وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل جامعة ينكوبينج ومجلس مقاطعة Östergötland.

1. استئصال المبيض عبر الطريق الظهرية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الحيوانات، على سبيل المثال باستخدام 1.5٪ isoflurane (4٪ لتحريض) في أكسيد الأوكسجين / النيتروز بنسبة 30٪ / 70٪ خليط. وضع الحيوان في موقف المعرضة على طبق من التدفئة وصله بجهاز مقياس الحرارة المستقيمي. من المهم أن يكون طبقة رقيقة من العزلة بين الحيوان وصحن، وإلى أن مقياس الحرارة التغذية المرتدة نظام يحافظ على درجة حرارة الجسم في غضون 37 ± 0.5 درجة مئوية. تطبيق الهلام لحماية العين وإدارة 5 ملغ Rimadyl / كغ وزن الجسم تضعف في المياه المالحة تحت الجلد على الجانب الوحشي للرقبة الحيوان لتخفيف آلام ما بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلاقة 4 * 4 سم (3 * 3 سم للفئران) منطقة cephally من عرف الحرقفة. اغسل منطقة حليق مع لJodopax سبيل المثال قبل تغطية الحيوان مع 4 * 4 سم ورقة جراحة فتحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق 2-3 سم خط الوسط وتشريح بصراحة الجلد من اللفافة الأساسية. واحد سم الجانبي من خط الوسط، وجعل آخر thro شقهتاف اشمئزاز فآسيا. تشريح بصراحة أفقيا تحت هذه اللفافة كما ظاهريا ممكن حتى الوصول الى تجويف البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط، والاستيلاء على الأنسجة الدهنية التي تحيط مبيض في تجويف البطن واسحبه برفق خارج. التعرف على المبيض والرحم ligate قرون والأوعية 0،5-1 سم قريب من هذا الهيكل. قطع المبيض وligated الأنسجة الدهنية، ووضع الظهر الأنسجة المتبقية داخل تجويف البطن. جعل شق آخر في المقابل لفافة وكرر الإجراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجروح، وذلك باستخدام ويفضل أن يكون خياطة حيدة، والسماح للحيوان يستيقظ من التخدير. وضع حيوان في قفص ساخن (25-27 درجة مئوية) خلال ما لا يقل عن 2 ساعة بعد الجراحة. وينبغي أن يكون مقر هذه الحيوانات على حدة في الأيام الأولى بعد العمل الجراحي. فمن المحوري الذي كثيرا ما يتم تنظيف القفص / استبداله خلال مرحلة الانتعاش. أربع وعشرين ساعة بعد الجراحة، وحقن الحيوانات تحت الجلد مع آخر وزن الجسم 5 Rimadyl / كغ ملغ في تخفيفهالمالحة. </li></ol> 2. تحت الجلد الإدارة من استراديول، 17β من خلال كبسولات Silastic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج دقيق المبلغ المطلوب من استراديول، 17β في زيت السمسم. لتركيزات الفسيولوجية في الجرذان والفئران، ونحن نوصي 180 ميكروغرام / مل و 18-36 ميكروغرام / مل على التوالي. تمتلئ كبسولات الدواء الوهمي مع زيت السمسم النقي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع 3 سم (2 سم للفئران) أطوال من الأنابيب silastic و 5 مم (3 مم بالنسبة للفئران) أطوال العصي قضيب خشبي ليسد. باستخدام ملقط، ضغط 1 المكونات الخشبية في كبسولة silastic قبل حقن محلول زيت 17β-estradiol/sesame لملء طول. تتويج بلطف الكبسولة silastic في النهاية مفتوحة مع آخر المكونات الخشبية (من المفترض شمعات على البقاء بصورة دائمة في كبسولة). احتضان الكبسولات في حل 17β-استراديول المتبقية بين عشية وضحاها قبل الزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا يمكن أن يؤديها زرع كبسولة خلال التخدير المستخدمة في استئصال المبيض في الفئران. عن ميم، ومع ذلك، ينصح بشدة فترة نقاهة لمدة 14 يوما بعد استئصال المبيض لتقليل مخاطر من الكبسولة جاحظ من خلال الجلد هشا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد استعدادات الجراحية كما هو الحال في 1.1، أو بعد إغلاق شق استئصال المبيض، حلاقة وغسل (أ) 2 * منطقة سم 2 على الجانب الظهري من عنق الحيوان. جعل شق 1 سم وتشريح بصراحة جيب تحت الجلد caudolaterally، مع مساحة وافرة للكبسولة. مسح كبسولة silastic (أن حتى هذه النقطة في الوقت وقد حضنت في حل 17β-استراديول) وتثبيت بلطف من خلال الشق الذي يغلق في وقت لاحق من قبل خياطة. فمن المحوري للتأكد من أن السلالات كبسولة الجلد أقل قدر ممكن، لا سيما في منطقة قريبة من الجرح. من إنتاج كبسولات لزرع، فمن المهم أن يتم تجنب التلوث. </li></ol> 3. بطريق الفم؛ بالفم الإدارة من استراديول، 17β عبر نوتيلا البندق كريم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل شامل 17β-استراديول في زيت السمسم، ثم مزج زيت السمسم مع نوتيلا. من المستحسن أن كل جزء يحتوي على 28 ميكروغرام يوميا 17β-استراديول (5)، وزيت السمسم ميكرولتر 1 غرام نوتيلا لكل كيلوغرام من وزن الجسم بالنسبة للفئران و 1.12 ميكروغرام 17β-استراديول، 0،312 زيت السمسم و 60 ميكرولتر نوتيلا ملغ لكل فأر 30-G. يتم إعداد وهمي الجوز كريم مماثل باستثناء دون استراديول-17β. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدريب الحيوانات على أكل هرمون خالية من الجوز كريم لمدة خمسة أيام قبل التجربة. الايام الثلاثة الاولى من التدريب ينبغي، على النحو الأمثل الفئران سيتم تدريب في مجموعات (حوالي 0.5 غرام نوتيلا على الحيوانات 2-5)، في أقفاص وطنهم. في اليومين الرابع والخامس من التدريب، ويتم وضع الحيوانات في أقفاص منفصلة قبل ان يحصل على جزء يوميا ليشابه حالة تجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أثناء التجربة، يتم وضع الحيوانات في أقفاص منفصلة في كل مناسبة للتغذية، وبعد ذلك يتم تقديم جزء نوتيلا على بلاط السيراميك الصغيرة. إذا كان قد تم تنفيذ التدريب على النحو الوارد أعلاه، ستجربة اور هي أن أكثر من 95٪ من الفئران والجرذان قبول الجوز كريم، ومرة ​​واحدة اعتادوا تماما، معظم هذه الحيوانات أنها تستهلك في غضون ثوان. </li></ol> 4. ممثل النتائج المصل الفيزيولوجي 17β-استراديول تركيزات، والتي الأساليب الحالية تهدف إلى إعادة إنتاج، ما يقرب من 5-140 جزء من الغرام / مليلتر بالنسبة للفئران و5-35 جزء من الغرام / مليلتر بالنسبة للفئران 4،6. كبسولات تحت الجلد silastic وفقا للتعليمات المذكورة أعلاه، عندما تدار إلى 300 غ من الفئران، سبراغ داولي الإناث، وانخفاض إنتاج ببطء 17β-استراديول تركيزات مصل من حوالي 40 جزء من الغرام / مل اليوم يوم بيكوغرام / مل 2-10 35. ومع ذلك، مباشرة بعد إدارة، يمكن توقع ذروة تركيز مصل الدم حول خريج 1000 / مل، وانخفض إلى مجموعة الفسيولوجية فى غضون 8 ساعات (الشكل 1A) 4،5. الكبسولات silastic عن الفئران الموصوفة أعلاه مع 17β-estradiol/mL ميكروغرام 36، عندما تدار إلى 25 C57BL الإناث ز / الفئران 6، تجعل اضرب المصلentrations أن ينخفض ​​ببطء من ما يقرب من 90 جزء من الغرام / مل يوم 2-25 جزء من الغرام / مل يوم 35. ويسبق هذا على الأرجح من قبل قمة مماثلة كما تم العثور عليه في الفئران، على الرغم من هذا لم يتم التحقيق فيها (الشكل 1B) 6. ووصف طريقة نوتيلا بطريق الفم؛ بالفم مع جرعات أعلى، عندما تدار إلى 300 الفئران ز سبراغ-داولي الإناث، ويجعل المستويات الفسيولوجية للاستراديول-17β مع التقلبات اليومية بين 10-70 جزء من الغرام / مل (الشكل 2A) 4. بالنسبة للفئران باستخدام جرعة أعلاه، على المستويات اليومية تتراوح ما بين حوالي 20 و 120 جزء من الغرام / مل 6 (الشكل 2B). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/4013/4013fig1.jpg" /> <st<html> . رونغ&gt; الشكل 1 الرسوم البيانية مجدد تقديم 17β-استراديول التركيزات في الفئران (A؛ ن = 10 نقاط في الوقت تصل إلى 24 ساعة، ن = 15 نقطة في وقت لاحق من الوقت) 4،5 والفئران (ب، ن = 10) 6 بعد زرع كبسولة. الكبسولات silastic إنتاج ذروة قصيرة الأولي من تركيزات مصل تصل إلى 1000 جزء من الغرام / مل، ولكن الانخفاض في غضون ساعات إلى مستويات أقل من 100 جزء من الغرام / مل. خلال الأسابيع القادمة 4-5، وكبسولات تسفر عن مستقر، على الرغم من الانخفاض المتواصل، تركيزات مصل. المناطق المظللة تتوافق مع تركيزات 17β-استراديول المصل الفيزيولوجي في إناث الفئران سليمة والفئران على التوالي. حتى ولو لم تظهر بصريا في الرسوم البيانية، وهناك ما بين الفرد التغير في تركيزات 17β-استراديول، مما يجعل معاملات التغير 27-183٪ في الفئران ومن 28 إلى 115٪ في الفئران مع أسلوب كبسولة silastic (متوسط ​​منخفض جدا تركيزات كثيرا ما تولد معاملات عالية من التباين). iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg &quot;/&gt; الشكل 2 الرسوم البيانية مجدد تقديم 17β-استراديول التركيزات في الفئران (أ، ن = 15). (4) والفئران (ب، ن = 10) 6 نتيجة للإدارة الهرمون يوميا في نوتيلا. طريقة نوتيلا بطريق الفم؛ بالفم يجعل قمم يوميا، لكن ليس بفارق كبير يصل إلى تنتجها تحت الجلد أو في الوريد طرق. هذا يقلد الدوائية البشرية العلاج بالهرمونات البديلة، والمعاملة بطريق الفم؛ بالفم يمكن المضي قدما لطالما لزم الأمر، حتى لو المثال أعلاه فقط تقديم أولي 96 ساعة. المناطق المظللة تتوافق مع تركيزات 17β-استراديول المصل الفيزيولوجي في إناث الفئران سليمة والفئران على التوالي. حتى ولو لم تظهر بصريا في الرسوم البيانية، وهناك ما بين الفرد التغير في تركيزات 17β-استراديول، مما يجعل معاملات التغير 40-132٪ في الفئران ومن 13 إلى 219٪ في الفئران مع أسلوب نوتيلا (متوسط ​​تركيزات منخفضة للغاية كثيرا ما تولد ارتفاعمعاملات التغير).

<ol>
	<li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-related+neuroprotective+versus+neurodamaging+effects+of+estrogens+in+rat+cerebral+ischemia:+a+systematic+analysis.">Dose-related neuroprotective versus neurodamaging effects of estrogens in rat cerebral ischemia: a systematic analysis.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 29, 1359-1372 (2009).</li><li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Holm, L., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+methods+for+administering+17beta-estradiol+to+ovariectomized+rats+result+in+opposite+effects+on+ischemic+brain+damage.">Different methods for administering 17beta-estradiol to ovariectomized rats result in opposite effects on ischemic brain damage.</a> BMC Neurosci. 11, 1471-2202 (2010).</li><li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormesis+and+Female+Sex+Hormones.">Hormesis and Female Sex Hormones.</a> Pharmaceuticals. 4, 15 (2011).</li><li>Isaksson, I. M., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+17beta-estradiol+administration+to+rats.">Methods for 17beta-estradiol administration to rats.</a> Scandinavian journal of clinical and laboratory investigation. , (2011).</li><li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+of+magnitude+differences+between+methods+for+maintaining+physiological+17beta-oestradiol+concentrations+in+ovariectomized+rats.">Order of magnitude differences between methods for maintaining physiological 17beta-oestradiol concentrations in ovariectomized rats.</a> Scand. J. Clin. Lab Invest. 68, 814-822 (2008).</li><li>Ingberg, E., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+long-term+17beta-estradiol+administration+to+mice.">Methods for long-term 17beta-estradiol administration to mice.</a> General and comparative endocrinology. , (2011).</li><li>Kalliokoski, O., Jacobsen, K. R., Hau, J., Abelson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+concentrations+of+buprenorphine+after+oral+and+parenteral+administration+in+male+mice.">Serum concentrations of buprenorphine after oral and parenteral administration in male mice.</a> Vet. J. 187, 251-254 (2011).</li><li>Simpkins, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogens+may+reduce+mortality+and+ischemic+damage+caused+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+female+rat.">Estrogens may reduce mortality and ischemic damage caused by middle cerebral artery occlusion in the female rat.</a> J. Neurosurg. 87, 724-730 (1997).</li><li>Wise, P. M., Dubal, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+protects+against+ischemic+brain+injury+in+middle-aged+rats.">Estradiol protects against ischemic brain injury in middle-aged rats.</a> Biol. Reprod. 63, 982-985 (2000).</li><li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats.">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 281, 1531-1539 (2001).</li><li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion.">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 25, 414-420 (2005).</li><li>Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+17beta-estradiol+upon+stroke+damage+in+stroke+prone+and+normotensive+rats.">Differential effects of 17beta-estradiol upon stroke damage in stroke prone and normotensive rats.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 24, 298-304 (2004).</li><li>Yong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+potentiates+ischemia-reperfusion+injury+in+diabetic+ovariectomized+female+rats.">17beta-estradiol potentiates ischemia-reperfusion injury in diabetic ovariectomized female rats.</a> Brain Res. 1054, 192-199 (2005).</li><li>Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+increases+brain+lesions+in+the+cortex+and+lateral+striatum+after+transient+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats:+no+effect+of+ischemia+on+galanin+in+the+stroke+area+but+decreased+levels+in+the+hippocampus.">Estradiol increases brain lesions in the cortex and lateral striatum after transient occlusion of the middle cerebral artery in rats: no effect of ischemia on galanin in the stroke area but decreased levels in the hippocampus.</a> Peptides. 26, 2257-2264 (2005).</li><li>Levin-Allerhand, J. A., Sokol, K., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safe+and+effective+method+for+chronic+17beta-estradiol+administration+to+mice.">Safe and effective method for chronic 17beta-estradiol administration to mice.</a> Contemp. Top Lab Anim. Sci. 42, 33-35 (2003).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

ثبت أن وسائل إدارة المعروضة أعلاه لها في الدراسات السابقة متفوقة على الكريات بطء الإفراج التجارية وحقن من حيث تنتج تركيزات مصل الفسيولوجية للاستراديول-17β. في حين الافراج بطيئة الكريات إنتاج عالية جدا وطويلة قمم تركيز مصل الدم، والحقن تسبب المدقع، والتقلبات الهرمون...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Rimadyl، 50 ملغ / مل </td><td> فايزر </td><td> 462986 </td><td> بعد العملية الجراحية للوعي بعد استئصال المبيض. </td></tr><tr><td> Lubrithal العين هلام </td><td> ليو مختبرات </td><td></td><td> حماية العين أثناء الجراحة. </td></tr><tr><td> Jodopax التعليم والتدريب المهني </td><td> Pharmaxim </td><td></td><td> جراحة التعقيم. </td></tr><tr><td> 4-0 خياطة Vicryl </td><td> جونسون آند جونسون </td><td></td><td> خاط الجرح وربط المبيض. </td></tr><tr><td> 17β-استراديول،&gt; 98٪ </td><td> سيغما </td><td> E8875-1G </td><td> في زيت السمسم لكبسولات silastic ونوتيلا. </td></tr><tr><td> زيت السمسم </td><td> سيغما </td><td> S3547-1L </td><td> حل 17β-استراديول. </td></tr><tr><td> Silastic الأنابيب، الهوية / التطوير التنظيمي: 1.575/3.175 مم </td><td> داو كورنينج </td><td> 508-008 </td><td> إنتاج كبسولات silastic. </td></tr><tr><td> قضيب خشبي عصا </td><td> Selefatrade </td><td> 12-0783 </td><td> متوجا من الكبسولات silastic. </td></tr><tr><td> نوتيلا </td><td> فيريرو </td><td></td><td> متوسطة لمدة بطريق الفم؛ بالفم استراديول-17β. </td></tr></tbody></table>

ovariectomy and 17&beta;-estradiol replacement in rats and mice: a visual demonstration

هرمون الاستروجين هي عائلة من الهرمونات الجنسية الأنثوية مع طيف واسع للغاية من الآثار. عندما تستخدم الجرذان والفئران في البحث هرمون الاستروجين وعادة ما ovariectomized من أجل يجتذ انتاج هرمون ركوب الدراجات بسرعة، لتحل محل خارجيا 17β-استراديول. هناك، مع ذلك، عدم وجود توافق في الآراء بشأن الكيفية التي ينبغي أن تدار هذا الهرمون على الحصول على تركيزات مصل الفسيولوجية. هذا أمر بالغ الأهمية منذ 17β-استراديول مستوى / إدارة طريقة عميقا يؤثر على النتائج التجريبية 1-3. لدينا في سلسلة من الدراسات تتسم أنماط مختلفة من 17β-استراديول الإدارة، وجدت أن كبسولات تحت الجلد silastic ولكل الفم نوتيلا الجوز كريم تعلو على الكريات بطيئة الافراج المتاحة تجاريا (التي تنتجها شركة بحوث مبتكرة من أمريكا) و حقن يومية من حيث تنتج تركيزات مصل الفسيولوجية لل17β-استراديول و 4-6. بين أدفantages طريقة الجوز كريم، الذي سبق واستخدمت لإدارة البوبرينورفين 7، هو أنه عندما تستخدم لإدارة الاستروجين أنها تشبه بطريق الفم؛ بالفم العلاج بالهرمونات البديلة، وهو غير الغازية. وsilastic كبسولات تحت الجلد هي مريحة وتنتج تركيزات مصل الأكثر استقرارا. هذه المادة تحتوي على فيديو خطوة بخطوة المظاهرات من استئصال المبيض و17β-استراديول بالهرمونات البديلة بواسطة كبسولات silastic ونوتيلا بطريق الفم؛ بالفم في الجرذان والفئران، تليها مناقشة جوانب هامة من الإجراءات الإدارية.

Watch this Scientific Journal Video about Ovariectomy and 17Î²-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration at JoVE.com

Ovariectomy and 17&amp;#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

وأظهرت استئصال المبيض واستبدال لاحق من استراديول، 17β بواسطة كبسولات silastic ونوتيلا بطريق الفم؛ بالفم في الجرذان والفئران.

استئصال المبيض و17β استراديول، مع تبديل في الجرذان والفئران: تظاهرة البصرية

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

ovariectomy-17-estradiol-replacement-rats-mice-visual

Research

JoVE Journal

Biology

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

56.7K Views.  Linköping University. وأظهرت استئصال المبيض واستبدال لاحق من استراديول، 17β بواسطة كبسولات silastic ونوتيلا بطريق الفم؛ بالفم في الجرذان والفئران.

Video: Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

A Magnetic Tether System to Investigate Visual and Olfactory Mediated Flight Control in Drosophila

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. As such, visual stabilization of upwind tracking directly aids in odor tracking. But do olfactory signals directly influence visual tracking behavior independently from wind cues? Also, the recent deluge of research on the neurophysiology and neurobehavioral genetics of olfaction in Drosophila has motivated ever more technically sophisticated and quantitative behavioral assays. Here, we modified a magnetic tether system originally devised for vision experiments by equipping the arena with narrow laminar flow odor plumes. A fly is glued to a small steel pin and suspended in a magnetic field that enables it to yaw freely. Small diameter food odor plumes are directed downward over the fly s head, eliciting stable tracking by a hungry fly. Here we focus on the critical mechanics of tethering, aligning the magnets, devising the odor plume, and confirming stable odor tracking.

Here we describe how to tether a fly in an olfactory magnetic-tether (OMT) apparatus. We describe how to align the rare-earth magnets and odor ports, and how to set mass flow rates for both the stimulus delivery and vacuum suction to achieve optimal odor tracking.

: نظام الحبل المغناطيسي بالتحقيق البصرية والشمية التحكم الطيران توسط في ذبابة الفاكهة

It has been clear for many years that insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals track odors carried in the wind. ...

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis. In some women the severe episodes of cyclic pain change and the resultant pain becomes continuous and this condition becomes known as Chronic Pelvic Pain. This state can be present even after the appropriate medical or surgical therapy has been instituted. It can be associated with pain and tenderness in the muscles of the abdomen wall and intra-pelvic muscles leading to severe dyspareunia. Additional symptoms of irritable bowel and interstitial cystitis are common. A common sign of the development of this state is the emergence of cutaneous allodynia which emerges from the so-called viscero-somatic reflex. A simple bedside test for the presence of cutaneous allodynia is presented that does not require excessive time or special equipment. This test builds on previous work associated with changes in sensation related to gall bladder function and the viscera-somatic reflex(1;2).
The test is undertaken with the subject s permission after an explanation of how the test will be performed. Allodynia refers to a condition in which a stimulus that is not normally painful is interpreted by the subject as painful. In this instance the light touch associated with a cotton-tipped applicator would not be expected to be painful. A positive test is however noted by the woman as suddenly painful or suddenly sharp. The patterns of this sensation are usually in a discrete pattern of a dermatome of the nerves that innervate the pelvis.
The underlying pathology is now interpreted as evidence of neuroplasticity as a consequence of severe and repeating pain with changes in the functions of the dorsal horns of the spinal cord that results in altered function of visceral tissues and resultant somatic symptoms(3). 
The importance of recognizing the condition lies in an awareness that this process may present coincidentally with the initiating condition or after it has been treated. It also permits the clinician to evaluate the situation from the perspective that alternative explanations for the pain may be present that may not require additional surgery.

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

A demonstration of the bedside test for cutaneous allodynia and its clinical implications.

مظاهرة Allodynia الجلدية في الشراكة مع ألم مزمن في الحوض

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis.  In some women the severe episodes of cyclic pain change and the ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment are open and allow cations to flow steadily inwards across the membrane, depolarizing the cell. Light exposure triggers the closure of the CNG channels, blocks the inward cation current flow, and thus results in cell hyperpolarization. Based on the polarity of photoreceptors, a suction recording method was developed in 1970s that, unlike the classic patch-clamp technique, does not require penetrating the plasma membrane 1. Drawing the outer segment into a tightly-fitting glass pipette filled with extracellular solution allows recording the current changes in individual cells upon test-flash exposure. However, this well-established "outer-segment-in (OS-in)" suction recording is not suitable for mouse cone recordings, because of the low percentage of cones in the mouse retina (3%) and the difficulties in identifying the cone outer segments. Recently, an inner-segment-in (IS-in) recording configuration was developed to draw the inner segment/nuclear region of the photoreceptor into the recording pipette 2,3. In this video, we will show how to record from individual mouse cone photoresponses using single-cell suction electrode.

We will show how to record flash responses from single mouse cones using a suction electrode.

تسجيلات شفط وحيدة الخلية المستقبلة من المخروط ماوس

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing and adult tissue. An advance in this concept is Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM), linking gene expression, cell fate, and cell behaviors in vivo, to create fate maps based on genetic lineage.
GIFM exploits X-CreER lines where X is a gene or set of gene regulatory elements that confers spatial expression of a modified bacteriophage protein, Cre recombinase (CreERT). CreERT contains a modified estrogen receptor ligand binding domain which renders CreERT sequestered in the cytoplasm in the absence of the drug tamoxifen. The binding of tamoxifen releases CreERT, which translocates to the nucleus and mediates recombination between DNA sequences flanked by loxP sites. In GIFM, recombination typically occurs between a loxP flanked Stop cassette preceding a reporter gene such as GFP.
Mice are bred to contain either a region- or cell type-specific CreER and a conditional reporter allele. Untreated mice will not have marking because the Stop cassette in the reporter prevents further transcription of the reporter gene. We administer tamoxifen by oral gavage to timed-pregnant females, which provides temporal control of CreERT release and subsequent translocation to the nucleus removing the Stop cassette from the reporter. Following recombination, the reporter allele is constitutively and heritably expressed. This series of events marks cells such that their genetic history is indelibly recorded. The recombined reporter thus serves as a high fidelity genetic lineage tracer that, once on, is uncoupled from the gene expression initially used to drive CreERT.
We apply GIFM in mouse to study normal development and ascertain the contribution of genetic lineages to adult cell types and tissues. We also use GIFM to follow cells on mutant genetic backgrounds to better understand complex phenotypes that mimic salient features of human genetic disorders.
This video article guides researchers through experimental methods to successfully apply GIFM. We demonstrate the method using our well characterized Wnt1-CreERT;mGFP mice by administering tamoxifen at embryonic day (E)8.5 via oral gavage followed by dissection at E12.5 and analysis by epifluorescence stereomicroscopy. We also demonstrate how to micro-dissect fate mapped domains for explant preparation or FACS analysis and dissect adult fate-mapped brains for whole mount fluorescent imaging. Collectively, these procedures allow researchers to address critical questions in developmental biology and disease models.

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Genetic Inducible Fate Mapping (GIFM) marks and tracks cells with fine spatial and temporal control in vivo and elucidates how cells from a specific genetic lineage contribute to developing and adult tissues. Demonstrated here are the techniques required to fate map E12.5 mouse embryos for epifluorescent and explant analysis.

نهج عملي لرسم الخرائط الوراثية محرض مصير : دليل مرئي لمارك وتعقب خلايا في فيفو</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research. Working confidently and humanely with mice and rats requires a basic competency in handling and restraint methods. This article will present the basic principles required to safely handle animals. One-handed, two-handed, and restraint with specially designed restraint objects will be illustrated. Often, another part of the research or testing use of animals is the effective administration of compounds to mice and rats. Although there are a large number of possible administration routes (limited only by the size and organs of the animal), most are not used regularly in research. This video will illustrate several of the more common routes, including intravenous, intramuscular, subcutaneous, and oral gavage. The goal of this article is to expose a viewer unfamiliar with these techniques to basic restraint and substance administration routes. This video does not replace required hands-on training at your facility, but is meant to augment and supplement that training.

Working safely and humanely with research rodents requires a core competency in handling and restraint methods. This article will present the basic principles required to safely handle and effectively administer compounds to mice and rats.

دليل ضبط النفس وطرق الإدارة المشتركة في مجمع الفئران والجرذان

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

التشخيص والتشريح والأنسجة عينة مختارة كوكتيل في الجرذان والفئران

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a novel Drosophila circadian output, called the temperature preference rhythm (TPR), in which the preferred temperature in flies rises during the day and falls during the night 3. Surprisingly, the TPR and locomotor activity are controlled through distinct circadian neurons3. Drosophila locomotor activity is a well&#160;known circadian behavioral output and has provided strong contributions to the discovery of many conserved mammalian circadian clock genes and mechanisms4. Therefore, understanding TPR will lead to the identification of hitherto unknown molecular and cellular circadian mechanisms. Here, we describe how to perform and analyze the TPR assay. This technique not only allows for dissecting the molecular and neural mechanisms of TPR, but also provides new insights into the fundamental mechanisms of the brain functions that integrate different environmental signals and regulate animal behaviors. Furthermore, our recently published data suggest that the fly TPR shares features with the mammalian BTR3. Drosophila are ectotherms, in which the body temperature is typically behaviorally regulated. Therefore, TPR is a strategy used to generate a rhythmic body temperature in these flies5-8. We believe that further exploration of Drosophila TPR will facilitate the characterization of the mechanisms underlying body temperature control in animals.

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

We recently identified a novel Drosophila circadian output, temperature preference rhythm (TPR), in which the preferred temperature in flies rises during the day and falls during the night. TPR is regulated independently from another circadian output, locomotor activity. Here&#160;we describe the design and analysis of TPR in Drosophila.

تصميم وتحليل سلوك تفضيل درجة الحرارة وإيقاعها Circadian في Drosophila

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a ...

Physiology Lab Demonstration: Glomerular Filtration Rate in a Rat

Measurements of glomerular filtration rate (GFR), and the fractional excretion of sodium (Na) and potassium (K) are critical in assessing renal function in health and disease. GFR is measured as the steady state renal clearance of inulin which is filtered at the glomerulus, but not secreted or reabsorbed along the nephron. The fractional excretion of Na and K can be determined from the concentration of Na and K in plasma and urine. The renal clearance of inulin can be demonstrated in an anesthetized animal which has catheters in the femoral artery, femoral vein and bladder. The equipment and supplies used for this procedure are those commonly available in a research core facility, and thus makes this procedure a practical means for measuring renal function. The purpose of this video is to demonstrate the procedures required to perform a lab demonstration in which renal function is assessed before and after a diuretic drug. The presented technique can be utilized to assess renal function in rat models of renal disease.

The purpose of this protocol is to demonstrate the principles and techniques for measuring and calculating glomerular filtration rate, urine flow rate, and excretion of sodium and potassium in a rat. This demonstration can be used to provide students with an overall conceptual understanding of how to measure renal function.

علم وظائف الأعضاء مختبر مظاهرة: معدل الترشيح الكبيبي في الجرذ

Measurements of glomerular filtration rate (GFR), and the fractional excretion of sodium (Na) and potassium (K) are critical in assessing renal function ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

التحقق من صحة نموذج الفأر لعرقلة ينك مجمعات بطريقة خلية محددة

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

In Vivo Detection and Analysis of Rb Protein SUMOylation in Human Cells

The post-translational modifications of proteins are critical for the proper regulation of intracellular signal transduction. Among these modifications, small ubiquitin-related modifier (SUMO) is a ubiquitin-like protein that is covalently attached to the lysine residues of a variety of target proteins to regulate cellular processes, such as gene transcription, DNA repair, protein interaction and degradation, subcellular transport, and signal transduction. The most common approach to detecting protein SUMOylation is based on the expression and purification of recombinant tagged proteins in bacteria, allowing for an in vitro biochemical reaction which is simple and suitable for addressing mechanistic questions. However, due to the complexity of the process of SUMOylation in vivo, it is more challenging to detect and analyze protein SUMOylation in cells, especially when under endogenous conditions. A recent study by the authors of this paper revealed that endogenous retinoblastoma (Rb) protein, a tumor suppressor that is vital to the negative regulation of the cell cycle progression, is specifically SUMOylated at the early G1 phase. This paper describes a protocol for the detection and analysis of Rb SUMOylation under both endogenous and exogenous conditions in human cells. This protocol is appropriate for the phenotypical and functional investigation of the SUMO-modification of Rb, as well as many other SUMO-targeted proteins, in human cells.

In Vivo Detection and Analysis of Rb Protein SUMOylation in Human Cells

Small ubiquitin-related modifier (SUMO) family proteins are conjugated to the lysine residues of target proteins to regulate various cellular processes. This paper describes a protocol for the detection of retinoblastoma (Rb) protein SUMOylation under endogenous and exogenous conditions in human cells.

في فيفو كشف وتحليل م ع سومويليشن البروتين في الخلايا البشرية

The post-translational modifications of proteins are critical for the proper regulation of intracellular signal transduction. Among these modifications, ...