فإن الكتاب أود أن أشكر تامي اسماعيلي لمساعدتها في إدارة المواد الاستهلاكية المختبرات. AA هو حاصل على منحة دراسية الدكتوراه من مركز التميز لأبحاث مرض الزهايمر والعناية، كلية العلوم الطبية، جامعة إديث كوان. MC يتلقى دكتوراه التمويل بدعم من نادي روتاري، بيرث. AM، وتمول GV، KT، وRNM من مؤسسة أبحاث الزهايمر في كوسكر.

<ol>
	<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+color+preference+in+zebrafish+for+learning+and+memory.">Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory.</a> J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).</li><li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish,+Danio+rerio.">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).</li><li>Best, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-associative+learning+in+larval+zebrafish.">Non-associative learning in larval zebrafish.</a> Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).</li><li>Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modulation+of+memory+formation+in+larval+zebrafish.">Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebra+fish:+an+uncharted+behavior+genetic+model.">Zebra fish: an uncharted behavior genetic model.</a> Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).</li><li>Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicotine+effects+on+learning+in+zebrafish:+the+role+of+dopaminergic+systems.">Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems.</a> Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).</li><li>Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+discrimination+learning+in+zebrafish+(Danio+rerio.">Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio.</a> Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).</li><li>Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+measures+of+anxiety+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio).</a> Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).</li><li>Delaney, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+interaction+and+distribution+of+female+zebrafish+(Danio+rerio)+in+a+large+aquarium.">Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium.</a> Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الزرد تنبع من نهر الجانج في شمال الهند وأصبحت شعبية في البحث في البالغين على حد سواء ومراحل اليرقات 2، التي استعرضها سبنس وآخرون. 3. الزرد تمتلك العديد من المزايا نماذج حيوانية أخرى مثل الخصوبة العالية، سهولة الصيانة، وإزالة البصرية الأجنة، التطور الجنيني السريع، وانخفاض تكاليف الصيانة. فهي قابلة للتلاعب الجيني 6 و مناسبة لفحص المخدرات عالية الإنتاجية 4،5. الإخصاب الخارجي الذي هو من هو مفيد للاستخدام من قبل علماء البيولوجيا التطورية. بسبب هذه الخصائص مواتية، الزرد تكتسب شعبية في مجال علم الوراثة 7، الدوائية 8، والبحوث السلوكية 9،10. هناك عدد من التحديات في الحفاظ على منشأة الزرد وتربية الزرد للحصول على الأجنة. هنا، نحن تصف تجاربنا والتوصيات في التصدي لهذه التحديات وسutline بروتوكول لصيانة النظام، والتغذية، وتربية وتربية اليرقات. نظام الصيانة للحفاظ على الزرد في حالة صحية جيدة، من المهم أن توفر لهم بيئة نظيفة في نظام الحوض يعمل بشكل صحيح. جزء مهم من هذا هو تغيير النظام بحيث الفلاتر بانتظام أن جميع الدبابات تلقي السليم تدفق المياه والمياه النظيفة. فمن الأهمية بمكان لتجنب فشل الدراجات إمدادات المياه إلى خزان كل ذلك بسبب أنابيب نظام المحظورة. يمكن تنظيفها باستخدام أنابيب تدفق أعلى من ضغط المياه العادية، وإذا لم يحدث انسداد. من الناحية المثالية، ينبغي الاستعاضة حوالي 10٪ من المياه يوميا للنظام جيد للحفاظ على نوعية المياه. وبدلا من ذلك، يمكن استبدال الماء أثناء تغيير علبة أو فلتر الكربون. وهذا يضمن أن تتم إزالة الأوساخ المودعة في الأنابيب التي تربط هذه الفلاتر. يجب فحص نوعية المياه على أساس منتظم. المعلمات مثل درجة الحموضة، القلوية، temperatوينبغي النظر لدى عودتهم، والصلابة، والأمونيا، والأكسجين الذائب، الملوحة، والتوصيل من العوامل الهامة في تمثيل نوعية المياه النظام (انظر الجدول 2 لمزيد من التفاصيل). في أقل تقدير النترات، ينبغي رصد درجة الحموضة، ودرجة الحرارة على أساس منتظم لضمان نوعية جيدة للمياه الزرد الإسكان. نترات المثالي (NO 3 -) مستويات &lt;50 ملغ / L 11، وإذا كان يمكن تقليل ارتفاع هذه المستويات من خلال استبدال الماء في نظام تداول مع المياه العذبة نظام. في بعض الأحيان، فلاتر لا يتناسب تماما وتسرب ذلك فمن المستحسن للتحقق من أي تسرب بعد تغيير الفلتر. إذا تم حظر تدفق المياه من الخزان الرئيسي إما بعد تغيير مضخة المياه أو تغيير عامل تصفية، يمكن استعادة تدفق المياه من قبل أي من تخفيف أو إزالة عامل التصفية لبضع ثوان لإطلاق سراح أي فراغ يتم إنشاء في الأنابيب. يمكن الوقت المطلوب لتغيير الفلاتر تختلف تبعا لعوامل مختلفة مثل مجموع س تحميل البيولوجيةن تودع النظام والنظافة من الفلاتر الأخرى، والأوساخ في الأنابيب. وبالتالي، ينبغي على الفور المرشحات يمكن تغييره إذا تظهر قذرة أو إذا كانت كافة الدبابات لا يحصلون على إمدادات المياه الصحيح. ويوصى أيضا أن يتم تنظيف السمك الصافي مع الايثانول 70٪، وتشطف في ماء لتطهير لها، ويترك ليجف قبل إعادة استخدامها. التجفيف يضمن تبخر الإيثانول الذي هو على خلاف ذلك سامة للأسماك. معظم النظم استخدام الزرد دي المكلورة ماء الصنبور، ولكن بعض النظم استخدام الماء منزوع الأيونات. من المهم للحفاظ على التوصيل للمياه نظام ما بين 300 و 1500 ميكرو ثانية ~ وهذا يقلل من الطاقة للحفاظ على الأسماك يحتاج أملاح الجسم. لذلك، لا يمكن أن يوضع في الزرد المياه منزوع الأيونات ما لم تتم إضافة الأملاح للحفاظ على مستويات التوصيل الأمثل. هناك خطر من الممكن تركيزات عالية من النحاس في الماء إذا تم استخدام نظام مياه الحنفية لأن فلتر الكربون لا يزيل النحاس. ولذلك، شيجب التحقق من وجود تركيزات السرس النحاس والنحاس الأنابيب تجنب حيثما أمكن ذلك. تغذية لا ينبغي أبدا أن نفرط الزرد لأن هذا قد يزيد من مستوى النترات في المياه، مما يؤثر على تكاثرها وربما 11 أو جدوى، حيث أن بعض الأسماك قد يموتون بسبب الإفراط في تناول الطعام. لا نوصي توفير المزيد من الغذاء خلال أي من التغذية 1 دبابة من الأسماك يمكن أن تنتهي في غضون 10 دقيقة. من المهم جدا لإزالة الملح من الماء المالح الروبيان قبل إطعامهم إلى الزرد وزيادة تركيز الملح يسبب الموت. إذا كانت هناك حاجة البيض أكثر الزرد، يمكن تناول السمك ثلاث مرات في اليوم. تنظيف خزانات الأسماك المربي يوميا يحسن أيضا مستويات إنتاج البيض. عندما يتغذى على أنظمة الموائل المائية ننتقل عادة قبالة مضخة مياه ومضخة الهواء للسماح للأسماك لتناول الطعام لمدة 10 دقيقة. هذا يقلل من كمية الطعام التي يتم غسلها في الفلاتر. ومع ذلك، يجب على المستخدمين توخي الحذر لعينييعيرها لتشغيل هذه المضخات بعد ذلك مرة أخرى. تربية وعادة ما تكون في الزرد حالة تربية الأمثل بين ~ 3 و 18 شهرا من العمر. لا ينبغي أن يؤديها تربية البشرى ليومين متتاليين 11؛ ومع ذلك، يمكن لا يمكن أن يؤديها في تربية اليومي للدبابات ودبابة عقد العديد من الأسماك مما يقلل من فرصة للزوج نفسه من الأسماك التي تربى لمدة يومين على التوالي. وينبغي الاضطلاع تربية على فترات منتظمة حتى لو لم يطلب البيض. وسوف تضمن هذه العملية هو الحفاظ على دورة تربية الأسماك. فمن المستحسن أن هناك أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء. ذكر الزرد تغيير شريكاتهم على أساس يومي لمدة 12 الذي يدعم المزيد من هذه التوصية. وعلاوة على ذلك، في غضون مختبرنا عانينا في البداية مشاكل مع تربية، ومع ذلك، باستخدام أكثر من الذكور الإناث في تربية انشاء ساعدت في حل المشكلة. وعلاوة على ذلك، والتغذية مع كونتي نسبة عالية من البروتينNT النظام الغذائي والأرتيميا 2-3 مرات في اليوم، والأسماك من الدبابات خلط مختلفة (من الآباء والأمهات مختلفة)، والحفاظ على درجة حرارة تربية انشاء ما بين 27 و 28 درجة مئوية، والضغط على البطون من الإناث مع أنابيب المبيض منعت استخدام تدليك لطيف زيادة تحسين إنتاج البيض. نوصي الاحتفاظ بسجل للخطوط الأسماك / أصول لتجنب في تربية بين الأشقاء. هذا يحسن من إنتاج الجنين. الاحتفاظ بسجل لعدد الأجنة التي وضعتها من كل خزان الأسماك ويوصى أيضا. هذا يساعد في الحفاظ على المسار من الدبابات تربية الأسماك أفضل واتخاذ تدابير لتحسين تربية الأسماك في وضع البيض لا. تربية اليرقات يجب تغذية اليرقات تبدأ في الفترة من 5 DPF (أيام الإخصاب آخر). ويمكن تغذية اليرقات الصغيرة مع الأغذية الجافة من ميكرون في الحجم 100 ~ (على سبيل المثال، ZM100) أو غذاء حي مثل المتناعلة والروتيفر (الذي يحفز النمو). يمكن ببطء حجم الطعام يمكن زيادةإلى 200 ميكرون (مثل ZM200) أو 300/400 ميكرون (مثل ZM300). وينبغي أن يكون من السكان البالغين الأسماك تكون حوالي 6-7 الأسماك لكل لتر من الماء. ويوصى هذه الممارسة لتحسين صيانة BOD (الطلب على الأكسجين البيولوجي) إلى الدبابات.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف / معدات </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td></td></tr><tr><td> الزرد المتداولة النظام </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> القصيبي قائمة بذاتها، مقعد بين كبار أنظمة </td><td></td></tr><tr><td> بيكربونات الصوديوم </td><td> سيغما الدريتش </td><td> S6297 </td><td></td></tr><tr><td> السمك مصدر الغذاء / الغذاء الجاف التغذية </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> AH19 </td><td></td></tr><tr><td> مجهر </td><td> OLYMPUS </td><td> SZX12 </td><td></td></tr><tr><td> الأغذية الجافة </td><td> ZM الغذائية الأسماك، UK </td><td> ZM100، ZM200، ZM300 </td><td></td></tr><tr><td> البيض محلول ملحي الروبيان </td><td> الملح كريك، وشركة، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> قسط الصف </td><td></td></tr><tr><td> في مربي للدبابات</td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> ITSTS-A </td><td></td></tr><tr><td> الكربون المنشط </td><td> بن Plax-الموالية للسرطان، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> PBC3MF </td><td></td></tr><tr><td> تربية الدبابات </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> SBTANK (1L) المربي صهريج-2 (2L) </td><td></td></tr><tr><td> البحر الاحمر الملح </td><td> البحر الاحمر الملح، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> متجر للحيوانات الاليفة المحلية / <a href="http://www.redseafish.com" target="_blank">www.redseafish.com</a> </td><td></td></tr><tr><td> المرشحات (علبة، ومنصات التصفية، والأشعة فوق البنفسجية) </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> <a href="http://www.aquatichabitats.com" target="_blank">aquatichabitats.com</a> </td><td></td></tr><tr><td> Siporax وسائل الإعلام </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> BF 820 </td><td></td></tr><tr><td> محلول ملحي الروبيان صافي </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> BSN1 </td><td></td></tr><tr><td> محلول ملحي الروبيان هاتشر </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> BS252 </td><td></td></tr><tr><td> يحير </td><td> الموائل المائية، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> <a href="http://www.aquatichabitats.com" target="_blank">aquatichabitats.com</a> </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> الجدول 1. جدول الكواشف محددة والمعدات المستخدمة في هذا البروتوكول. </td></tr></tbody></table>

regular care and maintenance of a zebrafish (danio rerio) laboratory: an introduction

يصف هذا البروتوكول الرعاية العادية وصيانة مختبر الزرد. الزرد تكتسب شعبية الآن في مجال علم الوراثة والبحوث الدوائية والسلوكية. كما من الفقاريات، تستخدم الزرد حصة كبيرة التشابه الجيني مع البشر تسلسل وكنموذج للحيوانات لمختلف الحالات المرضية البشرية. مزايا الزرد بالمقارنة مع غيرها من نماذج الفقارية شيوعا تشمل الخصوبة العالية، وانخفاض تكاليف الصيانة والأجنة شفافة، والتطور السريع. نظرا لحفز الاهتمام في البحوث الزرد، والحاجة إلى إنشاء والحفاظ على الإنتاجية مرفق الإسكان الزرد في تزايد أيضا. على الرغم من أن الأدب هو متاح لصيانة مختبر الزرد، وبروتوكول الفيديو موجزة غير متوفرة. هذا الفيديو يوضح البروتوكول العادية للسكن، تغذية، تربية اليرقات وتربية الزرد. هذه العملية سوف تساعد الباحثين على فهم السلوك الطبيعية والظروف المثلى لzebrafisح تربية، وبالتالي استكشاف الأخطاء وإصلاحها التجريبية التي تنشأ من ظروف تربية الأسماك. وهذا البروتوكول تكون عونا للباحثين تخطط لإنشاء مختبر الزرد، وكذلك لطلبة الدراسات العليا الذين يعتزمون استخدام الزرد ونموذج حيواني.

الزرد الإسكان وصيانة أسهل وأرخص من النماذج التقليدية القوارض. يمكن أن يضم عدة آلاف من الزرد في مختبر صغير. نتيجة لهذا البروتوكول، فإن الباحثين تكون قادرة على إدارة منشأة الزرد التي ستوفر ظروف صحية إلى الزرد. وبالإضافة إلى ذلك، سوف الرسوم التوضيحية التالية تساعد في تحديد البويضات المخصبة، الزرد الكبار، وطعامهم. ويرد مثال لالزرد الذكور (الشكل 1A) والزرد الإناث (1B الشكل و1C) للمساعدة الباحثين التمييز بين الذكور والإناث لتربية اسماك الزرد الغرض صورة 2 توضح وجهة نظر المجهرية؛ ردي محلول ملحي في 12X (الشكل 2A)، والأرتيميا واحد في 90X (الشكل 2B)، والبيض الأرتيميا غير مخصبة في 90X (الشكل 2C). وهذا سوف يساعد في فهم الفرق بين الماء المالح الروبيان غير مخصبة والمخصبة للسندإيه أغراض التغذية. وتظهر البويضات المخصبة وغير المخصبة في الشكل 3. الشكل 3A يوضح وجهة نظر المجهرية للأجنة مخصبة وغير مخصبة. أجنة غير مخصبة غير شفافة بشكل عام و / أو مع خلية تمزق (ق) داخل المشيماء (السهم الأسود)، في حين الأجنة المخصبة يبدو سليما والمتزايد للدولة انقسام الخلية التالية (للقراءة مفصلة لمراحل مختلفة من الأجنة الزرد انظر 1). أعلى عرض التكبير من الشكل المخصبة ويظهر البويضة غير الملقحة في الشكل 3B 3C وعلى التوالي. 4 يبين حامل البيض والزرد الأنثى لمساعدة الباحثين التمييز بين الذكور والإناث في الزرد. العديد من المشاكل الخطيرة التي قد تحدث في المختبر الزرد تشمل انسداد تدفق المياه إلى الفرد / جميع الدبابات في نظام الإسكان، وسوء نوعية المياه، وتسرب في أنابيب أو خزان للنظام تداول. وبالإضافة إلى ذلك،يمكن أن مشاكل في الحصول على أجنة من تربية يكون آخر قلق. وتناقش هذه القضايا من استكشاف الأخطاء وإصلاحها أدناه. <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. مثال على الزرد وذكر (A) والإناث الزرد (B، C). <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig2.jpg" alt="الشكل 2" /> الشكل 2. رأي مجهرية من محلول ملحي في ردي 12X (A)، وهو الأرتيميا واحد في 90X (B)، والبيض الأرتيميا غير مخصبة في 90X (C). <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig3.jpg" alt="الشكل 3" /> الشكل 3. مشاهدة مجهرية (16X) من البيض المخصب وغير مخصبة، حيث يتم فقط اثنين من البيض غير ملقح، وأشار بويضة غير مخصبة مع السهام السوداء (A). التكبير العاليعرض (90X) ل. المخصبة (B) والبويضة غير الملقحة (C) <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig4.jpg" alt="الشكل 4" /> الشكل 4. A الزرد الأنثى حامل البيض (المشار إليها مع السهم الأسود) التوضيح. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td fo:width="2in"> المعلمة </td><td fo:width="3in"> مجموعة الأمثل </td></tr><tr><td> القلوية </td><td> 50-150 ملغم / لتر كربونات الكالسيوم 3 </td></tr><tr><td> درجة الحموضة </td><td> 6،8-7،5 (6،0-8،5 التسامح) </td></tr><tr><td> درجة الحرارة </td><td> 26-28،5 ° C </td></tr><tr><td> صلابة </td><td> 50-100 ملغ / L 3 كربونات الكالسيوم </td></tr><tr><td> غير المؤينة الأمونيا </td><td> &lt;0.02 ملغ / L </td></tr><tr><td> النترات (NO 3 -) </td><td> &lt;50 ملغ / L </td></tr><tr><td> النتريت (NO 2 -) </td><td> &lt;0.1 ملغ / L </td></tr><tr><td> الأكسجين المذاب </td><td> &gt; 6.0 ملغ / L </td></tr><tr><td> التملح </td><td> 0،5-1 ز / L </td></tr><tr><td> الموصلية </td><td> 300 ميكرو ثانية -1500 </td></tr></tbody></table> الجدول 2. معلمات نوعية المياه. المعلمات نوعية المياه. الأمثل مجموعة من البارامترات البيئية في الحوض الزرد 11.

Watch this Scientific Journal Video about Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction at JoVE.com

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

هذا البروتوكول يحدد الصيانة الدورية والرعاية للحفاظ على الظروف المثلى لتربية اسماك الزرد. شريط الفيديو يوضح البروتوكول لصيانة النظام والإسكان العادية، والتغذية، والتربية، وتربية اليرقات الزرد.

العناية والصيانة العادية من اسماك الزرد (<em&gt; دانيو rerio</em&gt;) المختبر: مقدمة

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

regular-care-maintenance-zebrafish-danio-rerio-laboratory-an

Research

JoVE Journal

Biology

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

88.4K Views.  Edith Cowan University. هذا البروتوكول يحدد الصيانة الدورية والرعاية للحفاظ على الظروف المثلى لتربية اسماك الزرد. شريط الفيديو يوضح البروتوكول لصيانة النظام والإسكان العادية، والتغذية، والتربية، وتربية اليرقات الزرد.

Video: Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

الجسيمة والجميلة تشريح الأذن الداخلية الظهارة الحسية في اسماك الزرد الكبار ( دانيو rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work examining post-embryonic through adult cardiac development has been limited7-10. Examining the changing morphology of the maturing and aging heart are restricted by the lack of techniques available for staging and isolating juvenile and adult hearts. In order to analyze heart development over the fish's lifespan, we dissect zebrafish hearts at numerous stages and photograph them for further analysis11. The morphological features of the heart can easily be quantified and individual hearts can be further analyzed by a host of standard methods. Zebrafish grow at variable rates and maturation correlates better with fish size than age, thus, post-fixation, we photograph and measure fish length as a gauge of fish maturation. This protocol explains two distinct, size dependent dissection techniques for zebrafish, ranging from larvae 3.5mm standard length (SL) with hearts of 100&mu;m ventricle length (VL), to adults, with SL of 30mm and VL 1mm or larger. Larval and adult fish have quite distinct body and organ morphology. Larvae are not only significantly smaller, they have less pigment and each organ is visually very difficult to identify. For this reason, we use distinct dissection techniques.
We used pre-dissection fixation procedures, as we discovered that hearts dissected directly after euthanization have a more variable morphology, with very loose and balloon like atria compared with hearts removed following fixation. The fish fixed prior to dissection, retain in vivo morphology and chamber position (data not shown). In addition, for demonstration purposes, we take advantage of the heart (myocardial) specific GFP transgenic Tg(myl7:GFP)twu34 (12), which allows us to visualize the entire heart and is particularly useful at early stages in development when the cardiac morphology is less distinct from surrounding tissues. Dissection of the heart makes further analysis of the cell and molecular biology underlying heart development and maturation using in situ hybridization, immunohistochemistry, RNA extraction or other analytical methods easier in post-embryonic zebrafish. This protocol will provide a valuable technique for the study of cardiac development maturation and aging.

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

A clear, standardized method for dissection and isolation of the zebrafish heart at multiple developmental stages are described. Annotation and quantification techniques are also discussed.

تشريح القلب في اليرقات ، اسماك الزرد الأحداث والكبار ، دانيو rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

Here, we present methods for the development of assays to query potentially clinically significant nonsynonymous changes using in vivo complementation in zebrafish. Zebrafish (Danio rerio) are a useful animal system due to their experimental tractability; embryos are transparent to enable facile viewing, undergo rapid development ex vivo, and can be genetically manipulated.1 These aspects have allowed for significant advances in the analysis of embryogenesis, molecular processes, and morphogenetic signaling. Taken together, the advantages of this vertebrate model make zebrafish highly amenable to modeling the developmental defects in pediatric disease, and in some cases, adult-onset disorders. Because the zebrafish genome is highly conserved with that of humans (~70% orthologous), it is possible to recapitulate human disease states in zebrafish. This is accomplished either through the injection of mutant human mRNA to induce dominant negative or gain of function alleles, or utilization of morpholino (MO) antisense oligonucleotides to suppress genes to mimic loss of function variants. Through complementation of MO-induced phenotypes with capped human mRNA, our approach enables the interpretation of the deleterious effect of mutations on human protein sequence based on the ability of mutant mRNA to rescue a measurable, physiologically relevant phenotype. Modeling of the human disease alleles occurs through microinjection of zebrafish embryos with MO and/or human mRNA at the 1-4 cell stage, and phenotyping up to seven days post fertilization (dpf). This general strategy can be extended to a wide range of disease phenotypes, as demonstrated in the following protocol. We present our established models for morphogenetic signaling, craniofacial, cardiac, vascular integrity, renal function, and skeletal muscle disorder phenotypes, as well as others.

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

Here, we present a systematic approach for developing physiologically relevant, sensitive and specific in vivo assays for interpreting variation in human pathology. Transient genetic manipulation via microinjection of WT and mutant human mRNA and morpholino (MO) antisense oligonucleotides harness the tractability of the developing zebrafish embryo to rapidly assay pathogenic mutations, especially, but not exclusively, in the context of human developmental disorders.

في النمذجة فيفو من المهووسين الجينوم البشري باستخدام دانيو rerio

Here,  we present methods for the development of assays to query potentially clinically  significant nonsynonymous changes using in  vivo complementation ...

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of energy homeostasis and obesity. The small size of zebrafish allows for assays on embryos to be conducted in a 96- or 384-well plate format, Morpholino and CRISPR based technologies promote ease of genetic manipulation, and drug treatment by bath application is viable. Moreover, zebrafish are ideal for forward genetic screens allowing for novel gene discovery. Given the relative novelty of zebrafish as a model for obesity, it is necessary to develop tools that fully exploit these benefits. Herein, we describe a method to measure energy expenditure in thousands of embryonic zebrafish simultaneously. We have developed a whole animal microplate platform in which we use 96-well plates to isolate individual fish and we assess cumulative NADH2 production using the commercially available cell culture viability reagent alamarBlue. In poikilotherms the relationship between NADH2 production and energy expenditure is tightly linked. This energy expenditure assay creates the potential to rapidly screen pharmacological or genetic manipulations that directly alter energy expenditure or alter the response to an applied drug (e.g. insulin sensitizers).

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism for the study of energy homeostasis. By utilizing a NADH2 sensitive redox indicator, alamar Blue, we have developed an assay that measures the metabolic rate of zebrafish larvae in a 96 well plate format and can be applied to drug or gene discovery.

عالية الإنتاجية<em&gt; دانيو Rerio</em&gt; طاقة الإنفاق الفحص

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life cycle of Drosophila enables collection of large quantities of material from embryos, larvae, pupae and adult flies, in a synchronized way, at a low economic cost. A major strategy for propagating large numbers of flies is the use of a fly population cage. This useful and common tool in the Drososphila community is an efficient way to regularly produce milligrams to tens of grams of embryos, depending on uniformity of developmental stage desired. While a population cage can be time consuming to set up, maintaining a cage over months takes much less time and enables rapid collection of biological material in a short period. This paper describes a detailed and flexible protocol for the maintenance of a Drosophila melanogaster population cage, starting with 1.5 g of harvested material from the previous cycle.

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

صيانة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; عدد السكان قفص

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid decline in renal function and development of the clinical syndrome known as acute kidney injury (AKI). Pharmacological agents used to treat medical circumstances ranging from bacterial infection to cancer, when administered individually or in combination with other drugs, can initiate AKI. Zebrafish are a useful animal model to study the chemical effects on renal function in vivo, as they form an embryonic kidney comprised of nephron functional units that are conserved with higher vertebrates, including humans. Further, zebrafish can be utilized to perform genetic and chemical screens, which provide opportunities to elucidate the cellular and molecular facets of AKI and develop therapeutic strategies such as the identification of nephroprotective molecules. Here, we demonstrate how microinjection into the zebrafish embryo can be utilized as a paradigm for nephrotoxin studies.

Renal injuries incurred from nephrotoxins, which include drugs ranging from antibiotics to chemotherapeutics, can result in complex disorders whose pathogenesis remains incompletely understood. This protocol demonstrates how zebrafish can be used for disease modeling of these conditions, which can be applied to the identification of renoprotective measures.

سم كلوي حقن مكروي في الزرد لنموذج قصور كلوي حاد

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

Detecting Estrogenic Ligands in Personal Care Products using a Yeast Estrogen Screen Optimized for the Undergraduate Teaching Laboratory

The Yeast Estrogen Screen (YES) is used to detect estrogenic ligands in environmental samples and has been broadly applied in studies of endocrine disruption. Estrogenic ligands include both natural and manmade &#34;Environmental Estrogens&#34; (EEs) found in many consumer goods including Personal Care Products (PCPs), plastics, pesticides, and foods. EEs disrupt hormone signaling in humans and other animals, potentially reducing fertility and increasing disease risk. Despite the importance of EEs and other Endocrine Disrupting Chemicals (EDCs) to public health, endocrine disruption is not typically included in undergraduate curricula. This shortcoming is partly due to a lack of relevant laboratory activities that illustrate the principles involved while also being accessible to undergraduate students. This article presents an optimized YES for quantifying ligands in personal care products that bind estrogen receptors alpha (ER&#945;) and/or beta (ER&#946;). The method incorporates one of the two colorimetric substrates (ortho-nitrophenyl-&#946;-D-galactopyranoside (ONPG) or chlorophenol red-&#946;-D-galactopyranoside (CPRG)) that are cleaved by &#946;-galactosidase, a 6-day refrigerated incubation step to facilitate use in undergraduate laboratory courses, an automated application for LacZ calculations, and R code for the associated 4-parameter logistic regression analysis. The protocol has been designed to allow undergraduate students to develop and conduct experiments in which they screen products of their choosing for estrogen mimics. In the process, they learn about endocrine disruption, cell culture, receptor binding, enzyme activity, genetic engineering, statistics, and experimental design. Simultaneously, they also practice fundamental and broadly applicable laboratory skills, such as: calculating concentrations; making solutions; demonstrating sterile technique; serially diluting standards; constructing and interpolating standard curves; identifying variables and controls; collecting, organizing, and analyzing data; constructing and interpreting graphs; and using common laboratory equipment such as micropipettors and spectrophotometers. Thus, implementing this assay encourages students to engage in inquiry-based learning while exploring emerging issues in environmental science and health.

This article presents an optimized yeast estrogen screen for quantifying ligands in Personal Care Products (PCPs) that bind estrogen receptors alpha (ER&#945;) and/or beta (ER&#946;). The method incorporates two colorimetric substrate options, a six-day refrigerated incubation for use in undergraduate courses, and statistical tools for data analysis.

كشف "يغاندس إستروجين" في "منتجات العناية الشخصية" استخدام "الإستروجين الخميرة الشاشة الأمثل" "المختبر التدريس الجامعي"

The Yeast Estrogen Screen (YES) is used to detect estrogenic ligands in environmental samples and has been broadly applied in studies of endocrine ...

Anaerobic Growth and Maintenance of Mammalian Cell Lines

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that the incubation in normoxic (5% CO2 in air) or hypoxic (low oxygen levels) conditions followed by an anoxic incubation (an absence of free oxygen) results in limited viability (2&#8211;3 days). A novel methodology was developed that enables an anoxic cell cultivation (for at least 17 days; the maximum time tested). The most critical aspect of this methodology is to ensure that no oxygen is introduced into the system. This is obtained by the degassing of media, and by flushing tubes, dishes, flasks, and pipettes with an anaerobic gas mixture (H2, CO2, N2) followed by permitting the materials to equilibrate to the anoxic (non-oxygen) environment prior to usage.&#160;Additional care must be exercised when acquiring photomicrographs to ensure that the micrographs obtained do not contain artifacts. In the absence of oxygen, cell morphology is significantly altered. Two distinct morphotypes are noted for all anaerobically-grown cells. The ability to grow and maintain mammalian cells in the absence of oxygen can be applied to the analysis of cell physiology, polymicrobial interactions, and the characterization of biosynthetic pathways for novel cancer drug development.

Here, we describe a new method that enables the anaerobic long-term cultivation of established cell lines. The maximum survival time that was tested is 17 days. This method is suitable for the testing of cytotoxic agents and exploring the physiology of anoxically replicating cells.

نمو اللاهوائية وصيانة خطوط خلايا الثدييات

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that ...

Establishment and Maintenance of Gnotobiotic American Cockroaches (Periplaneta americana)

Gnotobiotic animals are a powerful tool for the study of controls on microbiome structure and function. Presented here is a protocol for the establishment and maintenance of gnotobiotic American cockroaches (Periplaneta americana). This approach includes built-in sterility checks for ongoing quality control. Gnotobiotic insects are defined here as cockroaches that still contain their vertically transmitted endosymbiont (Blattabacterium) but lack other microbes that normally reside on their surface and in their digestive tract. For this protocol, egg cases (oothecae) are removed from a (nonsterile) stock colony and surface sterilized. Once collected and sterilized, the oothecae are incubated at 30 &#176;C for approximately 4&#8722;6 weeks on brain-heart infusion (BHI) agar until they hatch or are removed due to contamination. Hatched nymphs are transferred to an Erlenmeyer flask containing a BHI floor, sterile water, and sterile rat food. To ensure that the nymphs are not housing microbes that are unable to grow on BHI in the given conditions, an additional quality control measure uses restriction fragment-length polymorphism (RFLP) to test for nonendosymbiotic microbes. Gnotobiotic nymphs generated using this approach can be inoculated with simple or complex microbial communities and used as a tool in gut microbiome studies.

Establishment and Maintenance of Gnotobiotic American Cockroaches Periplaneta americana

This protocol is used in establishing and maintaining gnotobiotic American cockroaches (Periplaneta americana) by surface sterilizing the egg cases (oothecae) prior to hatching. These gnotobiotic insects contain their vertically transmitted Blattabacterium endosymbionts but have axenic guts.

إنشاء وصيانة الصراصير الأمريكية الغنوتوبيوتية (Periplaneta americana)

Gnotobiotic animals are a powerful tool for the study of controls on microbiome structure and function. Presented here is a protocol for the establishment ...

Fluorescence In Situ Hybridization on DNA Halo Preparations to Reveal Whole Chromosomes, Telomeres and Gene Loci

The genome is associated with several structures inside cell nuclei, in order to regulate its activity and anchor it in specific locations. These structures are collectively known as the nucleoskeleton and include the nuclear lamina, the nucleoli, and nuclear bodies. Although many variants of fluorescence in situ hybridization (FISH) exist to study the genome and its organization, these are often limited by resolution and provide insufficient information on the genome&#39;s association with nuclear structures. The DNA halo method uses high salt concentrations and nonionic detergents to generate DNA loops that remain anchored to structures within nuclei through attachment regions within the genome. Here, soluble nuclear proteins, such as histones, lipids, and DNA not tightly bound to the nuclear matrix, are extracted. This leads to the formation of a halo of unattached DNA surrounding a residual nucleus which itself contains DNA closely associated with internal nuclear structures and extraction-resistant proteins. These extended DNA strands enable increased resolution and can facilitate physical mapping. In combination with FISH, this method has the added advantage of studying genomic interactions with all the structures that the genome is anchored by. This technique, termed HALO-FISH, is highly versatile whereby DNA halos can be coupled with nucleic acid probes to reveal gene loci, whole chromosomes, alpha satellite, telomeres and even RNA. This technique provides an insight into nuclear organization and function in normal&#160;cells and in disease progression such as with cancer.

Combining DNA halo preparations with fluorescence in situ hybridization enables high-resolution analysis of genomic interactions with the nucleoskeleton. Attached genome leads to hybridized fluorescent signals located within the residual extracted nuclei, whereas non-attached genome is in the halo of DNA surrounding the residual nuclei.