol presented below is widely applicable for studies using the Drosophila larva as a model to understand motor control.

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

The Drosophila larva is a powerful model system to study neural control of behavior. This publication describes the use of linear agarose channels to elicit sustained bouts of linear crawling and methods to quantify the dynamics of larval structures during repetitive crawling behavior.

عن طريق القنوات الخطي الاغاروز لدراسة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات الزحف السلوك

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

طريقة بسيطة لقياس التغيرات في السلوك المكافأة التماس طريق<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

الكمي للسلوك الاستمالة ذبابة الفاكهة

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other neurological diseases at an increasing speed. However, little is known about the molecular mechanisms that underlie these disorders. The genetic, molecular, and behavioral toolbox of Drosophila melanogaster makes this model organism particularly useful to characterize new disease genes and mechanisms in a high-throughput manner. Nevertheless, high-throughput screens require efficient and reliable assays that, ideally, are cost-effective and allow for the automatized quantification of traits relevant to these disorders. The island assay is a cost-effective and easily set-up method to evaluate Drosophila locomotor behavior. In this assay, flies are thrown onto a platform from a fixed height. This induces an innate motor response that enables the flies to escape from the platform within seconds. At present, quantitative analyses of filmed island assays are done manually, which is a laborious undertaking, particularly when performing large screens.
This manuscript describes the &#34;Drosophila Island Assay&#34; and &#34;Island Assay Analysis&#34; algorithms for&#160;high-throughput, automated data processing and quantification of island assay data. In the setup, a simple webcam connected to a laptop collects an image series of the platform while the assay is performed. The &#34;Drosophila Island Assay&#34; algorithm developed for the open-source software Fiji processes these image series and quantifies, for each experimental condition, the number of flies on the platform over time. The &#34;Island Assay Analysis&#34; script, compatible with the free software R, was developed to automatically process the obtained data and to calculate whether treatments/genotypes are statistically different. This greatly improves the efficiency of the island assay and makes it a powerful readout for basic locomotion and flight behavior. It can thus be applied to large screens investigating fly locomotor ability, Drosophila models of movement disorders, and drug efficacy.

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

The island assay is a relatively new, cost-effective assay that can be used to evaluate the basic locomotor behavior of Drosophila melanogaster. This manuscript describes algorithms for automatic data processing and objective quantification of island assay data, making this assay a sensitive, high-throughput readout for large genetic or pharmacological screens.

تحليل الفائق للسلوك الحركي في مقايسة الجزيرة المورفولوجية

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

تتبع السلوك المورفولوجية اليرقات في الاستجابة للتحفيز أوبتوجينيتيك الخلايا العصبية حاسة الشم

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

Decades of research in many model organisms have led to the current concept of synaptic plasticity underlying learning and memory formation. Learning-induced changes in synaptic transmission are often distributed across many neurons and levels of processing in the brain. Therefore, methods to visualize learning-dependent synaptic plasticity across neurons are needed. The fruit fly Drosophila melanogaster represents a particularly favorable model organism to study neuronal circuits underlying learning. The protocol presented here demonstrates a way in which the processes underlying the formation of associative olfactory memories, i.e., synaptic activity and their changes, can be monitored in vivo. Using the broad array of genetic tools available in Drosophila, it is possible to specifically express genetically encoded calcium indicators in determined cell populations and even single cells. By fixing a fly in place, and opening the head capsule, it is possible to visualize calcium dynamics in these cells whilst delivering olfactory stimuli. Additionally, we demonstrate a set-up in which the fly can be subjected, simultaneously, to electric shocks to the body. This provides a system in which flies can undergo classical olfactory conditioning - whereby a previously na&#239;ve odor is learned to be associated with electric shock punishment - at the same time as the representation of this odor (and other untrained odors) is observed in the brain via two-photon microscopy. Our lab has previously reported the generation of synaptically localized calcium sensors, which enables one to confine the fluorescent calcium signals to pre- or postsynaptic compartments. Two-photon microscopy provides a way to spatially resolve fine structures. We exemplify this by focusing on neurons integrating information from the mushroom body, a higher-order center of the insect brain. Overall, this protocol provides a method to examine the synaptic connections between neurons whose activity is modulated as a result of olfactory learning.

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

Here we present a protocol with which pre- and/or postsynaptic calcium can be visualized in the context of Drosophila learning and memory. In vivo calcium imaging using synaptically localized calcium sensors is combined with a classical olfactory conditioning paradigm such that the synaptic plasticity underlying this type of associative learning may be determined.

في فيفو البصرية الكالسيوم التصوير من اللدونة متشابك الناجمة عن التعلم في دروفوميلا ميلغاستر

Decades of research in many model organisms have led to the current concept of synaptic plasticity underlying learning and memory formation. ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

فحص ميكانيكي لتجنب الصراع لقياس سلوك الألم في الفئران

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...