تعتمد الطريقة على برنامج مفتوح المصدر لتقييم الأنشطة الحركية المحلية بشكل منهجي لسلوك التتبع للبالغين وذباب اليرقات من الفيديو المسجل. تتطلب هذه الطريقة تكامل الجهاز منخفض التكلفة لتسجيل السلوك وتحليله ، مما يجعله نهجا فعالا وبأسعار معقولة لفحص حركة الذباب. يتم استخدام هذه التقنية لتحديد التعديل السلوكي في نموذج ذبابة لمرض بشري مع ضعف الحركة المحلية ، ولكنها ليست مناسبة لعلاج المرض أو الإعاقات أو الصعوبات.
من الضروري مسح نافذة الفيديو ذات الصلة أثناء عملية التحليل ، وهي نافذة الفيديو الأصلية ونافذة المعالجة. للبدء ، قم بخلط الكاشف A والكاشف B من مجموعة السيليكا بنسبة واحد إلى 10 ، وفقا لتعليمات الشركة الصانعة ، لإعداد ساحة المجال المفتوح لتتبع حركة ذبابة الفاكهة. بعد ذلك ، اضبط الكاميرا عالية الدقة على حامل ثلاثي القوائم ، واضبطها بحيث تكون عدسة الكاميرا عمودية على سطح ساحة السيليكا.
ثم افتح الفيديو مع فيجي. اسحب شريط التقدم إلى الإطار الأولي ووافق ضمنيا. اختر الجسم الكامل للذبابة باستخدام أداة الاختيار اليدوية.
انقر فوق الصورة والضبط والسطوع والتباين لضبط توازن اللون الأبيض حتى تقترب القيمة الرمادية للمنطقة المحددة من الخلفية العريضة. نقل ذبابة مخدر إلى الساحة الميدان المفتوح. بمجرد أن تتعافى الذبابة من التخدير ، ضع طبق الساحة مع الذبابة تحت الكاميرا ورجها بسرعة من جانب إلى آخر للتأكد من أن الذبابة تتحرك عند بدء التسجيل.
اضغط على زر التسجيل في تطبيق الكاميرا لبدء تسجيل الفيديو. عند الانتهاء من التسجيل ، اضغط على زر الإيقاف لإنهاء تسجيل الفيديو. قم بتحويل مقاطع الفيديو المسجلة إلى تنسيق AVI باستخدام ترميز M-J الوثني بحيث يمكن فتحها وتحليلها باستخدام فيجي.
اضبط أيضا الإطارات في الثانية من الفيديو على 15 إطارا في الثانية للذباب البالغ و 12 إطارا في الثانية لليرقات. لفتح الفيديو مع فيجي ، حدد الخيارين ، استخدم المكدس الافتراضي وقم بالتحويل إلى مقياس رمادي ، في النافذة المنبثقة. احصل على نافذة معالجة باستخدام أداة تعيين الصورة النشطة للمكون الإضافي لتعقب الحيوانات ، وقم بإنشاء منطقة تتبع تدور حول الساحة في نافذة الفيديو الأصلية ، باستخدام الأداة البيضاوية.
قم بتعيين عوامل التصفية ومعلمات المرشحين لأول إطار فارغ في نافذة المعالجة. ثم حدد الإطار التالي في نافذة الفيديو الأصلية ، واختر السطح المصفى لنافذة المعالجة. بمجرد تحديد نافذة معالجة تمت تصفيتها ، استخدم أداة العتبة المحددة لتحويل ذبابة المسالك بملف تعريف أحمر ، مغطى في نافذة المعالجة.
ثم استخدم كاشف النقطة المحدد للسماح للكمبيوتر بالتعرف على الذبابة بملف تعريف أحمر ، مغطى في نافذة المعالجة. اضبط الإطار الأخير للذبابة أو اليرقات البالغة ، كما هو موضح في مخطوطة النص. استخدم أداة إظهار الكائنات الثنائية كبيرة الحجم لتقديم مستطيل تتبع في نافذة الفيديو الأصلية.
ابدأ التتبع وقم بتصدير ملف التتبع بعد اكتمال المراقبة. قم بتحميل ملفات المسار والمنطقة باستخدام المكون الإضافي لتعقب الحيوانات ومحلل التتبع. حدد الفهرس المطلوب باستخدام إعدادات المنطقة ، وقم بتغيير إعدادات المعلمة.
احسب وقت الفاصل الزمني للإطار باستخدام معدل الإطارات. إنتاج مخططات التحليل الكمي باستخدام برنامج جداول البيانات ومنشور لوحة الرسم البياني ، بعد تحليلها في محلل التتبع. افتح ملف المسار.
انسخ جميع الإحداثيات إلى Microsoft Office Excel وقم بتقسيم الخلايا باستخدام مفتاح المسافة. لحساب وقت الجمود لكل فاصل إطار، حدد جميع النتائج المحسوبة وأدرج مخططا عموديا لعرض وقت الجمود بشكل مرئي بهامش المخطط العمودي بأكمله. لتوضيح التغييرات في زاوية الاتجاه ، حدد جميع النتائج المحسوبة وأدخل مخططا مبعثرا.
كان لدى الذباب البالغ ويرقات Instar الثالثة ، المعالجة بالروتينون ، عجز حركي كبير مقارنة بذباب التحكم ، الذي يتغذى على مذيب DMSO. أظهر التحليل الكمي لعلاج Rotenone في الذباب البالغ انخفاضا كبيرا في المسافة المقطوعة والسرعة المتوسطة. وزيادة كبيرة في وقت الجمود.
أظهرت الرسوم البيانية التمثيلية قمم أقل لسرعة الحركة لكل فاصل إطار في الذباب الذي تم تغذيته بالروتينون مقارنة بتلك الموجودة في المجموعة الضابطة ، مما يشير إلى شدة عجز النشاط الحركي. كما أظهر عمود الجمود المؤسسي للبكسل المتحرك لكل إطار حركة أقل بكثير في غضون دقيقة واحدة للذباب الذي يتغذى على Rotenone ، مقارنة بذباب التحكم. كما كشفت الرسوم البيانية التمثيلية التي توضح تغيرات الزاوية المتحركة لاتجاه الروتينون ، والحيوانات الضابطة ، عن تغيرات في الاتجاه الذي اختاره الذباب.
وقد لوحظت نتائج مماثلة ليرقات Instar الثالثة. كشفت النتائج أن الحركة السلوكية لتتبع اليرقات التي تغذت على روتينون كانت ضعيفة بشكل كبير مقارنة بالسيطرة. الخطوة الأكثر أهمية في عملية التحليل هي تشكيل أول إطار فارغ ، لأنه دليل على ما إذا كان البرنامج يمكنه التحقق بشكل فعال.
يمكن أن تسمح هذه التقنية للباحثين بالتعمق في الآلية الأساسية للعيوب المتعددة ، مثل إصابة الأعصاب أو العضلات.
